蜂王浆抗革兰氏阳性菌的特性研究

以枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌作为对象菌,利用抑菌圈试验法研究了蜂王浆抗革兰氏阳性菌的特性。实验结果表明：蜂王浆对3种供试革兰氏阳性菌都具有抑制作用,其抑菌活性随浓度的增加而增加;在所试验的pH值范围内（3．0-9．0）,蜂王浆对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄都表现出了抑制作用,而只有当pH值分别为9,4,3时才对四联球菌表现出抑制作用。蜂王浆的抑菌活性随贮存温度和贮存时间的变化而变化,在-20℃～25℃时贮藏15d后,蜂王浆对枯草芽孢杆菌的抑菌性能将会明显下降;在-20℃贮藏25d后以及在5℃、15℃、25℃贮藏15d后,蜂王浆对金黄色葡萄球菌的抑菌活性会显著下降;蜂王浆对于四联球菌的抑制作用似乎更稳定,在所试验的温度范围及时间范围内,其抑菌活性未出现显著下降。蜂王浆的抗菌成分主要是醚溶物和水溶物,而醚水不溶物不具有抑菌活性。该结果对蜂王浆抗菌物质的进一步开发利用提供了前期基础。     

东亚飞蝗抗菌活性物质的萃取及抗菌效应研究

试验研究东亚飞蝗成虫抗菌活性物质的萃取参数与抑菌效应。采用针刺蘸大肠杆菌菌悬液方法,以抗菌活性为指标,用杯碟法测定临床多重耐药菌的抑菌活性,确定最佳诱导时间,初步研究抗菌谱。结果表明,东亚飞蝗抗菌活性物质粗提液对革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)或革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、水稻白叶枯病原菌)均有一定的抑制作用。其抗菌谱为:金黄色葡萄球>水稻白叶枯病原菌>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌,其中以对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最明显。抗菌活性物质浓度为11.782mg/mL,蝗虫抗菌活性物质收率为8.623%。经纯化后的抗菌活性物质增强对革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌的抑制作用。采用针刺蘸大肠杆菌方式可成功诱导东亚飞蝗抗菌物质的表达,尤其以针刺蘸大肠杆菌诱导后饲养24h得到的抗菌活性物质抑菌活性最强。结果表明东亚飞蝗虫体内含有抗菌活性物质可被诱导表达,其抗菌作用机理有进一步研究。     

枯草芽孢杆菌MA139类细菌素抑菌活性的研究

为测定枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素的抑菌活性。本试验采用管碟法对枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素对多株革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的抑菌活性进行测定。结果表明:类细菌素不但对芽孢杆菌属的其他菌种有抗菌活性,对病原菌和霉菌也有拮抗作用;不同指示菌对类细菌素的敏感性不一样,其中金黄色葡萄球菌对其最敏感。该类细菌素具有广谱抗菌作用,有作为畜禽饲料添加剂的潜力。     

一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及抑菌活性分析

为了对兔源枯草芽孢杆菌进行生化特性及抑菌活性的分析鉴定,试验将1株枯草芽孢杆菌进行扩大培养后,革兰氏染色,镜检,利用PCR技术扩增16S rRNA序列;测序后构建系统进化树,分析遗传变异特性,借助生化管分析生理生化特性,并进行体外抑菌活性分析。结果表明:该菌株为产芽孢的革兰氏阳性菌,在系统进化树中与枯草芽孢杆菌聚为一簇,同源性高达99%,对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有一定抑菌活性。     

抗菌类药物在鸡病防治中的应用

<正>(一)抗菌药物的筛选1.青霉素类、大环内酯类主要对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、肺炎球菌等有作用。2.氨基糖苷类、氯霉素对革兰氏阴性菌如大肠杆菌、沙门氏杆菌、巴氏杆菌等效果较好。     

