长柄石杉中石杉碱甲的含量测定

[目的]建立HPLC法测定长柄石杉中石杉碱甲的含量。[方法]色谱条件:色谱柱为ZORBAX Extend-C18(150 mm×4.6 mm,4.5μm),流动相为乙腈-浓度0.02 mol/L磷酸二氢钾(8∶92,V/V),检测波长为310 nm,柱温为25℃,流速为1 ml/min,进样量为10μl。[结果]石杉碱甲在0.046～0.460μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(R=0.999 9),平均回收率为97.45%,RSD为2.70%,平均含量为0.025%。[结论]该方法简单、易行,可用于长柄石杉中石杉碱甲的含量测定。     

蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取研究

[目的]筛选蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳提取条件。[方法]采用纤维素酶酶解细胞壁,从而溶出更多的蛇足石杉细胞中的物质,并设计正交试验选出酶法提取的最佳提取条件。[结果]蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳工艺条件为纤维素酶用量0.125 g,酶解pH4.5,酶解温度60℃,酶解时间2.5 h;在此条件下,蛇足石杉中石杉碱甲的提取率为0.589‰;各因素中温度对纤维素酶的酶解效果影响最大。与酸提法相比,酶法提取的石杉碱甲的提取率提高了40.3%。[结论]该方法简便快捷、提取率高,可用来提取蛇足石杉中石杉碱甲。     

Determination on Huperzine A Content in Huperzia serrata( Thunb.) Trey.forma longipetiolata (Spring) Ching

[目的]建立HPLC法测定长柄石杉中石杉碱甲的含量.[方法]色谱条件:色谱柱为ZORBAX Extend-C18(150 mm×4.6mm,4.5μm),流动相为乙腈-浓度0.02 mol/L磷酸二氢钾(8:92,V/V),检测波长为310 nm,柱温为25℃,流速为1ml/min,进样量为10μl.[结果]石杉碱甲在0.046～0.460 μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(R =0.999 9),平均回收率为97.45％,RSD为2.70％,平均含量为0.025％.[结论]该方法简单、易行,可用于长柄石杉中石杉碱甲的含量测定.     

LC-MS法测定不同产地蛇足石杉石杉碱甲含量

建立起一套基于液相色谱串联质谱联用法(LC-MS)测定石杉碱甲(Hup A)含量的方法。样品用1.5%CH_3COOH提取总生物碱,在正离子模式下,采用离子监测模式(SIM)检测,定量分析离子为50~2 000 m/z,在Agilent ZORBAX SB-C18平台上(4.6 mm×250 mm),流动相(体积比)为甲醇∶水(90∶10),流速0.5μL·min~(-1),检测波长310 nm,柱温28℃,进样量10μL。结果表明,在前述试验条件下,Hup A在50~400μg·m L~(-1)浓度范围内线性关系良好(r=0.999 4)。利用该方法测定4产地蛇足石杉不同部位Hup A含量,结果显示,蛇足石杉叶和茎中的含量均是云南(玻璃温室种植)江西湖南福建。     

蛇足石杉组培快繁体系的研究

通过对蛇足石杉(Huperzia serrata)的组织培养进行系统研究,建立蛇足石杉的快速繁殖体系。结果表明,100 mg/L AAS+0.5 mg/L孔雀石绿组合对蛇足石杉外植体内生菌的抑制效果较好,外植体存活率为20%。蛇足石杉初代培养的最佳培养基为MS+蔗糖20 g/L+琼脂4.59 g/L+IBA 0.05μg/L+KT 1.4μmol/L+谷氨酰胺0.1 g/L+山农一号0.05%+TDZ 0.3 mg/L,诱导率达80%;继代培养中愈伤组织诱导在MS+1.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D的条件下,愈伤组织诱导率可达70%;诱导生根的最佳培养基为1/3MS+1.5 mg/L IBA+2.0 mg/L谷氨酰胺,生根率可达90%。     

草药蛇足石杉研究进展

石杉碱甲是治疗老年痴呆症最好的药物,蛇足石杉的石杉碱甲是石衫植物中含量最高的。本文从蛇足石杉内生真菌、组培灭菌、药用成分分离纯化及含量测定等方面的研究新进展进行综述。     

千层塔中石杉碱甲的提取方法选择

［目的］优化选择千层塔中石杉碱甲的提取方法。［方法］采用Hypersil ODS2 C18柱,以乙腈∶磷酸盐缓冲液（pH值2.5）=20∶80（体积比）为流动相,流速1.0 ml/min,用紫外检测器于310 nm波长处检测。用酸提取-氯仿萃取-甲醇定容与酸提取-碱调pH值-过滤上柱的方法进行对比试验,选择千层塔中石杉碱甲的最佳提取方法。［结果］石杉碱甲的浓度在5-55 μg/ml与其峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 7）,RSD=0.95%。采用酸提取-氯仿萃取-甲醇定容的方法比较好,方法简单,快速,检测准确。用该方法进行提取,测得千层塔中石杉碱甲含量为0.40%。［结论］为更准确地测量千层塔中石杉碱甲提供了可靠的依据。     

