实验室盲样考核过程中的质量控制

盲样考核是验证实验室检测能力,确保日常检测结果的准确性和可比性必须运行的一项质量控制活动。对盲样考核过程进行有效的质量控制,是通过盲样考核的必要条件。     

锦鲤疱疹病毒ORF1基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备

为了进行锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus Virus,KHV)诊断方法、疫苗研制和蛋白功能研究。通过选择基因保守性极强的ORF1基因作为研究对象,设计1对特异性引物进行PCR克隆。目的基因与表达载体PET构建重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)后诱导表达。再将成功表达的目的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。PCR产物经电泳显示,所扩增的基因长度774 bp,与目的基因长度相符。蛋白表达产物经SDS-PAGE和Western-bolt检测,重组表达质粒K1-PET成功诱导表达,表达蛋白为37.3 KD为包涵体。免疫小鼠获得多克隆抗体,经酶联免疫检测发现其效价达到1:27000,表明表达出的目的蛋白具有免疫原性,实验获得的表达蛋白和多抗血清为KHV的疫苗研制和免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

锦鲤疱疹病毒ORFl基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备

为了进行锦鲤疱疹病毒（Koi Herpesvirus Virus,KHV）诊断方法、疫苗研制和蛋白功能研究。通过选择基因保守性极强的ORFl基因作为研究对象,设计1对特异性引物进行PCR克隆。目的基因与表达载体PET构建重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌E．coliBL21（DE3）后诱导表达,再将成功表达的目的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。PCR产物经电泳显示,所扩增的基因长度774bp,与目的基因长度相符。蛋白表达产物经SDS．PAGE和Western-bolt检测,重组表达质粒K1-PET成功诱导表达,表达蛋白为37．3KD,为包涵体。免疫小鼠获得多克隆抗体,经酶联免疫检测发现其效价达到1：27000。表明表达出的目的蛋白具有免疫原性,实验获得的表达蛋白和多抗血清为KHV的疫苗研制和免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

食品微生物DNA能力验证样品的均匀性和稳定性研究

食品微生物DNA能力验证,是利用DNA检测方法,通过实验室间微生物检测结果的比对来确定实验室检测能力的活动。以沙门氏菌(Salmonella)基因组DNA为测试目标,开展了实验室间食品微生物DNA检测能力验证样品的制备,研究了DNA检测能力验证中样品的均匀性和稳定性,以期为食品微生物DNA能力验证的运作提供指导。     

转基因玉米和转基因大豆盲样检测方法

转基因作物商业化发展迅速,中国每年进口大量转基因产品并高度重视我国转基因作物研发,制定了转基因作物及其产品的监管制度。现实迫切需要一套简单、可靠的盲样转基因成分检测方法。该研究以转基因大豆盲样(W160982和W160984)和转基因玉米盲样(W160983和W160985)为研究材料,根据农业部的转基因检测标准,采用普通PCR技术对作物中转基因成分进行检测。通过与标准样品比对并测序,最终确定盲样的转基因成分,玉米盲样W160983转基因成分与标准品MON89034一致,W160985与TC1507一致;大豆盲样W160984与BPS-CV127-9一致,W160982与GTS40-3-2一致。该研究提供并验证了一套玉米和大豆转基因盲样检测的方案,在转基因作物研究生产、进出境检测、监管等方面具有实际应用价值。     

利用多重PCR技术同时检测6种棉花转化体的方法研究

【目的】建立1种转基因棉花多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。【方法】试验选择6种转基因棉花作为多重PCR检测对象,通过引物终浓度配比和引物退火温度的两要素全组合优化多重PCR反应体系,并分析方法灵敏度。【结果】多重PCR较优的MON1445、GHB614、MON15985、MON88913、LLCOTTON25、MON531引物终浓度为0.25、0.30、0.25、0.16、0.30、0.20μmol·L-1,较优引物退火温度为56℃,方法灵敏度为66个拷贝棉花基因组。利用盲样对上述体系的验证结果显示,所有盲样扩增条带与其含有的转基因转化体完全一致。【结论】本研究建立的体系可用于6种棉花转化体的快速检测。     

梨小食心虫实时荧光PCR检测技术的建立与验证

梨小食心虫（Grapholitha molesta）为我国常见蛀果性害虫,与其他梨果害虫的组织形态非常相似,仅凭形态学特征难以区分,需建立实时荧光PCR检测方法在基因水平上进行鉴定。通过样品核酸提取与质控,设计并验证荧光探针特异性,进一步通过优化反应条件和反应体系,结合特异性分析、灵敏性比对和盲样测试开发了梨小食心虫实时荧光定量PCR检测方法。结果表明：方法特异性强,重复性好（重复间变异系数为0.055~0.359）,可靠性高（标准曲线中的R2值为0.991）,检出限低（最低检出限3 pg/μL）,盲样测试结果与形态学鉴定结果一致,能满足日常检验检疫需求。该操作方法简单易行,检测时限短（约3 h）,通量高,特别适合于大批量的抽样检查,可应用于梨小食心虫的检疫工作。     

乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析

为提高实验室微生物检测能力,实验室参加由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌的检测能力验证计划。按照GB 4789.30—2016食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验第一法单核细胞增生李斯特氏菌定性检验对样品进行处理、培养,并对可疑菌落进行初筛及生化鉴定。样品18-X650未检出单核细胞增生李斯特氏菌25 m L,样品18-Y493未检出单核细胞增生李斯特氏菌25 m L。结果表明,中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织对该次试验结果评价为满意,对第三方人员对实验室的检测能力判断提供参考。     

奶粉中沙门氏菌盲样考核结果与分析

为了考核食品安全监督抽检机构沙门氏菌的检测能力,按照《沙门氏菌盲样考核作业指导书》的要求和GB4789.10—2016的方法对10件样品(编码为CODE 1~CODE 10)进行检验并对分离菌株进行血清分型。编号为CODE 2的样品检出S.Colindale,编号为CODE 5的样品检出S.Agona,编号为CODE 6的样品检出S.Liverpool和S.II。此次试验室盲样考核结果为"满意"。     

转基因抗虫玉米的定量检测

建立高效、快速、准确的抗虫转基因玉米MIR162转化体特异性实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法。采用SYBR Green I和Taqman探针2种定量方法对抗虫转基因玉米MIR162进行了检测研究。SYBR Green I法MIR162转化体特异性片段和内标基因zSSIIb的熔解曲线均表现为单一峰,扩增特异性强;二者的扩增效率均在90%~100%之间,标准曲线相关系数R2均大于0.998。2种定量方法的检测限(LOD)均为24个拷贝,定量限(LOQ)为48个拷贝,灵敏度较高。重复测试结果表明,SYBR Green I法的标准偏差(SD)变化范围为0.05~0.13,相对标准偏差(RSD)范围为0.17%~0.40%,Taqman探针法的SD变化范围为0.03~0.14,RSD范围为0.11%~0.44%,说明2种定量检测方法具有良好的重复性和精密度。对MIR162含量为3%、1%和0.5%的混合样品的定量结果为：3.13%、1.09%、0.53%（SYBR Green I法）和3.07%、1.02%、0.50%（Taqman探针法）,RSD均小于10%,T检验分析表明2种定量方法定值结果差异不显著。本研究建立的2种实时荧光定量PCR均可有效对转基因玉米MIR162进行定量检测,可根据不同实际需求及实验室条件进行选择相应的检测方法。     

燕麦中菌落总数检测能力验证研究

为了了解福建省福清市食品企业菌落总数检测能力,福清市质量技术监督局组织实施了燕麦中菌落总数检测能力验证工作,福清市45家实验室参加了本次能力验证。介绍了燕麦中菌落总数能力验证计划的实施过程,包括方案设计、样品设备、均匀性稳定性实验、结果统计能力评价,并对能力验证结果进行了技术分析和技术建议。结果表明,菌落总数检测满意结果率88.9%,参加能力验证的绝大多数企业能准确检测菌落水平,福清市食品企业的菌落总数检测人员具有较高的水平。出现可疑结果和不满意结果的企业多数是饮用水企业,应加强饮用水企业的出厂检验监管。     

黄曲霉毒素B_1检测能力验证分析

为确保实验室对黄曲霉毒素B1实验项目的检测能力,保证检测结果的可靠性,实验室在CNAS认可周期内参加了黄曲霉毒素B1能力验证活动。对能力验证的定义、目的、实施过程、统计方法及结果评价进行了介绍,并对黄曲霉毒素B1能力验证的测量结果进行了不确定度分析。黄曲霉毒素B1能力验证Z比分数为ZA=0.18、ZB=-1.35,能力验证获得满意结果。结果表明我中心黄曲霉毒素B1实验数据准确、可靠,CNAS认可项目有效。     

淡水鱼病毒性疾病的研究进展

为了更好地预防和治疗淡水鱼病毒病。综述了淡水鱼病毒病的研究情况。主要介绍了锦鲤疱疹病毒病、鲤春病毒血症、传染性胰腺坏死病毒病、传染性造血器官坏死症、病毒性出血性败血症等疾病的流行情况、国内外研究进展、病原学的研究、疾病的诊断与防治、并对淡水鱼病毒病研究中存在的问题进行了分析和探讨。旨在为淡水鱼病毒病的深入研究提供理论基础和科学依据。     

青岛崂山茶叶产量年景预报方法研究

通过气象因素对青岛市崂山地区茶叶产量年景的影响研究,确定了崂山地区茶叶产量出现歉年的主要农业气象灾害指标。基于崂山区1994—2016年茶叶产量资料与对应的气象资料,利用SPSS22.0统计分析系统,进行独立样本T检验、交叉表分析、x2检验等[,首先筛选出对茶叶产量年景影响显著的气象因子,再通过二元logistic回归分析,建立了崂山茶叶产量年景的农业气象预测模型。运用建立的模型对1994-2013年历史茶叶产量资料预报检验,“非歉年”的正确率为92.6%,“歉年”的正确率为83.3%;对2014-2016年预报,2014--2015年非歉年预报正确率为100%,2016年“歉年”的预报正确率为96.7%。研究结果表明：冬季日最低气温连续2天出现低于-10℃以下的低温天气,是崂山地区茶叶减产出现“歉年”的原因。因为冬季强寒潮天气会造气温急剧下降,当日最低气温连续2天低于-10℃以下时,崂山地区大田茶园土壤处于结冰状态,土壤水分移动和上升受到阻碍,此时茶树体内细胞结冰而遭受生理性冻害而死亡造成茶叶减产,研究结果对开展崂山地区茶叶气象服务与防灾减灾提供了理论依据。     

