棉花高效嫁接新方法及其应用研究

建立适合双子叶植物幼苗和幼嫩枝条高效嫁接方法，解决转基因植株、体细胞再生植株、茎尖培养植株等无菌苗直接定植困难问题。首次将“Y型”劈接法嫁接技术用于棉花组培再生植株的嫁接，详细介绍了操作过程和实用技巧。本研究采用合接法、贴接法、切接法、常规劈接法、插皮接法、嵌合法6种已报道嫁接方法与新建立的“Y型”劈接法进行棉花嫁接比较试验及不同嫁接时期成活率及生长速率的比较试验。另外，将“Y型”劈接法在其他双子叶植物中也进行了嫁接试验。结果表明，“Y型”劈接法嫁接棉苗的成活率最高，达到92%以上，适合嫁接的砧木使用时间较长（1～6片真叶均可），此嫁接方法操作简便、砧木与接穗固定方便且愈合快，嫁接速度快，对环境的温、湿度无需严格控制，应用广泛。此技术体系可整年用于棉花转基因苗和组培苗的嫁接，突破了苗木一般在春季进行嫁接的局限。     

转基因再生棉花嫁接初报

转基因再生棉花以往都采用带根移栽法 ,并要求再生棉株茁壮、根系发达。由于移栽棉花的缓苗期最少需要 1个半月 ,并且 ,许多再生棉苗的根系不发达或没有根系 ,因此 ,使转基因再生棉株的成活率成了农杆菌介导法转基因棉花方法中的一大难题 ,若采用嫁接法可以很好地解决这个问题。1　嫁接方法在土盆里先种植砧木棉花苗 ,待砧木苗真叶生长至 2～ 3叶时 ,去掉顶尖 ,留下展开的叶片 1～ 2叶 ,先用手术刀片在茎中间劈开 2 cm长的小口 ,再将转基因棉株去掉根部 ,在茎秆两边削尖 (长度1 .7cm～ 1 .8cm) ,贴在砧木苗上 ,再用粘合绳把嫁接口全部缠实 ,…     

转基因再生棉苗移植法探讨

常规的转基因再生棉花移植法是在人工气候箱里，保持２７℃±２℃，最初一周内必须用玻璃罩整株覆盖，移栽时若温度过高棉花易烂茎而引起死亡，温度低不利于植株生长，因此，转基因再生棉花的移栽一直是个难题。经摸索探讨出炼苗—低温—高温的再生棉移植法，该方法是一种...     

洗根移栽棉花的表现及技术

作者根据海南土质极沙 ,根系与土壤容易分开、棉花根系受到伤害后有一定的再生能力 ,苗期和蕾期再生新根能力较强的特点 ,结合近年来在海南冬繁中多次受灾经验 ,逐渐摸索出一套棉花洗根移栽技术。此技术具有操作简单、移栽成活率高、棉花苗期安全性高等特点 ,在以加代和测配组合为目标的南繁中具有很强的适用性。此技术还可推广运用到直播补苗 ,以及棉花受雨水淹后的移栽上 ,能使广大南繁育种者在灾害年所受的损失降到最低程度。1洗根移栽棉花的表现1 .1移栽成活率高。 2 0 0 3年在海南省陵水县英州镇设洗根移栽、直播、营养袋育苗移栽、方…     

大叶种茶树嫁接后的定型修剪技术

嫁接是老茶园进行改种换植的一种有效方法,具有操作简单、见效快的特点。云南省农业科学院茶叶研究所于1999年开始,采用该方法在云南大叶种上进行试验示范,经过几年的摸索与研究,取得了初步成功。在试验过程中发现,嫁接茶树由于其生长习性及分枝特性都不同于常规的移栽茶苗,因此修剪方法也要有所不同,现将其修剪方法总结介绍如下。1.嫁接后茶树的生长特性茶树嫁接由于砧木是成龄茶树,其年限一般都在20~30年,地下部分根系发达,能够很充分地吸收土壤中的水分和养分,源源不断供给地上部分,使茶树在一年四季中都在生长,生长量较常规移栽的茶树要…     

春小麦花药单倍体植株染色体加倍技术初探

为了提高春小麦花药单倍体植株的加倍效率,对参试的春小麦材料的花药愈伤组织和再生植株根系分别进行了以下处理:(1)在脱分化培养基中分别加入五种浓度的秋水仙碱:0.02‰、0.05‰、0.1‰、0.3‰、0.5‰;(2)用0.2%和0.05%的秋水仙碱浸泡再生植株根系各5h和15h。结果表明,在脱分化阶段经秋水仙碱处理后愈伤组织生长缓慢,植株再生能力较差,甚至部分褐化死亡;再生植株的浸根处理无论是用高浓度还是低浓度的秋水仙碱,长时间浸泡根系后均会导致大部分再生植株夭亡。用0.2%的秋水仙碱溶液浸泡再生植株根系5h后,将其移栽温室,平均结实株率为45.9%,比对照结实株率(13.2%)提高了32.7个百分点。说明高浓度秋水仙碱短时间浸泡再生植株根系加倍效果较好。     

