应用RAPD技术研究柿品种间的亲缘关系

采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对原产中国、日本和韩国的部分柿品种间的亲缘关系进行了初步探讨。结果表明：（1）15个供试品种经OPA－06、OPA－08、OPA－19三个引物扩增后,品种间和引物间的谱带类型各不相同;（2）经6个随机引物扩增出的15个供试品种的谱带类型和相似指数的分析结果显示,‘富有’和‘次郎’,‘平核无’和‘仓光’,‘磨盘柿’和‘杵头柿’间可能具有较近的亲缘关系。     

‘石硖’龙眼芽变系双引物RAPD鉴定的研究

 以‘石硖’龙眼芽变系及其普通系(对照) 为材料, 从80对双引物中筛选出4对双引物在二者之间扩增出稳定清晰的多态性片段。4对双引物共扩增出35条带, 其中多态性带5条, 表明通过双引物扩增可成功地将‘芽变’与母株(对照) 区分开来。在此基础上对双引物产生多态性扩增的原理进行了分析。     

苹果属观赏海棠实生单株亲本的AFLP鉴定

应用AFLP技术, 对以苹果属观赏海棠品种王族(Malus ‘Royalty’) 为母本, 以5个材料为父本的38个实生单株进行多态性分析。结果表明: 筛选出的9对分辨率高的引物共扩增出349条带, 其中多态性带303条, 多态位点百分率达86.8%。根据聚类分析和电泳图谱扩增得到亲本材料的特征带, 鉴定出19株实生单株的父本可能为‘宝石’ (Malus‘Jewelberry’) ; 7株实生单株的父本可能为海棠花(Malus spectabilis Borkh. ) ; 3株实生单株的父本可能为草莓果冻(Malus‘Strawberry Parfait’) ; 不能确定其父本的实生单株有9株。     

SSR标记技术在甜瓜杂交种纯度检验中的应用

 以两个甜瓜杂交品种(系) ‘东方蜜1号’和‘01231’及其亲本为材料, 用SSR分子标记技术研究杂种与其双亲之间扩增谱带的多态性, 以甄别真假杂种。所试验的23对SSR引物中有8对引物分别在两个甜瓜杂交种和其双亲之间存在扩增多态性, 表现为: 多数SSR引物对自交系的扩增只出现1条带,但部分引物在某些自交系中扩增出2条带, 杂交种条带均为父母本的互补型, 很适合做杂交种纯度鉴定。用引物M6 对‘东方蜜1号’和引物M17对‘01231’各100粒单种子进行SSR鉴定, 所测纯度分别为100%和96% , 与田间纯度99.6%和96.2%非常接近, 显示出SSR标记技术在甜瓜杂交种子纯度的室内快速检测中有广泛应用前景。     

桃果实有毛/无毛性状的SCAR标记

 以桃品种‘京玉’和‘美味’的正反交69株F1 群体为试材, 利用RAPD技术扩增出了与桃果实有毛/无毛性状(G/ g) 连锁的2 258 bp的多态性片段, 经克隆、测序后, 根据获得的序列重新设计了两对引物进行SCAR转化。引物对BFP94 /BFP95在有毛和无毛个体中均扩增出了2 258 bp的片段, RAPD显示的多态性消失。利用引物对BFP96 /BFP98成功将RAPD标记转化成了SCAR标记, 并命名为SCP2022258。该标记仅在果实有毛的个体中出现, 与有毛/无毛性状的连锁距离为718 cM, 且扩增稳定, 为桃果实有毛/无毛性状育种的分子标记辅助选择奠定了基础。     

山葡萄种质资源SSR遗传多样性分析

对360份山葡萄种质资源进行了遗传多样性分析研究。从245对引物中筛选出18对用于供试材料的SSR扩增;单条引物扩增条带为4~13条,平均9.44条;扩增产物长度介于150~1 000 bp,以200~750 bp的扩增片段居多;18对引物共扩增出170条带,其中多态性条带167条,多态性百分率为98.2%;Shannon’s多样性指数(I)为1.778051。某些品种(系)产生了特有SSR标记带,共5条,占2.95%。     

