生防菌株CAB-1抑菌物质产生的条件及其稳定性研究

[目的]探索生防菌株CAB-1的最优培养条件及其产生的抑菌物质稳定性。[方法]以黄瓜灰霉菌为靶标,分别采用改进牛津杯法和含药平板法测定抑菌物质活性,并对菌株CAB-1产生抑菌物质的发酵条件及抑菌物质特性进行了研究。[结果]菌株CAB-1产生抑菌物质的最适培养基为4号培养基,最佳发酵温度为31℃,最佳发酵时间为48h。菌株CAB-1所产的抑菌物质在60℃及其以下具有热稳定性;超声波（100W）处理20min对抑菌物质的活性没有影响,处理30min以上抑菌物质的活性显著下降;紫外线照射20、30、40min对抑菌物质的活性没有显著影响,照射50min后其活性显著降低;pH值为6、10、11时,抑菌物质的活性最高。[结论]该研究为利用生防菌株CAB-1开发新型微生物杀菌剂提供了依据。     

多粘芽孢杆菌Dw 6菌株培养条件的优化及其发酵液抑菌活性的初步研究

10倍稀释法筛选出最佳产抑菌活性物质的多粘类芽孢杆菌Dw-6菌株,试验表明Dw-6菌株最佳培养基为发酵培养基.利用4因素均匀设计方案进行培养基配方的优选,同时进行培养时间和发酵条件的优化.结果表明,Dw-6菌株优化后的培养基配方为(50 mL)蛋白胨3.83 g、酵母浸出粉3.9 g、MgSO4·7H2O0.105 g、K2 HPO4·3H2O 0.17 g,最佳培养时间48 h,初始pH 7.0,培养温度30℃.经培养基优化后,Dw-6菌株在培养基初始pH 7.0时,30℃培养48 h的发酵上清液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及出芽短梗霉菌均表现出很强的抑制作用.     

番茄早疫病拮抗放线菌10-4菌株的发酵条件

放线菌10-4菌株对番茄早疫病具有良好的拮抗效果,为进一步提高放线菌10-4菌株发酵液生产抑菌活性物质的产量,通过单因素和正交试验研究发酵培养液、培养温度、种龄、初始pH值、接种量等条件对10-4菌株抑制番茄早疫病病原菌效果的影响。结果表明,最佳发酵培养液配比为2.000 g可溶性淀粉、0.001 g FeSO_4、0.050 g NaCl、0.050 g K_2HPO_4、0.050 g MgSO_4、0.100 g KNO_3、100 m L蒸馏水。10-4菌株发酵的优化条件:温度为28~34℃,种龄为32 h,初始pH值为8,接种量为5%。正交试验结果表明,发酵条件的最优组合为A1B1C1,即发酵温度为28℃,发酵时间为72 h,装液量为60 m L(装液瓶为250 m L),此时10-4菌株生产抑菌活性物质的效果最好,生防放线菌10-4菌株的发酵培养液可有效抑制番茄早疫病病原菌,抑制率高达96.2%。     

海洋放线菌FA-F-5对水产病原菌的抑制作用

【目的】为了筛选可用于水生动物疾病防治的生防菌。【方法】以从福建琅琦岛海泥中分离得到的1株对多种水产病原菌具有较强抑制作用的菌株FA-F-5为研究对象,通过形态观察、生理生化测定、16SrDNA序列测定对其进行鉴定,并对其发酵条件和产生活性物质的理化性质进行了研究。【结果】初步判定菌株FA-F-5为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae);FA-F-5产生的抑菌活性物质的最佳发酵条件为:发酵培养基配方为麦芽糖15 g/L、黄豆粉25 g/L、CaCO31 g/L、K2HPO40.5 g/L,MgSO4.7H2O 0.5 g/L,海盐10 g/L,发酵培养基初始pH=8,培养温度25℃,种子液菌龄48 h,接种量100 mL/L,装液量100 mL/L,发酵时间7 d;该抑菌活性物质具有较好的热稳定性和pH稳定性;纸电泳试验证实该抑菌活性物质呈弱碱性。【结论】放线菌FA-F-5能够产生抑制多种水产病原菌的抑菌活性物质,有望开发成为新一代生物渔药的生防菌。     

