宁夏永宁葡萄育苗圃根结线虫鉴定

对宁夏永宁县葡萄育苗圃中15个葡萄品种的根结线虫进行形态学和分子生物学鉴定。结果表明:宁夏永宁县葡萄育苗圃根结线虫病危害严重,不同葡萄品种的苗木感病症状表现不同。根据根结线虫雌虫和2龄幼虫的形态特征及雌虫会阴花纹,初步鉴定出该地区葡萄根结线虫的种类是南方根结线虫(Meloidogyne incognita)和花生根结线虫(M.arenaria)。利用根结线虫线粒体DNA(mtDNA)通用引物(C2F3/1108)及序列特异性扩增区(SCAR)特异性引物(MI-F/MI-R和Far F/Far R)对葡萄根结线虫的种类再次鉴定,鉴定结果与形态学鉴定结果一致。另外发现不同葡萄品种上根结线虫的种类与数量存在差异,南方根结线虫(M. incognita)占根结线虫群体的88.57%,为优势种群。     

南方根结线虫Mi-flp-16基因的克隆及原位杂交分析

以南方根结线虫2龄幼虫为材料，根据已知南方根结线虫flp基因的EST序列设计引物，利用末端快速扩增法（RACE）获得FLP基因Mi-flp-16的cDNA全长(GenBank登录号为EU549831)。该基因全长690 bp，包括一个528 bp的完整开放阅读框（ORF），编码一条176个氨基酸残基的多肽。序列分析表明Mi-flp-16编码3个FLP肽，即2个AQTFVRF和1个GQTFVRF。原位杂交结果显示此基因表达位置在围喉神经环。     

西瓜NBS类同源序列的克隆与分析(摘要)

R基因产物是植物抵抗病原物侵害的重要组成部分,在目前已经发现的植物抗病基因中,NBSLRR类占了绝大多数,在植物抗病基因中占有重要地位。NBS结构域是NBS-LRR基因编码蛋白中最保守的部分,含有8个保守基序,包括P-loop(又称Kinase-1a)、Kinase-2a、Kinase-3a和GLPL疏水结构域等。对西瓜NBS的克隆和分析将有助于筛选西瓜抗病基因及各种抗病基因的分子标记,而且通过对西瓜NBS的结构、表达和调控的研究,将有助于深入阐释西瓜的抗病机制。以根结线虫抗病西瓜材料‘红籽瓜’和感病西瓜材料‘ZDPI0006’为试材,根据西瓜NBS保守区设计简并引物及特异引物50对,根据葫芦科抗病基因序列在西瓜基因组数据库搜索同源序列,并以此设计特异引物1对,分别提取西瓜叶片g DNA和RNA并反转录成c DNA,采用PCR扩增西瓜抗病基因同源序列,琼脂糖电泳检测回收目标条带,克隆测序后结果提交到Gene Bank进行序列比对,提交至Pfam在线分析蛋白质功能,利用Clustalx与其他物种的抗病基因进行同源性分析,利用dnasp等软件进行序列多态性分析。结果表明,49对引物中共有43对引物在抗、感材料中成功扩增到目的片段,其中有4对引物在抗感材料中扩增出差异片段,简并引物W856在抗、感材料间扩增到一条约750bp的差异片段,测序结果提交至NCBI比对显示其与预测的黄瓜抗TMV的N端类似蛋白存在88%的同源性,根据葫芦科抗病基因在西瓜基因组数据库搜索同源序列设计的特异引物W6580在抗、感材料间扩增出大小一致的约800bp的片段,测序结果提交至NCBI比对,结果显示其与预测的黄瓜抗线虫类似蛋白存在90%的同源性,dnasp软件分析显示抗、感材料之间存在4个单核苷酸多态性位点。     

火龙果Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶序列的克隆及分析

【目的】克隆Ty3-gypsy类反转录转座子反转录酶(RT)序列并分析其特性,为火龙果遗传变异和进化研究提供新的信息。【方法】根据Ty3-gypsy类反转录转座子RT保守区设计简并引物,从红肉和白肉火龙果及其突变体中扩增出430 bp左右的目标片段,回收、克隆、测序获得RT序列,并进行生物信息学分析;采用RT-PCR检测其转录活性。【结果】共获得82条RT序列,其中有55条序列发生终止密码子突变,5条序列发生移码突变;经RT序列对比,火龙果与水稻、拟南芥有较高的同源性;3条RT序列具有转录活性。【结论】火龙果Ty3-gypsy类反转录转座子RT序列具有高度异质性,部分序列具有转录活性,与其他物种存在反转录转座子的横向传递。     