一株产抗菌脂肽芽孢杆菌筛选鉴定、产酶特性及其脂肽初步鉴定

为筛选可用于动物生产的优良枯草芽孢杆菌,试验通过抑菌性能筛选,从200余株分离自土壤、枯叶等材料的芽孢杆菌中筛选得到菌种S21,经分子生物学鉴定菌种S21为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);通过产酶定性分析,枯草芽孢杆菌S21产蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶;采用酸沉、醇提和半制备色谱对S21产抗菌脂肽纯化,利用ESI-TOF-MS对纯化出的抗菌脂肽进行鉴定,鉴定抗菌脂肽为surfactin家族抗菌脂肽;抑菌试验分析显示枯草芽孢杆菌S21产抗菌脂肽对革兰氏阳性、革兰氏阴性和霉菌都有抑制效果,热耐受性和酸碱耐受性好。综上所述,枯草芽孢杆菌S21有用于动物生产的潜力。     

恩拉霉素的药理学及在兽医临床上的应用

1药效学恩拉霉素在体外对梭状芽孢杆菌、链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌等革兰氏阳性菌具有强大的抗菌活性,但对大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、志贺菌等革兰氏阴性菌几乎无抗菌作用。就生理特点而言,肠道内容物处于厌氧状态,因而对需氧菌和厌氧菌具     

蜂王浆抗菌作用的初步研究

以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和啤酒酵母为供试菌株 ,用抑菌圈实验法研究了蜂王浆的抗菌活性 ,结果表明蜂王浆对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有明显的抑制活性 ,而对啤酒酵母的生长没有抑制 ;蜂王浆提取物的抑菌实验结果表明 :蜂王浆中含有不同的抑菌活性物质     

茶树油制剂对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的体外抑菌试验

确定茶树油制剂的最低抑菌浓度(MIC),为茶树油制剂作为饲料添加剂提供重要的参考依据,使茶树油有望被开发成为一种可缓解全球"抗菌药物危机"的天然抗菌剂。本试验以茶树油作为抑菌剂,以金黄色葡萄球菌和沙门氏菌分别作为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的代表,进行体外抑菌试验,测定混合抑制培养后的光密度值(OD600nm)并对其进行分析。研究发现茶树油制剂对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均具有显著的抑菌效果(P0.05),且对二者的抑菌效果一致,在二者浓度为106cfu/ml时的最低抑菌浓度(MIC)相同,均是0.1×2-1×2%,茶树油制剂对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抑菌效果(P0.05)。     

红霉素与洁霉素类药物在养殖中的应用

1红霉素 本品从红色链丝菌的培养液中提取,为白色或类白色的结晶或粉末,难溶于水,易溶于有机溶媒（乙醇、乙醚、氯仿）,呈碱性,与酸结合的盐易溶于水,水溶液在4℃或氢离子浓度为10~1000纳摩尔/升（pH值为6~8）时较稳定。该品为大环内酯类抗生素,抗菌谱与青霉素近似,对革兰阳性菌,如葡萄球菌、化脓性链球菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、粪链球菌、溶血性链球菌、梭状芽孢杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等有较强的抑制作用。对革兰阴性菌,如淋球菌、螺旋杆菌、百日咳杆菌、布氏杆菌、军团菌、脑膜炎双球菌以及流感嗜血杆菌、拟杆菌、部分痢疾杆菌及大肠杆菌等也有一定的抑制作用。此外,对支原体、放线菌、螺旋体、立克次体、衣原体、奴卡菌、少数分枝杆菌和阿米巴原虫有抑制作用。因红霉素进入革兰氏阳性菌内的量要比进入革兰氏阴性菌内的量大100倍,故对革兰阳性菌如金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、丹毒杆菌、李氏杆菌作用强,而对革兰氏阴性菌作用较弱。本品对立克次体、钩端螺旋体、霉形体也有作用。红霉素主要用于治疗耐青霉素 G的黄色葡萄球菌所引起的严重感染,还用于治疗鸡慢性呼吸道病、传染性鼻炎、坏死性肠、传染性滑膜炎及呼吸道炎症等。配伍时粉针严禁用生理盐水等含无机盐的溶液稀释,以免沉淀。     

蜂王浆10-HDA与王浆酸度相关性的研究

通过测定浙农大1号意蜂高王浆酸蜂种的13个蜂群生产的鲜蜂王浆的10-HDA含量、酸度、pH。采用生物统计方法分析10-HDA含量与王浆酸度之间的相关系数为0.68,存在中等程度的正相关,在大批量的样品测定中可以通过测定酸度的办法预测其10-HDA含量的大致高低。     

