湖羊精液稀释液及冷冻保护剂的筛选

试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。     

卵黄在鸡精液冷冻保存中的应用研究

以Lake’s为基础稀释液,通过在鸡精液冷冻过程中添加全卵黄和不同浓度卵黄上清,探究卵黄及其离心处理在鸡精液冷冻中的应用效果。结果表明:与对照相比,稀释液中添加10%的全成分卵黄处理鸡精液冷冻保存后活率(22.33%)和活力(13.26%)显著下降(47.81%,42.55%),质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性也下降显著。卵黄经稀释和离心处理后,添加5%—15%的卵黄上清可提高鸡精液的冷冻保存效果,其中以10%的卵黄上清效果最佳,其冻后活率和活力可达58.93%和55.36%,显著高于对照组。当卵黄上清添加浓度达到25%时,冻精质量开始明显下降。综上,在鸡精液冷冻过程中,添加全卵黄成分不利于其冷冻保存;10%的卵黄上清可显著提高鸡精子的抗冻能力。     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

黑山羊精液冷冻稀释液配方的筛选

为筛选出提高黑山羊冷冻精液质量的最佳冷冻稀释液配方,试验分别用4个不同的稀释液配方,对15只湘东黑山羊进行精液的冷冻处理,通过观测平衡后精子活率、解冻后精子活力、顶体完整率、精子畸形率等几个特征性指标,可以看出稀释液配方Ⅳ效果最好,是用于黑山羊精液冷冻的最佳稀释液配方。其配方Ⅳ冷冻保存精液解冻后活力平均为0.3627、冻后顶体完整率为42.93%、精子畸形率为12.93%。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

稀释液及解冻条件对湖羊冻精质量的影响

为优化湖羊冻精生产工艺,提高冻精质量,以湖羊种公羊的精液为试验材料,分别选择7种稀释液进行处理,采用液氮熏蒸法进行冷冻,并设置不同解冻温度和时间进行交叉试验。结果表明:7号稀释液处理的湖羊精子在42℃和70℃两种解冻条件下的活力、活率、质膜完整率和顶体完整率均最高; 6种解冻条件中,70℃解冻5 s的解冻效果最佳,其活率、活力、质膜完整性和顶体完整率分别达50. 62%、43. 09%、40. 09%和54. 37%。综上,7号稀释液和70℃解冻5 s是湖羊精液冷冻的最佳稀释液和解冻条件。     

不同抗冻剂及初冻和解冻温度对鸡精液冷冻保存的影响

【目的】研究对不同抗冻剂及初冻和解冻温度在鸡精液冷冻保存中的效果.【方法】以‘海兰褐’种公鸡为试验材料,利用液氮制作颗粒冷冻精液,研究不同抗冻剂及初冻和解冻温度对鸡精液冻后活率、复苏率及存活时间的影响,并筛选出最佳的抗冻剂种类、浓度和初冻、解冻温度组合.【结果】3种抗冻剂组合的冷冻效果优于单一及两种抗冻剂组合,且GL 8%+DMA 6%+EG 6%组合的冻后活率、精子复苏率最高,分别为0.46和57.50%,为最佳抗冻剂组合;在此基础上,筛选出最佳初冻和解冻温度组合为-140℃和50℃,其冻后活率和复苏率最高,分别达到0.57和71.40%,并在15～25℃条件下精子存活时间为160min;在鸡精液冷冻保存中快速冷冻要对应快速解冻,慢速冷冻要对应慢速解冻,且前者精液冷冻保存效果较好.【结论】筛选出了最佳的抗冻剂组合及初冻和解冻温度,发现快速冷冻和解冻的鸡精液保存效果较好.     

