潮霉素对紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响

潮霉素是当今基因工程中的一种转化选择剂。通过对苜蓿叶片诱导阶段、分化阶段施加不同浓度的潮霉素,确定潮霉素对紫花苜蓿叶片愈伤组织形成及其分化的影响。研究表明,潮霉素对紫花苜蓿叶片愈伤组织诱导与分化有显著的抑制作用。当潮霉素浓度达到15mg/L时苜蓿叶片完全无法诱导愈伤;愈伤和分化阶段都添加10mg/L潮霉素时,虽然可以诱导出愈伤组织但无法分化。因此建议在遗传转化时诱导愈伤阶段及分化阶段都添加10mg/L潮霉素。     

卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响

[目的]确定马齿苋遗传转化时适宜的卡那霉素筛选浓度。[方法]在诱导愈伤组织培养基和愈伤组织增殖培养基中添加不同浓度的卡那霉素,通过统计愈伤组织诱导率和愈伤组织增长率来研究卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响。[结果]卡那霉素对愈伤组织诱导的影响很大,当卡那霉素浓度为20 mg/L时严重抑制了愈伤组织的诱导,而其愈伤组织在卡那霉素浓度为100 mg/L时仍能少量生长,但随着卡那霉素浓度的增大,增长速度变慢,褐化程度逐渐增加。[结论]在进行马齿苋的遗传转化时,愈伤组织诱导阶段可采用20 mg/L卡那霉素作为选择压,如果直接以愈伤组织为转化受体,则可采用80 mg/L作为选择压。     

多油辣木PKM-1卡那霉素耐受性研究

[目的]筛选合适的抗生素浓度是植物基因工程的重要环节,研究多油辣木PKM-1愈伤组织诱导及分化植株阶段卡那霉素耐受性,确定相应阶段合适的筛选浓度,为开展辣木基因工程遗传改良奠定基础.[方法]设置5种卡那霉素浓度梯度,研究多油辣木无菌苗上胚轴、嫩叶以及由上胚轴诱导的愈伤组织,对不同卡那霉素浓度的响应.[结果]培养基中卡那...     

不同品种紫花苜蓿愈伤组织及分化体系的建立

[目的]建立不同品种紫花苜蓿的愈伤组织及分化体系。[方法]以4个品种的无菌苗子叶为外植体,研究不同的激素浓度及基因型对紫花苜蓿胚性愈伤组织诱导及分化的影响。[结果]4个品种诱导形成的愈伤组织差别不大;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH+2,4-D 2 mg/L+KT 0.05 mg/L;苜蓿王的分化率和出苗率表现较佳;最佳分化培养基为改良SH+KT 0.4 mg/L。[结论]该试验为今后筛选易分化的苜蓿品种和研究"转基因苜蓿疫苗"奠定了基础。     

抗生素对国槐愈伤组织诱导和生长的影响

由于不同植物不同外植体对抗生素的反应不同,在进行国槐农杆菌介导的遗传转化研究之前,必须对新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)有抗性的抗生素种类及其使用浓度进行探讨.结果表明,卡那霉素在浓度达到150mgL时仍然没有完全抑制国槐叶片和茎段的生长;而遗传霉素在低浓度下对国槐愈伤组织的诱导和生长的抑制作用较卡那霉素明显.随着遗传霉素浓度的增加,愈伤组织形成的频率降低,外植体的死亡率上升.当遗传霉素的浓度超过10mgL时,叶片和茎段愈伤组织的诱导和生长已完全受到抑制.另外,研究发现不同外植体对遗传霉素的敏感程度不同,茎段较强,叶片稍弱茎段的抗生素致死浓度在8～10mgL之间,叶片的抗生素致死浓度8mgL左右.     

抗生素对水生植物小对叶外植体分化的影响

[目的]研究小对叶对常用的抗生素的敏感性。[方法]将培养2周的小对叶无菌苗叶片切成0.5 cm×0.5 cm的小块,在添加不同浓度梯度的卡那霉素、潮霉素、壮观霉素和氯霉素4种抗生素的MS1培养基上进行培养,诱导其分化出芽,研究了4种抗生素对小对叶外植体分化的影响。[结果]一定浓度的抗生素对小对叶离体叶片的分化均具有抑制作用;确定了4种抗生素作为小对叶遗传转化研究的筛选标记的适宜浓度:卡那霉素为15 mg/L,潮霉素为10 mg/L,壮观霉素为60 mg/L,氯霉素为20 mg/L;小对叶对4种抗生素的敏感程度为:潮霉素>卡那霉素>氯霉素>壮观霉素。[结论]在进行遗传转化之前,对待转化材料进行抗生素敏感性测定是建立小对叶遗传转化系统的必然条件。     

