不同培养条件对牛核移植胚胎体外发育的影响

[目的]进一步优化牛核移植胚胎的体外培养体系。[方法]在培养液中添加谷胱甘肽和胚胎培养的0~3 d采用5%O2浓度,在不同培养条件下对牛核移植重构胚胎进行体外培养,测定卵裂率8、细胞发育率、桑椹胚率以及囊胚发育率。[结果]结果表明,试验组B的8细胞发育率(38.3%)、桑椹胚率(17.0%)和囊胚率(8.5%)与对照组A(17.9%、1.3%、1.3%)差异显著(P<0.05)。试验组B和试验组C的桑椹胚率(17.0%、11.8%)、囊胚率(8.5%、7.8%)与对照组A(1.3%、1.3%)均差异显著(P<0.05)。[结论]在培养液中添加谷胱甘肽和胚胎培养的0~3d采用低O2浓度(5%O2),能够提高牛核移植胚胎的体外发育率。     

亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响

收集屠宰场水牛卵巢卵母细胞,在卵子体外成熟和受精后胚胎体外发育过程中分别添加0(对照组),10,50,100和200μmol·L-1的亚麻酸,探究亚麻酸对水牛卵母细胞核成熟率、受精卵的分裂率和植入前胚胎体外发育的影响。结果显示:在水牛卵母细胞体外成熟液中添加亚麻酸,添加浓度50μmol·L-1组的核成熟率(74.18%)显著高于对照组和其他实验组(P0.05),囊胚率(33.24%)显著高于对照组和10μmol·L-1亚麻酸组(P0.05)。在胚胎培养液中添加50μmol·L-1亚麻酸组的囊胚率(34.52%)显著高于对照组和100μmol·L-1亚麻酸组(P0.05);同时在成熟液和胚胎培养液中添加亚麻酸,添加浓度200μmol·L-1组的分裂率显著高于对照组(P0.05),而各组间的囊胚率和D7囊胚比率均差异不显著。结果表明,单独在水牛卵母细胞体外成熟液和胚胎培养液中添加50μmol·L-1亚麻酸能有效促进水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育。     

猪冷冻精子的体外受精与单精子胞浆内注射

用猪冷冻精子进行体外受精和单精子胞浆内注射(ICSI),并研究添加L-半胱氨酸及不同成熟培养法对猪ICSI胚胎发育的影响。结果表明:用猪冷冻精子生产的ICSI胚胎卵裂率及囊胚发育率分别为68.3%和11.4%,均低于用冷冻精子进行体外受精(IVF)所获得的卵裂率和囊胚发育率(分别为76.9%和19.2%,P<0.05)。在培养液中添加1.71mmol·L~(-1) L-半胱氨酸培养3 h,无论是卵裂率、桑椹胚发育率,还是囊胚发育率,均未得到明显改善(P>0.05);采用含0.4%BSA的NCSU-23培养液进行猪卵母细胞成熟培养,ICSI胚胎卵裂率虽明显高,但各组所获胚胎发育率均无显著差异(P>0.05),表明所用卵母细胞的成熟方法并未对ICSI胚胎发育产生明显的影响;用颗粒细胞或卵丘细胞共培养ICSI胚胎后,卵裂率有明显提高(P<0.05),但各组囊胚发育率无统计学差异。     

牛磺酸在牛胚胎体外发育中的作用研究

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时,向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响,以探寻牛磺酸克服牛胚胎"体外发育阻滞"现象的作用。试验结果表明:以TCM-199 10?S为基础培养液(对照组),再加入7,14mM的牛磺酸(试验组),试验组与对照组的桑椹胚率分别为48.1%、47.4%和43.2%;囊胚率分别为26.4%、22.3%和21.0%;孵化囊胚率分别为21.8%、18.7%和0%。IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期,在基础培养液中分别添加7mM的牛磺酸时,桑椹胚率分别为48.7%、57.1%和52.0%,囊胚率分别为25.1%、30.7%和27.9%,孵化囊胚率分别为25.9%、28.6%和25.0%;而添加14mM牛磺酸组时,桑椹胚率分别为50.4%、56.4%和55.4%,囊胚率分别为26.5%、31.3%和27.7%,孵化囊胚率分别为27.5%、31.1%和29.9%。体外发育培养液中添加7mM牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率(p<0.05),在4～8细胞期添加14mM牛磺酸最为合适。     