"九州意蜂"品系选育及生产性能试验的研究

以安徽本地意蜂为育种素材,通过系统选育与定向选育,采用闭锁集团繁育与蜜蜂人工授精技术,选育出九州意蜂品种配套系,该品种配套系蜂王日有效产卵量高,春繁速度快,群势强,越夏越冬效果好,适应安徽地区生态环境和蜜粉源条件,具有蜂蜜高产、蜂王浆高产、蜂蜜和蜂王浆双高产的生产性能。其“中九州1号”(Eg1)属于蜂蜜高产型优良蜂种,同一花期蜂蜜产量明显高于本地意蜂(E(a)P﹤0.01),“九州2号”(Eg2)属于王浆高产型优良蜂种,同一花期王浆产量明显高于本地意蜂(E(a)P﹤0.01),10-HDA含量最高达2.14;水分、蛋白质、酸度基本接近,“九州3号”(Eg3)属于蜂蜜、王浆双高产型优良蜂种,同一花期蜂蜜、王浆产量均明显高于本地意蜂(E(a)P﹤0.01),适应于现代养蜂生产。     

中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜实时荧光PCR法鉴别及其应用

中国蜂蜜主要分为中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜两种,分别由中蜂和意蜂酿造而成。中蜂蜂蜜营养价值高,保健功能好,但是由于产量低,价格是意蜂蜂蜜的3~5倍。一些不法企业和养蜂人趁机将意蜂蜂蜜假冒中蜂蜂蜜销售,或将意蜂蜂蜜掺入到中蜂蜂蜜中以次充好。因此,如何鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜是当前蜂产品行业面临的一大难题。本研究以MRJP2(Major Royal Jelly Protein 2)为靶标基因,分别设计了针对中蜂和意蜂的特异性引物和探针,开发了实时荧光PCR-Taqman探针法,并对该方法的特异性和灵敏度进行了分析。结果显示该方法可以特异性的区分中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜;对意蜂蜂蜜DNA的最低检测限达到0.05ng,对中蜂蜂蜜DNA的最低检测限达到0.01ng;对市售中蜂蜂蜜进行真实性摸底调查发现约37%样品为中蜂蜂蜜,其余样品均含有意蜂蜂蜜成分。综上所述,中蜂蜂蜜掺假现象严重,实时荧光PCR方法检测灵敏度高、特异性强、操作简便快速,可为中蜂蜂蜜掺假问题提供技术支持。     

Evaluation in vitro of the antagonistic substances produced by Lactobacillus spp. isolated from chickens

To determine the inhibitory capacity of lactic acid bacteria due to the action of antagonistic substances, we tested 474 isolates of Lactobacillus from the crop and cecum of chickens against gram-positive and gram-negative indicator microorganisms by the spot-on-the-lawn and well-diffusion antagonism methods. Of the 474 isolates, 265 demonstrated antimicrobial activity against the indicator microorganisms. Isolates identified as L. reuteri, L. salivarius, or Lactobacillus spp. inhibited Enterococcus faecalis, E. faecium, Listeria monocytogenes, and Salmonella spp. but not L. casei, L. delbrueckii, L. fermentum, or L. helveticus by the well-diffusion simultaneous antagonism method under anaerobic incubation conditions. The antagonistic substances produced by some of the Lactobacillus isolates were inactivated after treatment by proteolytic enzymes, which suggested that the substances could be antimicrobial peptides or bacteriocins.     