石榴品种SSR指纹图谱构建及杂种父本鉴定

以枣庄市石榴国家林木种质资源库中收集的168个石榴品种为材料，利用SSR分子标记技术构建了石榴品种资源指纹图谱，并基于指纹图谱信息，应用最大似然值法(LOD)对品种‘秋艳’和‘会理青皮软籽’的自然授粉实生苗进行了杂种筛选及父本初步鉴定。22对SSR引物从168个石榴品种样品中共扩增到76个等位标记位点，其中多态性位点58个，多态性为76.3%。平均等位位点数(N_a)、有效等位位点数(N_e)、观测杂合度(H_o)、期望杂合度(H_e)分别为3.455、2.269、0.362、0.538,Shannon’s信息指数(I)平均值为0.897，多态性信息含量(PIC)介于0.330～0.692之间，平均PIC值为0.462。利用22对SSR引物可将166个石榴品种区分开，另有‘大满天红甜’和‘小满天红甜’2个品种未有效区分，有同物异名的可能；在此基础上构建了166个品种的特异指纹代码及指纹图谱二维码。基于指纹图谱信息，利用SSR标记从‘秋艳’的30个自然授粉子代实生苗中筛选到1个真杂种Q-1，疑似父本为‘峄城丰...     

基于cpSSR和nSSR标记的地方柑橘资源‘枳雀’亲本分析

【目的】分析地方柑橘资源‘枳雀’的亲本类型和来源,为进一步改良、开发与利用地方柑橘资源提供理论依据。【方法】以包含‘枳雀’在内的分属于柑橘属、枳属、金柑属的21份柑橘种质为材料,运用cpSSR和nSSR标记计算各SSR位点等位基因数(Na)、观察杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、Shannon信息指数(I)、多态性信息含量(PIC),构建基于DICE相似系数的UPGMA(非加权配对算术平均法)聚类树,进而分析‘枳雀’的亲本来源。【结果】10对cpSSR引物扩增出37个多态性条带,平均每个位点3.70个,平均Shannon信息指数(I)为0.98;14对nSSR引物扩增出62个多态性条带,平均每个位点4.43个,平均多态性信息含量(PIC)为0.57,平均期望杂合度(He)为0.63。【结论】根据cpSSR和n SSR分析,结合形态学证据,认为‘枳雀’的母系亲本为柚类或者具有柚类母本血缘的杂交柑橘品种,父本是一个具有枳的血缘的杂交柑橘品种。cpSSR与nSSR结合使用可比较准确地鉴定柑橘杂种。     

利用SSR技术鉴定西瓜品种纯度

利用SSR分子标记技术对‘雪龙三号’西瓜品种及其亲本间的多态性进行了引物筛选和种子纯度研究。结果表明,在供选的23对SSR核心引物中,有2对引物(BVWS02048和BVWS00106)在‘雪龙三号’杂交种及其亲本的带型具有多态性。利用这2对引物对‘雪龙三号’进行纯度鉴定,鉴定结果均为98%,与大田纯度检测结果吻合率达99%,说明SSR分子标记对‘雪龙三号’的纯度鉴定结果是可靠的。同时2对引物鉴定结果的一致也验证了品种的真实性。     

13个阿月浑子品种的RAPD分析

为探明引进的阿月浑子品种间的亲缘关系,采用RAPD 标记技术对引入的12 个国外品种和‘新疆优株’进行了分析。用筛选的21 条10 bp 随机引物进行PCR 扩增可扩增出137 个位点,其中多态位点122 个,多态位点比率89.05%;品种间遗传距离在0. 2015 ~ 0.5163 之间,表明各品种间存在一定的遗传差异。UPGMA 聚类分析表明,13 个阿月浑子品种在遗传距离0.40 处可划分为3 个类群,第1 类包括 ‘Kerman’、‘Larnaka’、‘M-38’、‘M-P3’、‘Ashoury’、‘N’、‘Joley’、‘Aegina’、‘Avidon’、‘B’和‘Peter’11 个品种;第2 类为‘Xinjiang select tree’品种;第3 类为‘Mateur’品种。     