萨福克肉羊精液冷冻保存技术浅析

为充分发挥和提高优良萨福克种公羊的利用率,本试验对进口萨福克肉羊精液冷冻保存技术进行研究,试验设计4个萨福克羊冷冻精液稀释液配方,pH值6.0~7.0,挑选14只健康成年种公羊,调教采精、制冻。结果显示:稀释液C的冷冻后精子活力显著高于稀释液A的冻后精子活力(P0.05),极显著高于稀释液B和稀释液D的冻后精子活力(P0.01);冻精在40~42℃解冻时精子活力效果最好。故使用稀释液C制作进口萨福克肉羊冷冻精液并在42℃解冻效果较好,可在生产实践中推广使用。     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

5种禽类卵黄低密度脂蛋白对猪精子冷冻效果的影响

为了确定具有最佳抗冷冻效果的禽类卵黄低密度脂蛋白(LDL)及其添加质量分数,在猪精液冷冻稀释液中分别添加质量分数为6%、7%、8%、9%和10%的鸡、鸭、鹌鹑、鸽子和鸵鸟的卵黄LDL,分析不同禽类的LDL对猪精子的冷冻保存效果。结果表明,稀释液中添加质量分数为9%的鸡、鸭、鹌鹑、鸽子卵黄LDL以及质量分数8%的鸵鸟卵黄LDL时,冷冻-解冻后精子活率最高,分别达到42.33%、35.63%、31.47%、47.33%和36.40%。以5种禽类LDL最佳质量分数配制冷冻稀释液冷冻精子,发现质量分数为9%的鸽蛋LDL冻存猪精子时解冻后精子活率达到47.33%,顶体完整性达到62.57%,质膜完整性达到48.13%,均显著优于其他处理组(P<0.05)。说明鸽子卵黄LDL对猪精子具有良好的冷冻保护性能,可提高猪精子抵抗低温打击的能力。     

不同稀释液对猪精液4℃保存效果的影响研究

[目的]利用改进的BF-5稀释液（命名为naBF5）,开发一种4℃液态保存猪精子的方法。[方法]把猪精子在LEN、BF5和mBF5这3种稀释液中4℃条件下保存5d,按照保存天数分别检测精子的活力、顶体形态、活率和ATP浓度并进行比较。[结果]在4℃条件下保存的1～2d,精子的活率在3种稀释液中没有显著的差异;但是第3天开始,3种稀释液中的精子活率有显著差异,在mBF5中保存的精子活率显著地高于在LEN和BF5中保存的精子。第1～5天,在mBF5和B巧稀释液中保存的精子正常顶体的百分率高于LEN稀释液中保存的精予;并且,在4℃保存5d后,在mBF5稀释液中保存的精子正常顶体的百分率要高于在BF5中保存的精子。在4℃条件下保存的第1～5天,mBF5稀释液中的精子活力百分率高于LEN和BF5稀释液保存的精子活力。在3种稀释液中,保存的第1～5天,精子活力的百分率都持续地降低。保存的第1～5天,mBF5稀释液中保存的精子ATP浓度比LEN和BF5稀释液中保存的高。保存5d之后3种稀释液中精子ATP浓度都迅速下降。[结论]在4℃条件下保存5d,与LEN和BF5稀释液相比,保存在mBF5稀释液中的精子表现出较高的活力、正常的顶体百分率、活率和ATP浓度。     

不同解冻方法对奶牛细管冻精活力的影响

研究探讨了不同解冻方法对0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的影响,细管冻精分别在5,15,40,75,90℃下不同时间（1～120 s）进行解冻操作,通过评定精子冻后活率、顶体完整率、尾膜完整率,筛选出最佳的奶牛细管冻精的解冻方法。结果表明：（1）奶牛细管冻精采用75℃解冻3 s,精子的活率最高,解冻效果最好;其次在接近体温40℃解冻20 s,效果也较好;在低温5℃和室温15℃解冻,精子活率低于0.3;在90℃高温解冻条件下不稳定,不适合生产使用;（2）90℃解冻精子的顶体完整率、尾膜完整率明显低于40℃和75℃,差异显著（P＜0.05）,但是精子畸形率却高于40℃与75℃的处理组（P＜0.05）,而后两者间差异不显著（P＞0.05）;（3）不同解冻温度解冻后精子在37℃时保持有效存活时间存在较大差异,表现为：40℃＞75℃＞90℃。因此,在生产实践中对奶牛细管冻精进行解冻时,可根据具体情况选用适合的解冻方法。若解冻后立即输精的,建议采用75℃下3 s解冻;解冻后不能立即输精的,为了使精子在较长时间内保持活力,宜采用40℃下20 s解冻。     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响#br#