响应面法优化乳酸乳球菌Z103菌株产抑菌物质的发酵条件

以分离于高原酸奶中的乳酸菌Z103为研究对象,通过单因素试验确定蔗糖、大豆蛋白胨、酵母浸膏、MgSO4、NaCl、牛肉膏、Na2 HPO4、(NH4)2 SO4、装液量、接种量、发酵温度和pH值对产抑菌物质活力的影响,应用响应面法的Box-Behnken设计对产抑菌物质发酵条件进行优化.结果表明,当发酵液pH值7.0、装液量40 mL、大豆蛋白胨含量9.6 g/L时可获得抑菌物质最大抑菌圈直径为1.350 cm,优化后乳酸菌产抑菌物质的效价较优化前提高了41.17％.该模型能科学地预测抑菌物质的合成情况.响应面法可有效、成功地优化抑菌物质的发酵条件.     

红景天内生放线菌Hj3发酵条件及其发酵产物抑菌活性初探

【目的】探究红景天内生放线菌——变异链霉菌Hj3(Streptomyces variabilis)的发酵条件、抑菌机制及对采后番茄早疫病的防治效果,为该潜在生防菌的开发利用奠定重要的理论与实践基础。【方法】采用菌丝生长速率法筛选Hj3抑菌物质产生的最佳培养液、接种量,利用正交试验设计探讨培养温度、培养转速、培养液初始p H值等条件,测定Hj3的生长曲线、抑菌物质产生曲线、Hj3抑菌物质对番茄早疫病菌产孢和孢子萌发的影响及对采后番茄早疫病的防治效果。【结果】在4号培养液(乳糖15 g、玉米粉4 g、K_2HPO_4 0.8 g、KCl 0.2 g、CaCO_4 1.6 g、水1 000 m L、p H 7)中接入8%Hj3种子液,28℃150 r/min震荡培养,在第4天时培养液中的活菌数最大,在第5天时Hj3发酵液的抑菌率达到最高;Hj3抑菌物质可明显抑制番茄早疫病菌孢子的产生和萌发,对采后番茄早疫病的防治也有一定效果。【结论】探讨出的发酵条件有利于Hj3抑菌物质的后续研究及应用,进一步明确其抑菌机制为Hj3的实际应用提供了更加充分的理论支持。     

鹅膏菌产抑菌物质培养条件优化及安全性分析

经前期试验验证鹅膏菌菌株AV对杨树烂皮病病原菌金黄壳囊孢菌有抑制作用,通过比色法和生物量测定结果得出其抑菌物质产生的最佳营养条件。在供试营养物质中,乳糖为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源,方差分析结果表明,碳源是鹅膏菌AV生物量及其抑菌物质产生的最主要影响因素,与其他营养元素差异显著(α=0.05)。培养基最佳组合为:①乳糖30.0 g/L,蛋白胨0.5 g/L,MgSO41.5 g/L,KH2PO44.5 g/L;②乳糖10.00 g/L,蛋白胨0.50g/L,MgSO40.75 g/L,KH2PO44.50 g/L;③乳糖30.0 g/L,蛋白胨2.0 g/L,MgSO41.50 g/L,KH2PO43.0 g/L。液体发酵培养时,菌株AV产生抑菌活性物质的最适培养条件为:pH值5～6,温度25℃,接种量1.25%,装液量50%,摇床转数180 r/min,培养时间20 d。当温度超过75℃,pH大于9或小于4时,或者紫外照射时间超过4 h都会使抑菌物质活性降低。小鼠毒性试验结果表明,小鼠饲喂菌株AV菌丝体,LD50为418.70 mg/kg,95%可信限为453.11～386.90 mg/kg,抑菌物质控制在2 g/L以内对小鼠无影响,因此,在进行病原菌防治时,为减少对环境中其他生物的影响,菌株AV抑菌物质质量浓度应低于2 g/L。     