转抗虫基因优良籼型恢复系的获得及其外源基因的遗传稳定性研究

用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因（gna）转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢527中,通过PCR、PCR Southern blotting和Southern blotting等分子方法检测证明,外源基因已稳定遗传到转基因第三代（T2）。转基因第一代植株（T0）在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比,发生明显的不可遗传的变异。随着繁殖代数的增加,转基因植株恢复到与对照植株一致。还讨论了DNA微量提取法在转基因后代筛选中的运用。     

IBA对棉花组培苗生根的影响

为了提高再生苗的移栽成活率,同时减少嫁接方面的过多程序和经济费用,对IBA(吲哚丁酸)影响组培苗生根进行了研究,希望能对提高转基因棉花再生株的移栽成活率有所帮助。1材料和方法取R15和冀713含两到三片真叶的无菌苗(切掉下胚轴及子叶部分)转至含不同IBA浓度的1/2MS培养基,检测不定根数和根毛数,进行统计分析。试验(1)IBA含量对棉花组培苗生根的影响,设0、1、2、3、4、5、6、7、8九个处理,分别含IBA为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mg·L-1;(2)IBA对不同棉花品种组培苗生根的影响,设IBA为0.2、0.3、0.4、0.5mg·L-1…     

转抗虫基因优良灿型恢复系的获得及其外源基因的遗传稳定性研究

用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因（gna)转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢527中，通过PCR、PCR－Southern blotting和Southern blotting等分子方法检测证明，外源基因已稳定遗传到转基因第三代（T2）。转基因第一代植株（T0）在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比，发生明显的不可遗传的变异。随着繁殖代数的增加，转基因植株恢复到与对照植株一致。还讨论了DNA微量提取法在转基因后代筛选中的运用。     

农杆菌法转化棉花茎尖组织的初步研究

农杆菌法是当今转基因植物研究中应用最为广泛的技术,因具有转化工作不受季节限制、转化机理较为清楚、转基因植株多为单拷贝和转化效率较高等优点而备受青睐。采用农杆菌介导法和基因枪法进行棉花遗传转化时,一般都需经过离体培养再生植株的过程,实验周期长,且受到基因型限制,只有少数品种的离体培养材料能再生植株。转化茎尖分生组织的方法具有直接产生不定芽和基因型依赖性弱等优点,因此,建立棉花茎尖组织遗传转化体系具有重要的现实意义。1材料和方法1.1材料品种为中棉所35,农杆菌菌株为LBA4404,转化载体为pCAMBIA-3300。1.2方法1.2…     

亚麻单倍体抗逆基因的转化

为提高亚麻抗逆性,尽快获得转基因纯系亚麻,本研究采用农杆菌介导的转基因技术,将抗盐和低温胁迫基因HY15CS导入单倍体亚麻,结果获得抗性再生植株24株,从15株生长健壮的再生植株中PCR检测到3株阳性植株,阳性率20%;同时进行了不同方法的单倍体检测技术的研究,确定DAPI染色可以做为快速鉴定植物体倍性常用方法。     

棉花试管苗嫁接移植方法

离体培养的试管苗移植于室外 ,是一个从无菌到有菌的过程。常常先使试管苗生根 ,然后移栽于花盆。就棉花而言 ,两个步骤共约 2个月。这是应用较广泛的常规技术 ,但是 ,试管苗生根并非 1 0 0 %成功 ,而且移栽成活率不高。如果将试管苗嫁接于自然条件下的砧木上 ,不仅节省时间 ,而且避免与土壤 (常常是蛭石 )的直接接触而减少污染 ,提高移植的成活率。为此 ,笔者探讨了棉花试管苗的嫁接移植 ,并取得成功。1　试验材料作为接穗的试管苗以组织培养的为主 ,包括农杆菌介导的外源基因转化苗。所用棉花品种是珂字棉 2 0 1、抗虫不育系和岱字棉。用…     

亚麻单倍体抗逆基因的转化

为提高亚麻抗逆性，尽快获得转基因纯系亚麻，本研究采用农杆菌介导的转基因技术，将抗盐和低温胁迫基因HY15CS导入单倍体亚麻，结果获得抗性再生植株24株，从15株生长健壮的再生植株中PCR检测到3株阳性植株，阳性率20％；同时进行了不同方法的单倍体检测技术的研究，确定DAPI染色可以做为快速鉴定植物体倍性常用方法。     