桃早熟芽变品种‘大观一号’的RAPD分析及其特异片段的克隆

利用140个单个和混合随机引物对桃布日早生及其早熟芽变品种'大观一号'基因组DNA的多态性进行RAPD分析。其中有一个引物能检测出两者之间DNA的多态性，在1．1kb处'大观一号'多了一条特异性条带，将该片段克隆到pUC19载体，并作了酶谱分析。     

核桃早实性状的RAPD分析

 用BSA (Bulked Segregant Analysis) 法获得了与核桃早实性状相关的RAPD 标记OPB208₉₀₀。混合分离群体的混合样来自早实品种辽1 的自然授粉实生后代。用220 个随机引物扩增早实和晚实混合样, 只有引物OPB208 ( 5. GTCCACACGG 3. ) 在早实混合样及其个体上扩增出了约900 bp 的特异带OPB208₉₀₀, 而在晚实混合样及其个体上无此特异带。用OPB208 为引物, 以19 个品种和3 个株系的DNA 为模板进行扩增,特异带OPB208₉₀₀在17 个早实品种中的12 个个体上出现, 而5 个晚实品种( 系) 上均无此带。     

番木瓜雄性性别的RAPD和SCAR标记

利用RAPD标记技术鉴定番木瓜雄性性状。在214条随机引物中,用引物Z18扩增得到1条雄性多态性片段,此片段存在于试验所用材料的所有雄株中而两性株和雌株没有,将其命名为Z18-1000。根据对该片段的序列分析结果重新设计了2对引物将RAPD标记成功转化成了SCAR标记,并命名为SD-1000。     

不同山楂品种亲缘关系的RAPD分析

为探讨山楂品种间的亲缘关系,采用RAPD技术对20个不同品种的山楂材料进行了基因组DNA多态性分析。从120个引物中筛选出15个10bp的随机引物对所选山楂品种的DNA样品进行PCR扩增,共得到216条谱带,177条表现多态性,多态性比率达81.9%,其中包含27条特异性谱带,揭示了山楂植物丰富的遗传多样性。且利用NTSYS软件和UPGMA法对扩增结果进行了品种间相似系数的计算及聚类分析,结果表明相似系数在0.71～0.87,实生楂与其他山楂品种亲缘关系较远。     

香石竹品种的RAPD 标记

 用随机扩增多态DNA (RAPD) 技术, 选用4 个随机引物, 对87 个大花型香石竹品种总DNA进行随机扩增。4 个引物均得到了稳定的RAPD 图谱。扩增出的片段分子量在500～4300 bp 之间, 每个随机引物扩增出的条带数在8～12 条之间, 共扩增出2113 个条带, 平均每个引物扩增的DNA 条带数为915 条。根据DNA 谱带计算品种间遗传距离, 对87 个品种进行了聚类分析, 分为10 个组群, 组群间差异较大, 组群内差异较小。     

ISSR．PCR技术在桂花品种分类研究中的应用

 利用ISSR．PCR方法对桂花的19个品种进行了基因组多态性分析，从74个ISSR引物中筛选出13个多态性引物用于正式扩增，共扩增出9o条DNA片段，其中多态性DNA条带79条，占总扩增片段的87．8％ ，平均每个引物扩增的DNA带的数目为6．92条。根据ISSR扩增结果，应用RAPDistance软件进行Nei相似性系数和遗传距离计算，利用UPGMA法构建聚类树状图。聚类分析的结果把供试桂花的l9个品种分为8个大类，并对4个品种群的遗传关系和种下分类系统进行了探讨。     

Genetic relationships of gladiolus cultivars inferred from fluorescence based AFLP markers