Optimization of Cultivation Conditions and Security Analysis of Antifungal Substance from Amanita sp.i

经前期试验验证鹅膏菌菌株AV对杨树烂皮病病原菌金黄壳囊孢菌有抑制作用,通过比色法和生物量测定结果得出其抑菌物质产生的最佳营养条件.在供试营养物质中,乳糖为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源,方差分析结果表明,碳源是鹅膏菌AV生物量及其抑菌物质产生的最主要影响因素,与其他营养元素差异显著(α=0.05).培养基最佳组合为:①乳糖30.0 g/L,蛋白胨0.5 g/L,MgSO41.5 g/L,KH2PO44.5g/L;②乳糖10.00 g/L,蛋白胨0.50g/L,MgSO40.75 g/L,KH2PO44.50 g/L;③乳糖30.0 g/L,蛋白胨2.0 g/L,MgSO41.50 g/L,KH2PO43.0 g/L.液体发酵培养时,菌株AV产生抑菌活性物质的最适培养条件为:pH值5～6,温度25℃,接种量1.25％,装液量50％,摇床转数180 r/min,培养时间20d.当温度超过75℃,pH大于9或小于4时,或者紫外照射时间超过4h都会使抑菌物质活性降低.小鼠毒性试验结果表明,小鼠饲喂菌株AV菌丝体,LD50为418.70 mg/kg,95％可信限为453.11～386.90 mg/kg,抑菌物质控制在2 g/L以内对小鼠无影响,因此,在进行病原菌防治时,为减少对环境中其他生物的影响,菌株AV抑菌物质质量浓度应低于2 g/L.     

小枣黑疔病拮抗放线菌的筛选与发酵优化

【目的】筛选蒙自小枣黑疔病链格孢拮抗放线菌,并优化发酵条件。【方法】以小枣黑疔病链格孢为指示菌,以肾茶26株、臭灵丹17株内生放线菌和大庆油田12株土壤放线菌作为供试菌,采用滤纸片法筛选高拮抗放线菌,进而通过单因子试验优化发酵条件。【结果】筛选到一株分离自肾茶根部、抑菌带宽达13.6 mm的拮抗菌株BEG-46,其最佳培养基组成和最佳培养条件为1 000 mL培养基中含葡萄糖2 g、酵母粉20 g,蛋白胨2 g,NaCl 4 g,CaCO_34 g,初始pH值为自然,发酵温度28℃,发酵周期为7 d;优化后BEG-46发酵液抑菌活性提高了118.3%。【结论】拮抗放线菌BEG-46的发酵液抑菌活性在优化条件下显著提升。     

枯草芽孢杆菌HAB-1产生抗菌物质的最优发酵条件

为筛选适合Bacillus subtilis HAB-1生长和抑菌物质产生的最佳培养基和最佳培养条件,采用摇瓶培养法和平板对峙法,通过单因子试验筛选适合菌株HAB-1生长的碳源、氮源、金属离子及最佳培养条件。结果表明,经摇瓶发酵培养筛选到适合菌株HAB-1生长及其拮抗物质产生的最佳碳源为蔗糖和玉米粉,最佳氮源为酵母粉和麸皮,最佳金属离子是K＋。用正交试验法确定了使HAB-1具有较强抗菌活性的最优培养基为zY,其各组分的质量浓度为：蔗糖10g·L-1,玉米粉30g·L-1,酵母粉30g·L-1,麸皮40g·L-1,KH2P041g·L-1;在确定适合该菌株的培养基组分基础上,对其培养条件进行优化试验,结果表明,初始pH为6．0,培养温度为37℃,250mL摇瓶装液量为60mL,接种量的体积分数为2％,培养时间为24h,转速为190r·min-1时为该菌株的最佳培养条件,获得菌株HAB-1活菌数最多且对橡胶树炭疽菌的抑菌活性最强,活菌数和抑菌直径分别为2．6×1010·mL-1。和34．0mm,较NB培养的HAB-1提高了123．81倍和1．10倍。     