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL^-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L^-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL^-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL^-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景     

不同稀释液对猪精液常温保存效果的研究

选取杜洛克公猪精液作为试验材料,比较5种稀释液对猪精液的保存效果,结果表明:用葡萄糖—柠檬酸稀释液,所保存精液的pH值、精子活率、精子畸形率等品质指标表现良好,且稀释液的成本低廉,自配简单易行,适于农村养猪户推行;基层常用的葡萄糖稀释液保存3 d时的精子活率性状表现不佳,仅适合于现配现用。BL─液(美国)稀释液的保存效果也比较好,但该稀释液组分复杂,配制较难,成本也较高,可在规模养猪场中推广。     

牛精液中药复方稀释液配方筛选研究

在种公牛精液商业稀释液的基础上,按6%、12%、24%和48%的4个水平向稀释液中分别添加4种中药复方提取液,制作0.25 ml细管冻精,解冻(40 ℃,10 s)后比较分析精子活率、顶体完整率、质膜完整性3个指标,以确定较优的中药稀释液配方.结果表明:添加了中药复方提取液的稀释液能更有效的冷冻保存牛精子细胞.其中,复方一和复方二的冷冻效果最佳.复方一在添加量为12%时精子活率、顶体完整率及质膜完整率分别为41.50%、40.14%和38.16%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.67%、3.92%和5.50%;复方二在添加量为6%时,精子活率、顶体完整率、质膜完整率3项指标分别达到41.33%、41.59%和40.00%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.50%、5.37%和7.34%.     

鸡精液稀释液筛选试验

本试验观察了13种稀释液在低温(3～5℃)和室温(15～25℃)下保存鸡精液的效果。根据预定标准,结果以谷氨酸钠的普通制剂——食用味精为主要成分的6号液、9—B液和9—C液被选为优等液。6号液在低温下精子生存指数为15.02±2.44(x±s),显著高于对照液的11.09±3.92(P<0.05)。9—B液和9—C液在低温下精子存活时间分别为35.5±6.38小时,34.4 3±7.78小时,显著高于对照液的27.07±7.89小时(P<0.05)。另外,4、5和7号液被选为良等液,其保存效果达到了对照液的水平(P>0.05)。     

细鳞斜颌鲴精子活力观察

为了解细鳞斜颌鲴精子的生理特性,采用实验生态-显微观察方法研究了几种因子对细鳞斜颌鲴精子活力的影响.结果表明,精子能激活的pH范围为5.0～10.58,精子活力较好的pH范围为6.0～7.84;pH 6.9时精子激活率达（89.00±1.0）％、运动时间达25.00±2.65 s、寿命达30.67±2.08 s.精子在1.0～7.0 g/L葡萄糖溶液中均有一定比例被激活,在6.0 g/L葡萄糖浓液中激活率达（89.33±0.94）％、运动时间达25.67±1.25 s、寿命达33.67±0.94 s.精子在2～7 g/L NaCl及KCl溶液中均能激活,在5 g/L NaCl及KC1溶液中活力较好;精子在0.2～0.5 g/L MgCl2及CaCl2溶液中激活率较低,在0.1、0.6、0.7 g/L MgCl2及CaCl2溶液中出现凝集现象.精子在低温4℃下保存3h活力与鲜精基本相同.D-19和Saad稀释液能有效抑制精子运动,且重新被淡水激活后活力较好,可考虑作为精子冷冻保存用稀释液.     

猪精液冷冻保存的初步研究

采用液氮熏蒸法制作猪冻精颗粒 ,对稀释液及冷冻保护剂进行优化筛选。结果表明 ,在 5种稀释液中 ,5号稀释液优于其他 4种 (P<0 .0 5 ) ;甘油的冷冻保护性能优于乙二醇和二甲基亚砜 (P<0 .0 1) ,其适宜浓度为2 m L/ L;稀释液中添加安钠咖可有效延长精子的冻后存活时间 (P<0 .0 1)。猪精液冷冻效果的关键因素是冷冻温度、冷冻速度和解冻温度 ,通过对不同温度情况的研究 ,初步制定了猪精液冷冻温度曲线。