亳菊叶片组织培养技术优化的研究

[目的]研究不同植物生长物质对诱导亳菊叶片愈伤组织诱导和不定芽分化的影响。[方法]以亳菊组培苗的叶片作为外植体,使用正接和背接2种方式接种于正交设计的培养基中,诱导叶片形成愈伤组织;再将愈伤组织接种于新配制的培养基中,对愈伤组织诱导率和芽分化率进行方差和极差分析。[结果]诱导亳菊叶片形成愈伤组织最佳的培养基组合为MS＋2.0 mg/L 2,4-D＋2.0 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L NAA;诱导愈伤组织分化成不定芽的最佳培养基是MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/LNAA。[结论]为亳菊的遗传转化体系构建和诱变育种提供了高效的操作系统。     

甘露糖对甘蔗外植体再生的影响

在甘蔗外植体再生体系的基础上,在甘蔗愈伤组织继代、胚性愈伤组织芽分化以及幼芽生根阶段的培养基中附加甘露糖,研究甘露糖对甘蔗外植体再生的影响,以确定用于甘蔗遗传转化筛选的最适浓度.结果表明,甘露糖对甘蔗茎尖愈伤组织诱导、愈伤分化和幼芽根形成均产生抑制作用.愈伤组织生长、分化、生根3个阶段的抗性筛选浓度分别为3-5、4-5和3 g.L-1.     

抗生素对甘菊愈伤组织诱导和植株再生的影响

以甘菊叶片为外植体,尝试不同浓度羧苄青霉素(Carb)、卡那霉素(Kan)和潮霉素(Hyg)对甘菊愈伤组织诱导和植株再生的影响.结果表明,潮霉素和卡那霉素都对愈伤组织诱导有抑制作用:对不定芽分化而言,以潮霉素和卡那霉素作为抗性筛选标记时,选择压都以5mg·L-1为宜.羧苄青霉素的抑菌效果较好,质量浓度应在300～500mg·L-1范围;潮霉素3mg·L-1、卡那霉素20mg·L-1为合适的转化植株生根培养的抗生素临界浓度.     

抗生素对悬铃木体外植株再生影响的研究

研究了卡那霉素(Kanamycine,简写为Ka)和头孢霉素(Cefotaxime,简写为Cef)对悬铃木外植体再生的影响.试验结果表明,Ka和Cef对悬铃木叶片愈伤组织诱导、芽分化和幼芽根形成都能产生抑制作用.在幼芽生根和叶片分化培养基中分别加入质量浓度为15mg·L-1和40mg·L-1Ka,叶片愈伤组织,幼芽和根的诱导率分别为0;在分化和生根培养基中分别加入质量浓度为500mg·L-1和800mg·L-1的Cef则可使愈伤组织、幼芽和根的诱导率为0.在叶片分化培养基中同时加入这2种抗生素,愈伤组织和幼芽诱导率为0的Ka+Cef的组合的质量浓度为30mg·L-1+400mg·L-1.试验结果对悬铃木基因工程操作有一定的参考价值.     

不同浓度的激素组合对猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的影响

[目的]寻求代替ZT提高猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的最佳激素组合。[方法]以美味猕猴桃离体茎段为外植体,以MS为基本培养基,附加2,4-D0.5、1、2.0mg/L和NAA0.1、0.3、0.5mg/L与6-BA0.5mg/L分别组成诱导愈伤组织的6个激素组合,并以同样浓度的2,4-D和NAA与6-BA1.0mg/L分别组成分化芽的6个组合激素,研究不同浓度的激素组合对猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的影响。[结果]6种不同浓度的激素组合对猕猴桃茎段愈伤组织均有一定的诱导作用,其中2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L的组合有利于愈伤组织诱导,诱导率达86.1%;绿色愈伤组织在MS培养基附加激素2,4-D+6-BA组合中芽的分化率很低,而在附加NAA+6-BA组合中芽的分化率较高,其中,NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L的组合有利于芽分化,芽分化率为75.2%。[结论]2,4-D与6-BA组合对猕猴桃绿色愈伤组织的芽分化有一定抑制作用。     