Resistance to Verticillium albo-atrum in lucerne (Medicago sativa L.) to distinguish between varieties

France is responsible for DUS (Distinction–Uniformity–Stability) testing of new varieties of lucerne (Medicago sativa L.) for several European countries. Many varieties fail to be registered because of a lack of distinctness from the already registered varieties. The addition of the other traits such as disease or pest resistance could help in distinction. The aim of the present study was to optimize measurement of the resistance of lucerne to Verticillium albo-atrum. Although the resistance to V. albo-atrum is a qualitative trait for each plant, varietal resistance is a continuous variable because each variety contains a variable percentage of resistant plants. Fifty cultivars were tested for V. albo-atrum in two laboratories at random from among five private and public laboratories. Five check varieties were tested in the five laboratories in two tests. A score of resistance, corrected from the effect of the test, was given for each cultivar. A method to validate any new test is proposed. This data set can now be incremented by the resistance scores to V. albo-atrum of new varieties. It will help in distinguishing between lucerne varieties.     

相同浓度PEG对不同甜菜种子萌发的影响

[目的]为了研究相同浓度PEG-6000在23℃时对不同甜菜种子萌发的影响,为种子引发研究奠定基础,[方法]本研究采用浓度为40%的PEG-6000分别对甜菜种子TD701(2017年)、TD703(2016年)、TD801(2015年)、TD301(2014年)进行处理,浸泡时间为24h、48h、72h,对发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数进行测定。[结果]结果显示,处理24h时,萌发效果较好的材料为TD701(2017年)和TD801(2015年)。处理48h时,萌发效果较好的材料为TD701(2017年)和TD703(2016年)。处理72h时,TD701(2017年)、TD703(2016年)和TD801(2015年)的萌发效果较好。综合比对,24h处理后的TD801(2015年)的发芽势最高,24h处理后的TD801(2015年)的发芽率最高,48h处理后的TD703(2016年)的发芽指数最高,48h处理后的TD703(2016年)的活力指数最高。[结论] 结果表明处理时间不同,种子贮藏年限不同对甜菜种子的萌发效果有影响。     

三江平原测土配方TRPF系统在大豆优化施肥中的应用

为验证三江平原测土配方施肥TRPF系统在大豆施肥中的应用效果,并对软件系统进行测试,于2013—2014年期间在不同地点设置不同的施肥处理,对大豆产量、产值、肥料投入和经济效益等项目进行测定与分析。研究结果表明:在佳木斯试验区,2013年和2014年高肥处理的肥料投入最大,分别为1380元/hm2和1374元/hm2,TRPF处理的收益均最大,较常规施肥处理每公顷分别增收706.9元和1254.1元,高肥处理产值排在第2位,但与3个TRPF处理比较经济效益较低;在国营八五三农场试验区内,2013年和2014年农民经验处理的肥料投入最大,分别为780元/hm2和765元/hm2,TRPF处理的收益均最大,较常规施肥处理每公顷分别增收2102.2元和1567.3元,较农民经验施肥处理每公顷分别增收1184.2元和1266.1元。本研究从增产率、肥料投入和经济效益角度验证了TRPF系统取得的良好效果。TRPF系统所出配方在收益方面均优于高肥处理、低肥处理、常规施肥、农民经验施肥和对照处理。     

成都市农产品产地环境安全评价及障碍因素研究

农产品产地环境安全作为农产品生产过程管理的基础和终端农产品消费安全的首要关口，是农产品数量与质量安全的重要保障。本研究基于PSR概念模型构建农产品产地环境安全评价指标体系，采用熵值法、综合指数法、模糊算法和障碍因素诊断模型对2010-2016年成都市农产品产地环境安全水平进行评价，识别其安全等级和主要障碍因素。结果表明：（1）受压力、状态和响应指标的综合影响，2010-2016年成都市农产品产地环境安全水平总体不高且具有明显的波动性，该期间压力安全指数、状态安全指数和响应安全指数与综合指数变化态势相似；（2）2010-2016年成都市农产品产地环境安全等级总体趋向提升，但也存在变动，2010年、2015年处于不安全等级，2011-2014年处于较不安全等级，2016年处于较安全等级；（3）2010-2016年成都市农产品产地环境安全的主要障碍因素是农药使用强度、农地畜禽粪便负荷、工业二氧化硫排放污染压力、城镇化率、酸雨频率、空气质量状况、环保支出占比，尤其是2014年以后，农药使用强度、城镇化率、空气质量状况、环保支出占比的障碍影响凸显；主要障碍维度是压力障碍度和状态障碍度，并且压力障碍度从2014年开始有所增大，状态障碍度从2014年开始逐渐减小。