不同蜂花粉对西方蜜蜂蜂王浆主蛋白基因表达及蜂王浆产量、质量和组成的影响

本试验旨在研究不同蜂花粉对西方蜜蜂(Apis mellifera)蜂王浆主蛋白基因(mrjps)表达及蜂王浆产量、质量和组成的影响。选取蜂王、群势基本一致的意大利蜜蜂9群,随机分为3个组,每组3群蜜蜂:油菜花粉组,饲喂油菜花粉;土连翘花粉组,饲喂土连翘花粉;对照组,不饲喂花粉,自然采粉(主要为鬼针草花粉)。试验周期为2个月,试验时间为2017年9月中旬至11月中旬。利用凯氏定氮法和水解法分别检测油菜花粉、土连翘花粉和鬼针草花粉粗蛋白质含量和氨基酸组成与含量;每组选3只9日龄工蜂进行mrjp1~mrjp9和黄体基因e3(yellow⁃e3)相对表达量的检测;检测各组蜂王浆产量、质量及水溶性蛋白和氨基酸组成与含量。结果显示:3种蜂花粉粗蛋白质含量、总氨基酸含量均为油菜花粉>土连翘花粉>鬼针草花粉,且组间差异显著(P<0.05),3种蜂花粉单一氨基酸(组氨酸除外)含量也表现为油菜花粉>土连翘花粉>鬼针草花粉,且组间差异显著(P<0.05)。在9日龄工蜂头部,mrjp1、mrjp2、mrjp3、mrjp4、mrjp5和mrjp7相对高表达,mrjp6、mrjp8和mrjp9相对低表达,油菜花粉组、土连翘花粉组和对照组mrjp1、mrjp2、mrjp3、mrjp4、mrjp5和mrjp7的相对表达量之和分别占mrjps总相对表达量的99.94%、99.94%和98.60%。与对照组相比,饲喂油菜花粉和土连翘花粉显著提高了mrjp1、mrjp2、mrjp3、mrjp4、mrjp5、mrjp7和yellow⁃e3的相对表达量(P<0.05),且油菜花粉组上述基因的相对表达量显著高于土连翘花粉组(P<0.05);饲喂油菜花粉和土连翘花粉显著降低了mrjp6、mrjp8、mrjp9的相对表达量(P<0.05)。油菜花粉组蜂王浆产量最高,其次为土连翘花粉组,对照组最低,各组之间差异显著(P<0.05)。油菜花粉组和土连翘花粉组蜂王浆的质量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。3组蜜蜂所产蜂王浆水溶性蛋白和氨基酸组成基本一致。综上所述,不同粗蛋白质含量的蜂花粉对西方蜜蜂mrjps基因的表达及蜂王浆产量的影响不同,对蜂王浆质量和组成的影响不大。3组蜂群相比,采食油菜花粉组具有营养功能的mrjps基因的相对表达量和蜂王浆产量最高。由此可见,对于西方蜜蜂繁育或蜂王浆生产,油菜花粉可作为一种优质的营养饲料。     

杂合抗菌肽Mel-MytB在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性测定

为了获得抗菌活性较强的抗菌肽，将蜂毒肽（Melittin）与贻贝素B （Mytilin-B）的核心功能序列杂合，以Melittin （3-14）和Mytilin-B （13-27）的成熟肽段作为模板序列，根据巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）偏好密码子，采用SOE方法合成杂合抗菌肽Mel-MytB（MEM）基因。改造后的基因克隆到pPICZα-A质粒，构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-MEM，而后经Sac Ⅰ酶切线性化后电转入毕赤酵母受体菌X-33。结果表明，在醇氧化酶（AOX）启动子调控下，分子质量约3.0 ku的Mel-MytB杂合抗菌肽获得表达，具有热稳定性和酸稳定性，煮沸40 min、pH 2.0~10.0范围内抑菌活性基本不变。抗菌特性研究结果表明，该表达产物具有广谱抗菌活性，其对大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923/ATCC6538、肠道沙门氏菌ATCC13076、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、副溶血弧菌ATCC17802、创伤弧菌ATCC27562、枯草芽孢杆菌ATCC6633的MIC值分别为5.1、2.2、2.0、4.6、7.6、9.4、13.2和59.4 μg/mL。因此，重组抗菌肽Mel-MytB在疾病防治和动物饲料添加剂等方面具备较好的应用前景。     

抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较

应用由 Hancock实验室改进的微量肉汤稀释法测定了 cecropin P1、cecropin A、magainin 2、defensin 1、bactenecin、lactoferricin和 indolicidin等 7种抗菌肽和盐酸金霉素、去甲万古霉素、土霉素、强力霉素等 4种抗生素的体外抗菌活性 ,并且使用薄层琼脂糖孔穴扩散法比较了抗菌肽中 cecropin P1和 cecropin A与土霉素和呋喃唑酮对大肠杆菌 K88的抑菌效果。结果发现 ,抗菌肽与抗生素一样对几种革兰氏阳性菌和阴性菌都有不同程度的抗菌效果。其中 cecropin A、cecropin P1和 defensin1对大肠杆菌的 2个菌株 ATCC2 5 92 2和 K88的抗菌活性高于抗生素 ,defensin1是各种抗菌肽中对金黄色葡萄球菌抗菌效果最好的。抗生素对试验用金黄色葡萄球菌的抑制活性总体上要好于抗菌肽。与抗生素相比 ,cecropin A、cecropin P1和 indolicidin对猪霍乱沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌具有更好的抗菌效果。另外 ,抗菌肽的抑菌圈边缘十分清晰 ,而抗生素的整个抑菌圈都比较模糊且界线不明。因此 ,从抗菌效果方面考虑 ,抗菌肽可以代替抗生素用于疾病的预防和治疗     

Screening of the enterocin genes and antimicrobial activity against pathogenic bacteria in Enterococcus strains obtained from different origins

Antimicrobial activities of 139 Enterococcus isolates (48 E. faecium and 91 E. faecalis) obtained from canine feces, boiler meat samples, swine feces, wild waterfowl feces, and human feces were examined against respective bacteria, including Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Listeria monocytogenes, Salmonella Enteritidis, and Escherichia coli. Bacteriocin (BAC) production assay revealed that the antimicrobial activity against at least one of 6 indicator strains (BAC+ phenotype) was found in 51 (37%) isolates (29 E. faecium and 22 E. faecalis). Twenty-four of 46 isolates positive for at least one of the enterocin structural genes (entA, entB, entL50AB, and cylL) showed a BAC+ phenotype. The existence of other enterocins or nonenterocin factors was implied because the BAC+ phenotype was detected in a total of 27 Enterococcus isolates that had none of the enterocin genes tested. The antimicrobial activity against Gram-negative strains (Salmonella Enteritidis and E. coli) was detected in the 6 Enterococcus isolates that had either the entA, entB, entL50AB or cylL genes. Moreover, the proportion of the antimicrobial activity against L. monocytogenes among the cylL-positive E. faecalis isolates showing beta-hemolysis (10/16) was significantly (p<0.01) higher than among those lacking beta-hemolysis (2/15). The results suggested that certain characteristics are likely to be associated with the antimicrobial activity against specific organisms.     

抑制奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的乳酸菌的筛选

为获得抑制奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌(S. aureus)的乳酸菌(LAB),本研究从新疆巴音布鲁克牧区鲜牛乳和哈萨克族乳制品奶疙瘩样品中分离培养LAB,通过传统的分离鉴定与16S rDNA基因序列测序相结合的方法鉴定LAB种类,同时以临床奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌S. aureus N2为指示菌,采用双层琼脂扩散法检测分离株的抑菌能力。通过测定生长曲线确定分离株的生长稳定期,进而利用硫酸铵沉淀法透析提取稳定期内分离株的细菌素,并检测其细菌素抑菌效价。结果显示:从样品中筛选获得5株能够抑制指示菌生长的LAB,分别为希氏乳杆菌、干酪乳杆菌、粪肠球菌、戊糖片球菌和乳酸乳球菌亚种。生长规律曲线表明20 h^30 h为5株LAB的稳定期,此期培养液pH值维持在3.8~4.5。从培养20 h的5株LAB上清液中提取到了细菌素,经检测其具有抑菌活性,抑菌效价分别为457 IU/mL、1 023 IU/mL、676 IU/mL、1 862 IU/mL和1 023 IU/mL。本研究结果表明5株LAB通过在生长稳定期内维持较低酸性环境(pH<4.5),代谢产生细菌素对乳房炎源S. aureus发挥抑制生长作用。本研究为S. aureus性奶牛乳房炎的生物防治提供了实验依据。