不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育的影响

[目的]系统比较了在成熟培养液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活胚的发育率和囊胚质量,同时比较了成熟培养液和胚胎培养液添加Leptin对孤雌激活胚发育的影响。[方法]成熟培养液中添加不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目,并且研究了成熟培养液和胚胎培养液单独或联合添加Leptin对猪早期孤雌胚胎发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目。[结果]成熟培养液中添加不同浓度Leptin(0,10,50,100和200 ng/ml),体外成熟44 h,卵母细胞核成熟率统计分析差异不显著(P>0.05);将核成熟卵母细胞进行化学激活,第2天胚胎卵裂率统计分析差异不显著(P>0.05),但100ng/ml组与其他组第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数差异显著(P<0.05);成熟液添加Leptin 100 ng/ml、胚胎培养液添加Leptin 10 ng/ml与其他组第7天的囊胚率及囊胚的内细胞团细胞数差异显著(P<0.05)。[结论]Leptin对卵母细胞成熟和孤雌胚胎发育能力上有相辅相成的作用。     

尿嘧啶和ATP对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响

[目的]探究尿嘧啶(Uracil)和三磷酸腺苷二钠盐(ATP)对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响。[方法]在体外成熟培养液中添加不同浓度的尿嘧啶和ATP,研究其对牛卵母细胞体外成熟及激活后孤雌胚胎发育能力的影响。[结果]在成熟培养液中添加50μg/ml尿嘧啶能够显著提高卵母细胞的成熟率、分裂率及孤雌胚胎囊胚率;在成熟培养液中分别添加0、250、500、750μg/mlATP,对卵母细胞成熟率影响不大,但添加500μg/ml ATP能显著提高激活后孤雌胚胎囊胚率。[结论]该研究为牛卵母细胞IVM研究提供了参考资料。     

褪黑素在高龄小鼠卵母细胞体外成熟中的促进作用

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以10～12月龄的ICR雌鼠为试验材料,分别将不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol·L-1)添加至体外成熟培养液中,通过判断卵母细胞的成熟率、受精率及囊胚率筛选出褪黑素最适宜的添加浓度,并通过线粒体分布检测、活性氧水平检测和细胞早期凋亡水平检测,分析褪黑素在卵母细胞成熟中的作用.结果 表明:10-6 mol·L-1的褪黑素添加至体外成熟培养液中能有效改善高龄小鼠卵母细胞的成熟、受精和胚胎发育,可通过改善线粒体的分布和活性,降低氧化应激水平和早期细胞凋亡,从而减弱衰老所引起的卵母细胞退化.综合而言,在体外成熟培养液中添加10-6mol·L-1的褪黑素可提高卵母细胞的核质成熟,改善高龄小鼠卵母细胞的质量.     

褪黑素对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

褪黑素对生殖系统发挥着重要调节作用,本研究旨在探究褪黑素对牛卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育的影响及作用机制。本试验用化学激活法对牛卵母细胞孤雌激活,且在卵母细胞体外成熟液和胚胎体外培养液中添加不同浓度(0 pmol/ml、10 pmol/ml、20 pmol/ml、30 pmol/ml)的褪黑素,以检测牛卵母细胞成熟率和孤雌胚胎发育效果,同时利用DCHF-DA染色方法检测卵母细胞中ROS水平,采用免疫荧光技术检测褪黑素受体MT1在牛早期胚胎发育过程中的表达。结果表明,外源褪黑素可促进卵母细胞体外成熟,卵母细胞成熟率随褪黑素浓度的增加而升高。褪黑素显著降低了卵母细胞中的ROS水平(P0.05),且卵母细胞中的ROS水平随着褪黑素浓度增加而降低。褪黑素可显著提高孤雌胚胎的卵裂率、桑葚胚率和囊胚率(P0.05),促进胚胎发育。相比对照组,10pmol/ml褪黑素剂量更有利于胚胎发育,桑葚胚率和囊胚率都显著高于其他试验组。另外,本研究首次探究了褪黑素受体MT1在早期胚胎发育过程中的表达分布。MT1在未卵裂的激活卵母细胞中主要分布于细胞膜上,随着孤雌胚胎卵裂的进行,受体表达量逐渐增加,主要表达定位于细胞膜上,随着胚胎发育的进行,MT1在卵裂球内部开始表达和分布,退化胚胎中MT1表达水平较低。可见,褪黑素可促进卵母细胞成熟和胚胎发育,且褪黑素受体MT1在胚胎发育早期已开始表达。     