白桃成熟胚试管苗培养研究

以白桃成熟胚为试验材料,无菌萌发获取试管苗,并筛选出试管苗培养最合适的增殖及生根培养基。研究结果表明,白桃试管苗培养最适合的增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L,增殖系数为3.45。生根率最佳诱导培养基为1/4 MS+IBA 0.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L,生根率为82.22%。生根数最佳诱导培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L,生根数为5.96。     

藻百年的组培快繁技术研究

[目的]研究藻百年（Exacum tetragonum）的离体培养和快速繁殖技术。[方法]利用藻百年的茎尖和茎段作为外植体进行组织培养和快速繁殖。[结果]结果表明,MS＋6-BA2mg/L＋NAA0.2 mg/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂8 g/L为最适诱导培养基;MS＋6-BA1 mg/L＋NAA0.1 mg/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂8 g/L为最适增殖培养基,1/2 MS＋NAA0.3 mg/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂8 g/L为最适生根培养基。[结论]该研究可为其他龙胆科植物的组织培养与快速繁殖提供方法参考。     

葡萄未成熟胚诱导体细胞胚发生和植株再生与遗传鉴定

以二倍体和四倍体葡萄杂交获得的未成熟合子胚为材料,诱导体细胞胚发生。采用的初生胚诱导培养基(SE培养基)为:NN69+1.80 mg.L-1NAA+0.4 mg.L-1水解酪蛋白+2 g.L-1活性炭+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂;次生胚诱导培养基分别为:3/4MS+0.35 mg.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(扩繁培养基)和MS+1.5 g.L-16-BA+0.2 g.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(胚状体萌发培养基)。结果表明:初生胚诱导率为11.11%和16.67%,体细胞胚在扩繁培养基上再生植株。利用流式细胞仪和SSR标记检测源自同一未成熟合子胚(胚珠)的不同株系的遗传稳定性,结果显示,所测植株均为三倍体,且都来自杂交所得的未成熟合子胚。本研究所建立的体细胞胚诱导方法及遗传稳定性检测技术,能够为植物材料保存、扩繁,转基因应用和研究植物发育及极性建成等提供途径。     

辣木快速繁殖体系

研究通过对辣木种子消毒方法、增殖阶段6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)浓度、生根阶段吲哚丁酸(IBA)浓度、移栽炼苗时间进行筛选,确定辣木种子适宜的消毒方法为75%的酒精浸泡30s后用1%NaClO消毒15 min;增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂(pH5.8);生根培养基为1/2 MS+0.4mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂(pH5.8);移栽时炼苗6d较适宜。由此建立了辣木快速繁殖体系,为规模化生产辣木提供参考。     

大花蕙兰与朱砂兰杂种根状茎增殖和分化的研究

以大花蕙兰与朱砂兰杂交种子萌发后形成的根状茎为试验材料,采用KT、6-BA和NAA三种外源激素对杂交兰根状茎进行实验,比较不同激素对根状茎增殖和分化的影响。单因素实验中,随着激素KT、6-BA浓度的增加,杂交兰根状茎的增殖率和分化率逐渐增加,但不成正比例关系。NAA浓度一定时,6-BA浓度为3 mg/L时,杂交兰根状茎的平均增殖率最高达到290%,6-BA浓度为4 mg/L时,根状茎的平均分化率最高达到85.64%;KT浓度为2.5 mg/L时,平均增殖率最高为300%;KT浓度为3.0 mg/L时,根状茎的平均分化率最高为87.89%。三种激素复合添加对杂交兰根状茎增殖和分化效果最佳。增殖效果最佳的培养基为1/2 MS+6-BA 3.0 mg/L+KT 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+琼脂粉7.0 g/L+香蕉80 g/L+蔗糖30 g/L+活性炭1 g/L,根状茎粗壮且长,增殖率高。分化效果最佳培养基为1/2 MS+6-BA 4.0 mg/L+KT 2.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+琼脂粉7.0 g/L+香蕉80 g/L+蔗糖30 g/L+活性炭1 g/L,分化苗生长良好,叶色深绿。本研究为杂交优株实现工厂化育苗奠定了一定的理论基础。     