芜菁Br14-3-3的克隆及其在非生物胁迫下的表达分析

克隆了‘津田芜菁’（Brassica rapa subsp. rapifera‘Tsuda’）通用调节因子14-3-3基因cDNA序列，命名为Br14-3-3（GenBank登录号为MK896872）。该基因全长1 113 bp，开放阅读框全长774 bp，编码含有257个氨基酸的多肽。荧光定量PCR分析Br14-3-3在‘津田芜菁’不同组织中及其在温度、脱水、渗透、ABA和无机盐等非生物胁迫下幼苗中的表达，结果表明该基因在‘津田芜菁’的花中表达量最高，幼苗中次之；低温抑制了Br14-3-3的表达，其他非生物胁迫可诱导该基因表达，暗示Br14-3-3在非生物胁迫应答中发挥功能。     

西瓜抗根结线虫相关基因的克隆与表达分析

【目的】筛选西瓜(Citrullus lanatus)抗根结线虫相关基因,克隆其全长CDS序列,检测根结线虫接种后其在抗病材料和感病材料中的表达特征,分析其与西瓜根结线虫抗性的关系。【方法】以抗根结线虫的野生西瓜‘09005’和易感根结线虫的栽培西瓜‘ZDPI0006’为试材,用已知的植物抗线虫基因在葫芦科基因组数据库中比对,从结果中筛选到西瓜的相关基因Cla006580,与甜菜抗孢囊线虫基因Hs1~(pro-1)同源性达到65%,命名为Cla Hs1~(pro-1)。克隆Cla Hs1~(pro-1)基因的CDS区序列并进行生物信息预测分析,在根结线虫接种处理和CK处理72 h内利用q RT-PCR技术检测不同抗性的西瓜根系中Cla Hs1~(pro-1)的表达特征。【结果】从野生抗病西瓜‘09005’和栽培易感西瓜‘ZDPI0006’中均克隆得到Cla Hs1~(pro-1)基因,CDS区序列全长1 434 bp,编码478个氨基酸,含有Hs1pro-1_N和Hs1pro-1_C两个蛋白保守结构域,抗、感材料之间存在4个SNP位点。RT-PCR分析显示‘09005’在接种根结线虫后Cla Hs1~(pro-1)表达趋势呈先抑后扬,而在CK中呈先扬后抑,二者相反;‘ZDPI0006’在接种根结线虫后Cla Hs1~(pro-1)表达趋势呈先上扬后抑制再上扬,与CK中表达趋势一致。【结论】西瓜Cla Hs1~(pro-1)基因在抗病材料中表达特征与根结线虫接种密切相关,而在感病材料中与根结线虫接种无明显相关性,是西瓜抗根结线虫可能的候选基因。     

福建新记录入侵害虫木瓜秀粉蚧的分子检测鉴定

【目的】基于核糖体28S rDNA基因序列的种特异性PCR方法,快速鉴定福建新纪录入侵性害虫——木瓜秀粉蚧(Paracoccus marginatus Williams and Granara de Willink)。【方法】通过1对扩增粉蚧28S rDNA的通用引物(S3660/A335)扩增以木瓜秀粉蚧为靶标,以野外采集的另外10种粉蚧为对照的11种粉蚧的基因片段序列。根据所得基因序列结果并参照GeneBank数据库中已知粉蚧的28S rDNA基因序列,设计出木瓜秀粉蚧28S rDNA的种特异性引物(28S-ParF/28S-MarR),对该种特异性引物的效果进行检验。【结果】该种特异性引物对木瓜秀粉蚧的28S rDNA基因具有扩增能力,得到产物大小为446 bp的扩增片段,对其他10种粉蚧均无扩增效果。该引物不仅对木瓜秀粉蚧雌成虫具有稳定的扩增效果,对不同虫态、不同寄主来源以及不同地区来源的木瓜秀粉蚧均有稳定的扩增效果。【结论】对福建发现的木瓜秀粉蚧进行分子鉴定并建立了木瓜秀粉蚧快速分子检测技术,可用于识别和防控木瓜秀粉蚧,有助于遏制木瓜秀粉蚧的入侵危害。     

辣椒抗根结线虫基因Me3的精细定位

 以含Me3基因的抗根结线虫辣椒自交系‘HDA149’为父本,感根结线虫辣椒自交系‘8214’为母本,构建了一个2 133株的F2作图群体。采用群体分离分析法（Bulked Segregant Analysis,BSA）,构建抗、感病两个DNA池,对由两亲本筛选出来的285对引物进行扩增分析,发现引物SSCP_B322和EPMS658在抗、感池间具有稳定的多态性。继续用这两对引物对F2单株进行扩增,以JoinMap 3.0软件分析发现SSCP_B322和EPMS658标记位于Me3基因两侧,遗传图距分别为0.56 cM和1.33 cM。运用回交群体BC1和F3群体验证实了这两个标记,可有效用于辣椒抗线虫分子标记辅助育种,也为图位克隆Me3基因奠定了基础。     