促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

促黄体素对卵母细胞成熟有一定的促进作用。为研究不同浓度LH(促黄体素)对绵羊卵母细胞体外成熟及受精发育的影响,从屠宰场采集绵羊卵巢,切割法获取卵母细胞,于不同浓度LH成熟培养液中培养24 h,进行体外受精及体外胚胎培养。按照LH的添加浓度将试验分为5个组(A组,0μg/mL;B组,5μg/mL;C组,10μg/mL;D组,15μg/mL;E组,20μg/mL)。试验结果表明:LH的添加浓度为10μg/mL时,卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,均显著高于其它试验组(P0.05)。综上,本试验在含有10μg/mL FSH的TCM199成熟培养液中添加10μg/mL的LH时能显著提高绵羊卵母细胞的成熟率、卵裂率及桑椹胚率,这对建立稳定有效的绵羊卵母细胞成熟体外培养体系有着重要意义。     

牛磺酸对牛体外受精早期胚胎发育的影响

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响。试验一：以TCM-199＋10％FBS为基础培养液（对照组），再加入7、14mmol／L的牛磺酸（试验组），试验组与对照组的桑椹胚率分别为48．1％、47．4％和43．2％；囊胚率分别为26．4％、22．3％和21．0％；孵化囊胚率分别为21．8％、18．7％和0％。试验二：IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期，在基础培养液中分别添加7mmol／L的牛磺酸时，桑椹胚率分别为48．7％、57．1％、52．0％，囊胚率分别为25．1％、30．7％、27．9％，孵化囊胚率分别为25．9％、28．6％、25．0％；而添加14mmol／L牛磺酸组时，桑椹胚率分别为50．4％、56．4％、55．4％，囊胚率分别为26．5％、31．3％、27．7％，孵化囊胚率分别为27．5％、31．1％、29．9％。结果表明，体外发育培养液中添加7mmol／L牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率（P〈O．05），并且在4～8细胞期添加14mmol／L牛磺酸最为合适。     

Effect of GPAG Supplement on Porcine Oocyte Maturation and Its Following Embryonic Development by Parthenogenetic Activated

The aim of this study was to compare the effect of GPAG and commonly used FCS on porcine oocyte maturation and subsequent embryonic development after the fertilization. COCs were aspirated from follicles and cultured for 16, 24, 32, 40 and 48 h in TCM-199 medium either with GPAG or FCS. After 24 h with GPAG, 89.4% of oocytes reached M Ⅰ stage while in the medium supplemented with FCS, only 27.7% of oocytes reached the same stage （P〈0.05）. Prolonged incubation for up to 32 h clearly demonstrated that some of oocytes cultured in GPAG medium were at M Ⅱ stage （35.7%）, few of oocytes from FCS medium were at M Ⅱ stage （7.5%） （P〈0.05）. Both groups of oocytes reached the same stage of maturation within 48 h. After 48 h of culture, the oocytes with extruded polar bodies were inseminated. Fertilized oocytes were cultured in PZM3 medium supplemented with 3 mg.mL of BSA. After 7 days, the development and the quality of embryos were evaluated. The results showed that the maturation of oocytes in the presence of GPAG significantly increased their subsequent developmental ability when compared with FCS supplementation （29.2% ： 18.9% of blastocysts, P〈0.05）. However, differential staining revealed that once blastocysts were formed in either group, they had the same total cell number （39 ： 38） and the ICM/total cell ratio （0.26 ： 0.28）     

不同发育时期鼠胚对一步细管内冷冻一解冻耐受性的研究

本试验采用一步添加防冻剂（１０％甘油）、１２．５％蔗糖一步细管内脱除甘油，３７℃温水快速解冻法，对３９３枚处于不同发育时期的优良胚胎做了冷冻研究，旨在探索不同发育时期的胚胎对一步细管内冷冻解冻耐受性存在的差异，为哺乳动物胚胎冷冻和移植提供资料。解冻后体外培养结果表明，晚期桑椹胚（包括致密桑椹胚和致密后桑椹胚两个阶段）的抗冻能力最强，体外发育率致密桑椹胚为８０．０％（３２／４０）、致密后桑椹胚为７８．０％（３２／４１）；早期桑椹胚和早期囊胚次之，体外发育率为６２．２％（２８／４５）和６６．１％（３９／５９）；囊胚和扩展囊胚的抗冻能力最低，体外发育率仅为５１．６％（３１／６０）和５４．５％（１８／３３）。     