蛇足石杉茎尖灭菌方法与组织培养的研究

[目的]研究蛇足石杉组织培养的灭菌方法和培养条件。[方法]以野生孢子体茎尖为外植体,先用不同灭菌液单独或配合使用对外植体进行表面灭菌,将表面无菌外植体转到添加多种抗生素和孔雀石绿的培养基上杀灭内生菌,然后将外植体分别接种到不同的培养基上,筛选茎尖培养的最佳灭菌方法和培养条件。[结果]最佳表面灭菌方法为70%乙醇灭菌40 s,0.1%升汞溶液灭菌8 min,70%双氧水溶液灭菌10 min,培养2周,表面无菌率为63%。适宜的杀灭内生菌方法为表面无菌的外植体在附加0.5 mg/L孔雀石绿和100 mg/L抗生素AAS的培养基上培养4~6周,无菌率达52%。适宜的培养基为1/4MS矿质元素+1/2MS有机元素+2%蔗糖+4.5 g/L琼脂,pH5.8。在此培养基上茎尖外植体可生长出新枝,并可再生根。[结论]建立了蛇足石杉茎尖组织培养的灭菌方法且筛选出适合其生长的适宜培养基,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供实验基础。     

UPLC法测定槟榔提取液中的槟榔碱含量

[目的]建立以超高效液相色谱法(UPLC)测定槟榔提取液中槟榔碱含量的方法。[方法]采用Waters公司的ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,柱温35℃,流动相:乙腈-甲醇-0.1%冰醋酸溶液(每1 000 m L含磷酸二氢钾0.6 g,十二烷基磺酸钠1.0 g)=25∶20∶55,等度洗脱,进样量1.0μL,流速0.2 m L/min,检测波长215 nm。[结果]整个洗脱在5.0 min之内完成,槟榔碱在2.0 min左右出峰,峰型较好,且槟榔碱在0.013~0.663 mg/m L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999 8,平均回收率为98.1%,RSD为2.26%(n=5)。[结论]该方法操作简便、快速,灵敏度高,重复性好,可用于控制槟榔提取液及其制成方剂中槟榔碱的含量。     

HPLC法测定藏药八味獐牙菜丸中盐酸小檗碱的含量

[目的]建立藏药八味獐牙菜丸中盐酸小檗碱含量的测定方法。[方法]采用反相高效液相色谱法测定,色谱柱为依利特Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液(25∶75,V/V)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长为265 nm。[结果]在0.165 6~2.318 4μg范围内,盐酸小檗碱浓度与峰面积线性关系良好,R=0.999 5,平均回收率为97.30%,RSD为1.57%(n=6)。[结论]该测定方法快速、重现性好,可用于八味獐牙菜丸中盐酸小檗碱成分的含量测定。     

RP-HPLC法测定野花椒中木兰花碱的含量

[目的]建立反相高效液相色谱法测定野花椒中木兰花碱的含量。[方法]RP-HPLC法测定野花椒中木兰花碱含量的色谱条件:Phenomenex RP-C18色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5.0μm),乙腈-0.2%磷酸和0.2%三乙胺缓冲液(15∶85)为流动相,流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长268 nm。[结果]木兰花碱在0.307 2～1.843 2μg范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)为101.22%。[结论]该方法操作简便,结果准确,重现性好,适用于野花椒的质量评价。     

兽药三黄散超微粉中黄芩苷和盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法测定

[目的]建立兽药三黄散超微粉中黄芩苷和盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法测定方法。[方法]采用十八烷基硅烷键合硅胶柱ZORBAX Eclipse XB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,黄芩苷和盐酸小檗碱的检测波长分别为278 nm和347 nm,流动相:乙腈-2 m L/L磷酸水溶液(体积比25∶75),柱温30℃;流速1.0m L/min,进样量10μL。[结果]黄芩苷、盐酸小檗碱进样量分别在0.1180~1.1800、0.051 6~0.516 0μg(R2=0.999,n=6)范围内与其各自峰面积积分值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.696%、100.604%(n=6)。[结论]此方法精确、快速,重现性和精密度良好,可为兽药三黄散超微粉的质量控制及质量标准的建立提供技术支撑。     

3种抑菌剂对蛇足石杉内生真菌黑曲霉的抑制效果研究

[目的]探索3种抑菌剂对蛇足石杉内生真菌黑曲霉的抑制效果。[方法]采用平板涂布法分离获得供试菌,用菌丝生长速率法测定3种抑菌剂对黑曲霉的抑制效果。[结果]两性霉素B、苯甲酸钠、肉桂醛对黑曲霉的最低抑菌浓度分别为512.000 00 mg/L、4.00g/L、0.500 00 mg/L;EC50分别为1.910 00、150.000 00、0.120 00 mg/L,EC90分别为88.220 00、730.000 00、0.330 00 mg/L;3种抑菌剂中较优的抑菌剂为两性霉素B。[结论]该研究获得了3种抑菌剂的最低抑菌浓度,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供了试验基础。     