蓬莪术的离体快繁研究

[目的]探索蓬莪术的离体快繁技术。[方法]以蓬莪术嫩叶、块茎和根为外植体,接种在以MS为基本培养基,外加不同浓度激素组合的培养基上进行愈伤组织诱导、增殖和分化培养;以幼芽为外植体,进行幼芽的增殖、生根培养和移栽等。[结果]诱导蓬莪术叶、块茎和根的愈伤组织形成的最适培养基为MS＋2,4-D1.0 mg/L＋6-BA0.5～1.0 mg/L＋NAA0.3 mg/L,其中蓬莪术叶诱导率最高,达96%;愈伤组织增殖和分化培养还有待进一步研究。幼芽最适增殖培养基为MS＋6-BA3.0 mg/L＋NAA0.1 mg/L＋KT1.0 mg/L,其增殖倍数达3.5以上;而生根培养基以1/2 MS＋NAA1.0 mg/L＋6-BA0.5 mg/L为最佳,生根率达100%,其移栽成活率达85%以上。[结论]该研究结果为蓬莪术的快速繁殖及工厂化生产奠定了基础。     

海石竹叶片的离体培养与植株再生

[目的]研究海石竹叶片的离体培养及植株再生。[方法]以MS为基本培养基,对海石竹叶片的尖端、中部和基部3个不同部位进行了愈伤组织诱导、丛生芽和根分化的研究。[结果]以叶片尖端作为外植体诱导愈伤组织效果最佳,叶片中部次之,叶片基部最差。MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.75 mg/L培养基诱导叶片尖端愈伤组织的效果最好,MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.25 mg/L培养基诱导叶片中部和基部的效果最好;MS＋6-BA 3.0 mg/L＋NAA 0.10 mg/L培养基诱导丛生芽的效果最佳;MS＋NAA 0.20 mg/L培养基诱导生根的效果最佳。[结论]建立了海石竹高效的离体培养及快速繁育体系,为其种苗的规模化、工厂化生产和其他后续的科学研究奠定了基础。     

野生型拟南芥叶片愈伤组织诱导的研究

[目的]研究野生型拟南芥叶片愈伤组织的诱导。[方法]以野生型拟南芥叶片为外植体,通过将其切段后接种在添加有不同浓度6-BA和NAA的MS培养基上,研究了拟南芥愈伤组织的诱导和再生植株。[结果]6-BA对于愈伤组织诱导不可缺少,但其浓度太高易产生玻璃化;NAA单独使用利于生根,配合6-BA使用利于分化芽;获得最适愈伤组织诱导培养基为MS＋0.50mg/L6-BA＋0.10mg/LNAA,愈伤组织诱导率可达100%。[结论]为进一步开展拟南芥的遗传转化或细胞培养奠定了基础。     

不同玉米自交系幼胚愈伤组织诱导和分化的研究

[目的]通过对玉米幼胚培养,建立一套稳定性好、再生率高的组织培养体系.[方法]以4个玉米自交系幼胚为外植体,研究不同基因型、幼胚大小、2,4-D浓度、AgN03浓度对愈伤组织诱导的影响,进一步研究6 - BA和蔗糖浓度对愈伤组织分化及IBA和NAA对再生苗的生根影响.[结果]2,4-D浓度为2.0 ～3.0mg/L,幼胚长度为1.0～2.0 mm时,对胚性愈伤组织诱导有良好效果;在诱导期间采用隔代法添加10 mg/LAgNO3能提高胚性愈伤组织的诱导率;当6- BA为0.5 mg/L、蔗糖浓度为50 g/L时,愈伤组织分化率最高且有利于小植株的形成;IBA浓度为0.6 mg/L对植株生根较有利.[结论]对4个玉米自交系幼胚培养研究筛选出适宜玉米幼胚培养的最佳诱导、分化及生根培养基.     

不同激素配比对番茄下胚轴诱导与分化的影响

[目的]研究不同激素配比对番茄下胚轴诱导与分化的影响。[方法]以番茄栽培品种03HN31为试验材料,通过对番茄下胚轴的离体培养,研究不同激素配比对番茄下胚轴愈伤组织诱导、不定芽分化和根形成的影响。[结果]愈伤组织诱导和芽分化的最适培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L,有利于根形成的最适培养基为MS＋IAA 0.1 mg/L。[结论]该研究为番茄转基因研究、亲本的保存以及快速繁殖等工作奠定了基础。