花生组培苗高效嫁接技术

为解决花生野生种及转基因组培苗移栽成活率低、田间长势弱等难题，本研究对花生的嫁接技术进行了优化。以黑籽花生品种豫花0215分别在黑暗和光照条件下培养7d的实生苗为砧木，以栽培种、野生种及双二倍体的无菌组培苗为接穗，采用劈接法，以花生的下胚轴为嫁接部位进行嫁接。结果表明，花生砧木的培养方式不同，嫁接成活率差异显著，在黑暗条件下培养的砧木下胚轴达到6cm以上，平均嫁接成活率较高，达到96%以上。不同类型接穗嫁接成活率差异很大，栽培种的嫁接成活率较高，嫁接到黑暗培养的砧木上成活率达到100%。采用黑暗培养的豫花0215作砧木，大大提高了嫁接成活率和嫁接效率，该方法在花生野生种、双二倍体及转基因植株等组培苗的嫁接上获得成功，克服克服了野生种及后代材料生根困难及移栽成活率低，及组培苗移栽后长势弱等问题，值得推广。     

棉花根系研究进展

棉花根系的研究在棉花栽培生理、土壤肥料及育苗移栽等研究工作中一直占有重要的地位。总结了前人在棉花根系形态、生理生化等方面的研究成果,为棉花根系的创新研究提供一些较系统的理论基础。     

农杆菌介导大豆子叶节转化cry1Iem基因

利用农杆菌介导法,以东北地区种植的9个大豆基因型和国外品种Williams82的子叶节为外植体,将抗虫基因cry1Iem转入栽培大豆品种中。共转化外植体1 459个,获得84棵再生植株。采用除草剂叶片涂抹法、PCR及Bar蛋白试纸条检测法对得到大豆再生植株进行鉴定,转cry1Iem基因大豆T_0阳性植株为61株。对部分T_1转基因植株的遗传分析表明,外源基因能够稳定遗传到下一代。通过对部分T_1阳性转基因植株进行Southern blot分析,证明目的基因片段均已整合到受体大豆的基因组DNA中,单拷贝率为22%左右。对获得的部分T_2材料进行了室内抗大豆食心虫鉴定,有2份转基因材料抗性较对照显著提高。     

花生小叶外植体植株再生及农杆菌介导的基因遗传转化

鄂花四号、中花四号和豫花一号萌动４ｄ的小叶作外植体，通过器官再生在ＭＳ培养基加３ｍｇ／ＬＢＡＰ和１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导芽分化，转至ＭＳ加５ｍｇ／ＬＢＡＰ上诱导芽伸长，再生植株。芽诱导率为８６％～１００％，每个外植体平均再生５个植株。在培养基中加入１ｍｇ／ＬＡｇＮＯ３和５００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素能有效抑制愈伤褐化和死亡，并能提高植株再生率。萌动４ｄ的小叶与农杆菌ＡＧＬ１分别共培养２ｄ，通过在再生培养基中加卡那霉素筛选，获得转基因再生植株，转基因植株生根后，移栽网室生长，并已开花结荚。外源基因的表达通过卡那霉素抗性和Ｇｕｓ活性组织化学检测得到证实。     

棉花成株期无损伤移栽技术

在棉花种质资源研究中,性状的变异大多在成株期以后才能发现和鉴别,往往需要移栽保存,并减少叶、蕾、铃等器官损伤.但是棉花为直根系农作物,根系再生能力较差,现蕾后的成株移栽大多无法成活.安徽省农业科学院棉花研究所棉花种质资源及育种项目组经过多年探索,成功研发出一种棉花成株期无损伤移栽技术,为棉花种质资源的保存和利用提供了一...     

影响棉花愈伤组织及其体细胞胚发生的内外因素

棉花是重要的经济作物,也是理性的研究纤维发育模式作物。随着基因工程和现代分子生物学的发展,转基因技术在棉花生产中得到广泛应用。组织培养技术是转基因技术的基础,但棉花组织培养受棉花基因型的限制,严重制约了棉花转基因技术的发展。作者通过对棉花组织培养技术的了解,回顾了棉花组织培养与植株再生的发展历程,探讨了影响棉花愈伤组织诱导和体细胞胚发生能力的一些内外因素,并展望了棉花组织培养的未来发展方向。     

加快橡胶花药植株推广应用的几种方法探讨

本文讨论了以下5种加快橡胶花药植株推广应用的方法 1.通过愈伤组织的继代培养1—2次,出苗率可提高近1倍; 2.通过花药植株的试管微体扦插,一个叶蓬的茎段有可能发育成为一株植株; 3.在试管以花药植株为接穗进行微体嫁接,一个芽眼有可能成为一棵植株; 4.刚抽茎的非完整植株大田嫁接,可以成活并萌发成芽接苗; 5.改进移栽技术,提高移栽成活率。