药用植物蛇足石杉内生菌研究进展

总结了近年来国内外研究成果,从物种多样性、次级代谢产物、生物活性、生物转化和菌株石杉碱甲高产策略5个方面对蛇足石杉内生菌的研究概况进行综述。蛇足石杉内生菌应用前景广阔,其价值有待于深入研究与开发。本文总结的研究方法亦可为其他植物内生菌的研究提供参考借鉴。     

HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量

[目的]测定钩藤提取物中有效成分钩藤碱的含量。[方法]采用HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量,色谱柱为DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为无水甲醇-水(60∶40,V/V)并含10 mmol/L三乙胺,冰醋酸调pH 7.5;柱温为30℃;流速为1.0ml/min;紫外检测波长为254 nm。[结果]钩藤碱浓度在11.0～110.0μg/ml范围内与峰面积的线性关系良好(R=0.999 6),平均回收率为96.84%,RSD为1.46%。[结论]该方法简单、快速、准确,可用于钩藤提取物中钩藤碱的含量测定。     

石杉碱甲的分离检测方法及主体植物源的研究进展

石杉碱甲是从石杉科植物蛇足石杉中提取的一种石松生物碱,是一种高效乙酰胆碱酯酶抑制剂,主要用来治疗老年性痴呆症(Alzheimer disease,AD)、重肌无力、增强学习记忆、改善空间记忆障碍等疾病.主要对石杉碱甲的分离检测方法、石杉碱甲源主体植物、石杉碱甲的微生物新来源等方面进行综述,提出发掘、利用石杉碱甲新资源,以解决目前石杉科植物中石杉碱甲含量低、用药需求受到限制的难题.     

天泰牌改善睡眠软胶囊的质量标准研究

本实验建立了天泰牌改善睡眠软胶囊的质量标准。薄层色谱法定性鉴别莲心碱;高效液相色谱法测定五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素含量。选择Diamonsil C_(18)色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水溶液(60∶40)为流动相,梯度洗脱,检测波长254nm,流速1.0mL/min,柱温25℃。结果,莲心碱的斑点清晰,分离度好;五味子醇甲在质量浓度24.88μg/mL~111.96μg/mL、五味子甲素在质量浓度22.46μg/mL~101.07μg/mL、五味子乙素在质量浓度20.42μg/mL~91.89μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.65%、99.45%、99.58%。所用方法简便可行,分离度好、重现性好,可作为天泰牌改善睡眠软胶囊的质量控制方法。     

生脉饮(党参方)的质量标准研究

[目的]建立生脉饮(党参方)的质量标准。[方法]用TLC法鉴别了党参、五味子、麦冬;用HPLC法测定了生脉饮(党参方)中五味子醇甲的含量。色谱柱为DiamonsilTMC18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),柱温为30℃,以甲醇-水(55∶45)为流动相,检测波长为250nm,流速1.0 ml/min。[结果]在TLC色谱中均能检出党参、五味子、五味子醇甲、麦冬;五味子醇甲在0.046 12~0.691 80μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.9%,RSD=1.5%。[结论]方法简便、准确、重现性好,可用于控制生脉饮(党参方)的质量。     

HPLD法测定复方石淋通胶囊中绿原酸的含量

[目的]建立复方石淋通胶囊中绿原酸含量的测定方法。[方法]采用高效液相法,色谱柱为ZORBAXSB-C18（5μm,4.6mm×250.0mm）,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液（8∶92,V/V）,流速为1.2ml/min,检测波长为327nm。[结果]绿原酸在0.04～0.08μg/ml范围内呈现良好线性关系,加样回收率为101.7%,RSD值为1.88%（n=6）。[结论]高效液相法测定复方石淋通胶囊中绿原酸的含量方法操作简单、准确、重复性好、精密度高、专属性强,可以作为复方石淋通胶囊的含量测定标准。     

液相色谱质谱法测定萤火虫荧光素

[目的]建立快速测定D-虫荧光素的液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)分析方法,并对荧光素的碎裂机理进行解析。[方法]采用Shim-pack VP-ODS(150 L×2.0 mm,5μm)色谱柱,甲醇、水梯度洗脱12min进行色谱分离;在质谱正离子模式下,用6对反应监测离子对(MRM)进行定性、定量分析。[结果]目标化合物在0.625～125.000μg/L线性关系良好(r=0.996 9),检出限为0.250μg/L(S/N为5)。[结论]该方法灵敏度高、选择性好,不仅可用于萤火虫发光机理、发光强弱差异、发光颜色差异方面的研究,还可以用于其他需要定量测定荧光素的研究。