苹果与梨远缘杂交种甘金和甘红果实品质特性评价及分子水平鉴定

【目的】对苹果与梨远缘杂交的优良品种甘金和优系甘红进行果实品质特性评价，并用特异性分子标记鉴定杂交种的真实性，为后期真杂种在抗逆育种研究领域应用提供理论支撑。【方法】对甘金和甘红树体的生长势和果实经济性状进行评价，将苹果金冠和西洋梨巴梨的基因组进行比对，分别筛选苹果和梨中特有的序列，通过设计属间特异性引物对甘金、甘红和亲本的DNA进行扩增。【结果】甘金和甘红树势生长健壮、抗逆性强和果实品质优。特异性引物M1、M2和M3在母本苹果品种中扩增出条带；P1、P2、P3这3对引物只能在父本梨品种中扩增出条带；2对通用引物U1和U2在苹果和梨杂交种中均能扩增出条带。此外，苹果M1、M2、M3和梨P1、P2、P3对杂交后代甘红、甘金进行扩增时，均出现条带，说明杂交后代既有苹果的基因，又有梨的基因。【结论】采用基因特异性分子标记开发的梨和苹果属间的特异性引物，鉴定远缘杂种的真实性，为苹果和梨以及其他果树的属间远缘杂交种的鉴定提供有价值的参考。     

利用PCR技术同时鉴定番茄抗根结线虫和抗斑萎病毒基因

 利用同一PCR反应体系，对分别与番茄抗根结线虫的 基因和抗斑萎病毒(1w V)的Sw一5基因紧密连锁的SCAR标记进行了同时扩增筛选，扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合，其中与基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记，抗感试材均产生750 bp的特异片段，纯合和杂合抗病基因型试材存在 I酶切位点，酶切后分别产生了570 bp、160 bp和750 bp、570 bp、160 bp的不同特异性片段，而感病基因型试材无 I酶切位点；与Sw一5基因紧密连锁的SCAR2标记为显性标记，只有抗病试材扩增出400 bD的特异性片段。经反复验证，结果稳定准确可靠，可用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。     

龙眼14-3-3基因的克隆与原核表达

 以龙眼(Dimocarpus longan Lour. ) 为试材, 应用同源克隆和RACE方法从花芽中获得了调控 蛋白14-3-3的全长cDNA序列, GenBank登录号为FJ479618 (GI: 218202931) 。该cDNA全长1 121 bp, 包括一个783 bp的开放阅读框, 编码261个氨基酸, 序列比较分析显示14-3-3 cDNA具有较高的保守性。半定量RT-PCR分析结果表明, 14-3-3 mRNA在龙眼叶芽、叶片、花芽和成熟的花中都有表达, 但在花芽中表达量最大。构建了pET14-3-3原核表达系统, 将14-3-3全长cDNA在大肠杆菌中表达, 获得一个分子量约为34 kD的可溶性融合蛋白, 经Western blotting验证, 该蛋白为14-3-3蛋白。     

14-3-3σ regulates p27 and inhibits Rat1-Akt cell proliferation

AIM: The present study was designed to investigate the effect of adenovirus-mediated 14-3-3σ on the proliferation of Rat1-Akt cells and to explore whether this effect is completed regulating p27.METHODS: The effect of Ad-14-3-3σ gene transfection on Rat1-Akt cell proliferation was observed by using 5-bromodeoxyuridine (BrdU).Then immunofluorescence and kinase assay were used to detect the effect of Ad-14-3-3σ on the phosphorylated level and intracellular location of p27.RESULTS: Ad-14-3-3σ-infected cells had fewer BrdU-positive cells (45%) than control (which was set at 100%).However,Ad-β-gal-infected cells had a high percentage of BrdU-positive cells (98%).14-3-3σ gene transfection downregulated phosphorylation level of p27 and decreased Akt-mediated intracellular location of p27.CONCLUSION: Transfection of 14-3-3σ gene suppresses the proliferation of Akt overexpession cell line Rat1-Akt.14-3-3σ decreases phosphorylation of p27 by downregulating Akt kinase,blocks Akt-mediated cytoplasm dislocation of p27,and inhibits proliferation of Rat1-Akt cells.     