成熟培养基对猪卵母细胞的影响

评估NCSU23和TCM199两种培养基对猪卵母细胞体外成熟、孤雌激活以及核移植重构胚发育的影响。分别以NCSU23和TCM199为基础培养基,向其中添加相同浓度的半胱氨酸、激素和生长因子,作为猪卵母细胞体外成熟培养液,培养44 h(5%CO2、39℃、饱和湿度),挑选第一极体;成熟后的卵母细胞进行孤雌激活和核移植重构胚操作,144 h后观察囊胚数。结果表明,NCSU23组与TCM199组对卵母细胞体外成熟(68.18%和67.55%)、孤雌囊胚率(38.40%和37.60%)与核移植囊胚率(23.79%和21.38%)无显著影响(P>0.05),但是两者对孤雌囊胚细胞数的影响差异显著(分别为38.4和37.6个细胞)(P<0.05)。NCSU23成熟培养基能够使胞质成熟完全,提高囊胚细胞数,有利于妊娠的发生。可见,以NCSU23为基础培养基的体外成熟液有利于猪卵母细胞体外发育。     

不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

采用胞质内精子注射法（ICSI）构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精（ICSI）卵体外发育的影响。结果显示：成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%（175/185）、97.2%（173/178）和96.4%（189/196）（P〉0.05）;成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率（73.4%和70.9%）和囊胚发育率（31.8%和29.6%）显著高于成熟培养20 h的卵母细胞（61.1%和20.6%）（P〈0.05）。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率（72.7%和31.4%）高于未获能精子组（69.4%和29.3%）和不运动精子组（71.5%和30.4%）,但无统计学差异（P〉0.05）。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率（73.2%和66.9%）和囊胚发育率（32.7%和29.7%）差异不显著（P〉0.05）,但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率（51.0%和16.3%）（P〈0.01）。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。     

卵泡液对牛卵母细胞发育潜力的影响

为了确定卵泡液(直径大于10mm)对卵母细胞成熟的影响,共收集1759枚卵母细胞进行试验。在成熟液中分别添加0%,10%,30%和50%的卵泡液(bFF,bovinefollicularfluid),成熟培养24h后,孤雌激活或者体外受精和胚胎培养;对比10?F和10%胎牛血清(FBS),以及观察微滴培养对卵母细胞成熟的影响。结果表明,在孤雌激活组中,bFF浓度对卵裂率的影响差异不显著,但胚胎囊胚发育率高于对照组(P<0.05);在体外受精组中随着bFF浓度增加而卵裂率下降(P<0.01),而且囊胚率也下降(P<0.05)。在10%的bFF组中,孤雌激活囊胚率和体外受精囊胚率分别为47.1%和38.0%,囊胚扩张率显著高于其它组。从试验得出,添加10?F有利于卵母细胞胞质成熟,且不会降低到受精率,而且可以替代FBS;微滴培养不利于卵母细胞成熟。     