大花萱草组织培养研究

采取大花萱草茎尖为外植体接种在不同培养基上,研究了不同浓度的NAA和6-BA对于外植体生长的影响,并探索了最适于产生愈伤组织和生根的培养基配方。结果表明,有利于外植体产生愈伤组织的培养基配方是MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+30g糖+8g琼脂;适合愈伤组织诱导生芽培养基配方是MS+6-BA1.0mg·L-1+30g糖+8g琼脂;适合幼苗生根的培养基配方是1/2MS+NAA0.5mg·L-1+30g糖+8g琼脂。     

芭蕉芋良种组培及块茎快繁技术研究

为促进芭蕉芋良种的推广使用及芭蕉芋产业的健康发展,以芭蕉芋为材料进行了组培技术及块茎芽片繁殖技术的研究.结果表明,芭蕉芋茎尖诱导的培养基最佳组合为MS+6-BA 2.5mg/L+NAA0.5 mg/L+琼脂8g/L+蔗糖30 g/L+GA3 0.5 mg/L+ZT 2.0 mg/L+DVP 0.5 g/L(或AC 0....     

连香树组织培养及植株再生体系的初步研究

连香树是连香树科连香树属、第三纪古热带的孑遗植物,为我国珍稀濒危二级保护树种,具有极高的科研、经济及观赏价值。试验对连香树无菌体系的建立及植株再生技术进行了研究。结果表明:(1)连香树外植体的最佳消毒方法为0.1%升汞消毒12min;(2)芽增殖最佳培养基:MS+6-BA 1.0mg.L-1+NAA 0.5mg.L-1+GA32.0mg.L-1+蔗糖30g.L-1+琼脂7.0g.L-1,pH 6.0;(3)愈伤诱导的最佳培养基:MS+6-BA 0.1mg.L-1+2,4-D 2.0mg.L-1+蔗糖30g.L-1+琼脂7.0g.L-1,pH 6.0;(4)生根培养基:1/2MS+IBA 1.0mg.L-1+6-BA 0.1mg.L-1+蔗糖20g.L-1+琼脂6.8g.L-1,pH 6.0。     

常绿杂交杜鹃组培快繁技术研究

[目的]研究常绿杂交杜鹃的组培快繁技术.[方法]以常绿杂交杜鹃一年生半木质化茎段为外植体,进行组织培养技术研究.[结果]外植体在1/2MS+ 1.8 mg/L ZT+O.1 mg/L IBA +30 g/L蔗糖+4 g/L琼脂,pH 5.0的培养基上诱导率可达96.67％;最佳继代培养基为1/2MS+ 1.2 mg/L ZT +0.1 mg/L NAA +30 g/L蔗糖+4 g/L琼脂,pH 5.0,此时芽苗生长健壮;最适生根培养基为1/2MS+ 1.0mg/L IBA+ 1.5 mg/L NAA +30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂+3 g/L活性炭,pH 5.0,此时生根率可达95％.[结论]为常绿杂交杜鹃的快速繁殖提供技术支持.     

连香树快速繁殖及生根过程中内源激素含量的测定

以种子为外植体对连香树的快速繁殖进行了研究,同时测定生根过程中内源激素含量的变化。结果表明:连香树种子的最佳消毒方法为0.1%升汞消毒6 min;最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+GA31.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7.0g/L+pH 6.0;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L+pH 6.0;高浓度IAA,低浓度GA3、CTK、ABA有利于连香树组培苗不定根的形成。