14-3-3σ negatively regulates Akt and inhibits Rat1-Akt cell xenografts

AIM:The present study was designed to investigate the effect of adenovirus-mediated 14-3-3σ on Rat1-Akt cell xenografts and to explore whether the effect was mediated through negative regulation of Akt. METHODS:The effect of Ad-14-3-3σ on Rat1-Akt cells xenografts was observed in nude mice ex vivo and in vivo. Western blotting was used to detect 14-3-3σ protein,phospho-Akt (Thr 308), phospho-Akt (Ser 473), and phospho-(Ser/Thr) Akt substrate in tumor tissue after transfection of 14-3-3σ gene. RESULTS:The tumor volume was dramatically decreased and its emergence was delayed, regardless of using Ad-14-3-3σ-treated Rat1-Akt cells (ex vivo) or injected Ad-14-3-3σ in vivo, of which the effect of the continuously injected group was the best. Levels of Akt protein, phosphorylated Akt and phosphorylated Akt substrates in tumors obtained from Ad-14-3-3σ-treated mice were markedly less than those in PBS or Ad-β-gal-treated mice. CONCLUSION:14-3-3σ suppressed Akt overexpession in cells of Rat1-Akt xenografts by negatively regulating Akt.     

极早熟梨新品系—115—3—1

115－3－1梨是湖北省农科院果茶所用伏梨和金水酥梨杂交培育而成。果实近圆形，平均单果重230g，含水溶性固形物11．5％－13．2％。在武汉地区7月初成熟。现已在南方地区推广近200hm^2。     

以PMI为选择标记的露地菊转Lc-14-3-3基因体系的建立及功能鉴定

 从东北地区高pH盐碱地上生长良好的羊草中克隆Lc14-3-3基因，以露地菊（Chrysanthemum morifolium）‘火焰’叶片愈伤组织为受体，以农杆菌介导，将Lc14-3-3基因转入‘火焰’基因组中。以载体中的磷酸甘露糖异构酶基因（phosphomannose isomerase，PMI）为筛选标记，通过甘露糖的筛选，结合PCR、Southern杂交检测Lc14-3-3整合到其基因组。通过转基因植株与对照植株的耐盐性对比可见转化Lc14-3-3基因植株具有更高的耐盐能力。磷酸甘露糖异构酶基因/甘露糖筛选系统可有效应用于露地菊遗传转化。     

黄瓜果实弯曲相关基因Cs14-3-3 的克隆及表达分析

 以黄瓜（Cucumis sativus L.）果实易发生弯曲的品种‘长春密刺’为试验材料,采用RT-PCR 技术从果皮中分离并克隆了14-3-3 蛋白基因,并将此基因命名为Cs14-3-3。Cs14-3-3 基因cDNA 全 长792 bp,编码263 个氨基酸,分子量29 589.287 Da,等电点为4.585。生物信息学分析表明此基因含有 14-3-3 蛋白基因的典型结构域,与其他物种14-3-3 蛋白基因核苷酸序列同源性达到75%以上,编码的氨 基酸序列同源性达到85%以上,属于14-3-3 蛋白基因家族。同时,采用实时荧光定量PCR 方法对顺直果 实和弯曲果实腹部及脊部在果实开花的2、4、6、8、10、12 d 的基因表达量进行了研究。结果显示,在 果实发育各个时期,Cs14-3-3 的表达量均为在弯曲果实腹部 > 顺直果实 > 弯曲果实脊部的表达量;在 各个部位,Cs14-3-3 在果实开花2 d 的表达量明显高于开花后其他时期。试验结果表明,Cs14-3-3 基因为 黄瓜果实弯曲相关基因,在黄瓜果实开花早期发育过程中起重要作用。     

黄瓜枯萎病拮抗芽孢杆菌A7-3-14的筛选及鉴定

以从敦煌地区盐碱土壤中分离获得的19株细菌为试材,采用平板对峙法和菌丝生长速率法进行筛选,通过菌株形态特征、生理生化试验和16S rDNA序列分析进行鉴定,并采用盆栽试验测定所筛选的拮抗菌,研究了其对黄瓜枯萎病病原菌Fusarium oxysporum的防效,以期得到对黄瓜枯萎病病原菌具有较强拮抗作用的芽孢杆菌。结果表明:从敦煌地区盐碱地土壤中共分离出19株拮抗细菌,其中菌株A7-3-14拮抗作用最强,抑制率为79.22%,菌株鉴定为内生芽孢杆菌Bacillus endophyticus,盆栽防效结果表明该菌株发酵液对黄瓜枯萎病具有显著的防治效果,其处理后的黄瓜苗病情指数为28.14,防治效果达到69.77%。表明分离到的芽孢杆菌菌株A7-3-14可以用于黄瓜枯萎病的生物防治,且具有良好的效果。     

01-3A芹菜雄性不育材料的遗传特点研究

研究了芹菜雄性不育材料01-3A的不育度、遗传特点和稳定性.I2-KI染色法镜检发现,01-3A花药内没有成熟花粉粒,败育彻底.利用01-3A进行测交、回交、正反交得到的后代群体育性表现说明,01-3A不育性由细胞核内一时隐性基因控制,符合隐性核不育遗传模式,不受其他基因影响,不存在复等位基因或其他互作基因效应,而且与细胞质无关.01-3A不育性不受季节性温度变化影响.