镉对背角无齿蚌主要组织谷胱甘肽含量和相关酶活性的影响

为了进一步探明谷胱甘肽系统对镉引起的氧化损伤的防御作用,根据背角无齿蚌(Anodonta woodiana woodiana)96 h镉的半致死浓度,设置5个染毒组(4.22、8.43、16.86、33.72、67.45 mg·L-1)和1个对照组,处理24、48、72、96 h分别测定鳃与肝脏中还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量和谷胱甘肽硫转移酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)的活性。实验结果显示,与对照组相比,除48 h、4.22 mg·L-1处理组鳃中GSSG含量出现显著性升高(P0.05)外,GSH和GSSG含量均表现为显著或极显著性降低(P0.05,P0.01);随着时间的延长,GSH/GSSG比值在低浓度(4.22、8.43 mg·L-1)处理组先降后升,在高浓度(33.72、67.45 mg·L-1)处理组则逐渐下降,且与对照组相比差异显著(P0.05)。与对照组相比,在24 h鳃中GST活性呈梯度型降低(P0.01);在48、72、96 h GST活性整体呈升高趋势,且在低浓度组升高、高浓度组降低,呈现显著性或极显著性差异(P0.05,P0.01)。鳃中GR活性在48 h、8.43 mg·L-1,72 h、67.45 mg·L-1和96 h、4.22 mg·L-1处理组出现显著性升高。随着浓度的升高和时间的延长,肝脏中GSH含量和GSH/GSSG比值呈显著或极显著性降低(P0.05,P0.01)。肝脏中GST活性整体呈升高趋势且有极显著性差异(P0.01);在24 h、4.22 mg·L-1处理组GST活性达到最高。同一时间,随着镉浓度的升高,肝脏中GST活性逐渐降低。肝脏中GR活性整体呈升高趋势且有显著性或极显著性差异(P0.05,P0.01),在72 h、4.22 mg·L-1处理组浓度达到最高。研究表明,肝脏中GSH含量的变化对镉引起的损伤反应灵敏且发挥了重要作用,GST解毒酶对镉的毒性反应灵敏,且肝脏较鳃的反应迅速。GSH含量、GST活性和肝脏分别可以作为环境监测的生化指标和靶器官。     

铜胁迫对粉葛幼苗生长及生理指标的影响

近年来,由铜导致的土壤污染逐渐加重,严重影响了药用植物的品质。本实验通过水培法,研究施用不同浓度的铜离子对粉葛幼苗生长及生理指标的影响,旨在为粉葛的安全种植提供一定科学依据。研究结果表明：铜胁迫处理对粉葛幼苗的生长具有低促高抑的作用,在铜离子浓度为0 mg·L^-1、0.01 mg·L^-1、0.03 mg·L^-1时,叶片舒展,叶色发绿,生长良好,但当浓度为0.06 mg·L^-1和0.1 mg·L^-1时出现叶缘发黄、甚至凋落死亡。随着铜离子浓度增大,叶片的叶长增长率和叶宽增长率均呈先增后降趋势,在0.03 mg·L^-1时达到最大。在生理指标方面,低浓度铜离子（0.01 mg·L^-1、0.03 mg·L^-1）处理时,SPAD值和可溶性蛋白含量均呈现升高趋势,高浓度铜离子（0.06 mg·L^-1、0.1 mg·L^-1）处理时,两者均呈现降低趋势,且在高浓度下随着铜胁迫处理的时间延长,SPAD值持续下降。粉葛幼苗中丙二醛含量、相对电导率和可溶性糖的含量均随着铜离子浓度的升高而逐渐增大。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响

[目的]为绵羊克隆试验中卵母细胞的体外成熟及去核时间提供参考。[方法]利用盲吸法结合荧光显微镜检查,对绵羊不同成熟时间卵母细胞去核的效率及其后续重构胚的发育进行对比。[结果]体外成熟培养19~21 h的绵羊卵母细胞在成熟率上显著高于体外成熟培养16~18 h(P(0.05),在去核成功率上显著高于体外成熟培养22~24 h(P(0.05);3个试验组在卵裂率、囊胚率上差异不显著(P(0.05),但是体外成熟培养19~21 h的试验组囊胚平均细胞数要显著高于其他2组(P(0.05)。[结论]体外成熟培养19~21 h的卵母细胞较适于作为受体细胞进行绵羊核移植,可以显著提高囊胚的质量。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外受精及胚胎发育的影响

为了研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和成熟后卵母细胞体外受精卵的早期发育的影响,在细胞培养过程中分别在体外成熟培养液、体外受精液及体外胚胎发育液中添加5、10 ng/mL VEGF.结果显示,添加VEGF组卵母细胞的体外成熟率由对照组的80.68%提高到了86.09%和85.22%(P<0.01),成熟卵母细胞的卵裂率由69.38%提高到了75.18%和73.48%(P>0.05),5 ng/mL添加组的桑葚胚率(45.45%)和囊胚率(30.06%)极显著(P<0.01)高于对照组(37.61%;23.65%);而10 ng/mL添加组的桑葚胚率(40.25%)和囊胚率(27.80%)低于5 ng/mL添加组的,高于对照组,但差异不显著.据此认为5 ng/mL VEGF的添加量比10 ng/mL VEGF添加量能更有效的促进绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育.