Gladiolus is one of the important commercial flowers with a large number of cultivars. However, genetic relationships among its genotypes have not been reported. This study analyzed genetic relatedness of 54 gladiolus cultivars using amplified fragment length polymorphism (AFLP) markers. A total of 24 AFLP primer pairs with three samples were initially screened, from which 9 primer sets that showed clear scorable and highly polymorphic bands were selected for AFLP reactions. Fluorescence-labeled amplification products were subjected to electrophoresis and then analyzed using an automated sequencer. A dendrogram was constructed by the unweighted pair group method using the arithmetic average (UPGMA). The number of AFLP fragments generated per primer set ranged from 10 to 151 with fragment sizes varying from 50 to 450 bp. A total of 660 AFLP fragments were detected, of which 658 (99.70%) were polymorphic. All the primers except E-AGG/M-CTA displayed 100% polymorphism. All cultivars were clearly differentiated by their AFLP profiles. The AFLP data were compared with previously obtained RAPD data and combined to generate a common dendrogram. The first cluster was dominated with indigenously bred cultivars while the second was dominated with exotic cultivars. This shows that most of the exotic cultivars as well as indigenous cultivars are closely related with each other. However, two indigenous cultivars viz., Pusa Suhagin and Pusa Archana share genetic similarity with exotic cultivars. Among the genotypes selected for the investigation, Pusa Gunjan was identified as the most distinct genotype. The AFLP markers developed will help future Gladiolus cultivar identification, germplasm conservation and new cultivar development. The assessed genetic relationships among gladiolus cultivars may enhance the efficiency of breeding program by selecting desirable parents with reduced breeding cycle.     

彩色猕猴桃与美味猕猴桃的遗传差异分析

彩色猕猴桃(Actinidia deliciosa var．coloris)为美味猕猴桃(A．deliciosa var．deliciosa)的红心变种,数量稀少,十分珍贵,是中国特有的种质资源,具有重要的育种价值。采用RAPD技术研究彩色猕猴桃红美,TJ-DD—19,TJ- DD-54,TJ—DD-75和Ckou—DD-18的遗传多样性,以及它们与3个有代表性美味猕猴桃品种川猕1号,秦美和海沃德的遗传差异性。从120个引物中筛选出扩增效果较好的18个引物,共扩增出242条带,其中多态性带206条,占85．1％。各引物扩增的条带数在5～18条不等,平均每个引物扩增出的带数为13．4条。结果表明,彩色猕猴桃和美味猕猴桃具有复杂的遗传关系,它们除了变种间具有较大的遗传差异外,变种内也存在一定的遗传差异。同时,采用UPGMA法聚类的结果与传统的形态分类存在一定的差异,但部分反映了猕猴桃的地理分布。     

桃果实非酸/酸性状AFLP标记的筛选

桃果实的甜酸是影响其风味品质和经济价值的重要因素,也是育种中的重要选择目标。筛选与桃果实非酸／酸性状紧密连锁的分子标记,对于育种工作具有重要的实践和指导意义。试验以69株京玉、美味正反交F1代群体为试材,采用AFLP与BSA相结合的方法筛选与甜酸性状紧密连锁的分子标记。通过64对AFLP引物组合在两分离集群间的分析,结果表明,11对引物组合产生多态性。单株验证结果表明,只有2对引物组合E-TA／M-CTC、E-AT／M-CTA产生的多态性片段与果实酸性状连锁,片段大小约140、200 bp,连锁距离分别为1.47、2.99 cM。     

DNA fingerprinting and genetic diversity analysis of late-bolting radish cultivars with RAPD,ISSR and SRAP markers

Three molecular marker systems, RAPD (random amplified polymorphic DNA), ISSR (inter-simple sequence repeat) and SRAP (sequence-related amplified polymorphism), were employed for identification and genetic diversity analysis of 35 elite late-bolting radish cultivars. Detected by 35 RAPD primers, 22 ISSR primers and 17 SRAP primer combinations, the proportions of polymorphic bands were 85.44%, 85.2% and 85.41%, respectively, and the mean genetic similarity coefficients between pairs of genotypes were 0.781, 0.787 and 0.764, respectively. Each of the three molecular marker systems can identify all the cultivars. Five sets of three-RAPD primers, 3 sets of three-ISSR primers and 16 sets of three-SRAP primer combinations were able to distinguish all the cultivars. A linear relationship was observed between Resolving power (Rp) of a primer and its ability to distinguish genotypes. The 35 cultivars were clustered into three major groups based on the RAPD, ISSR and marker combination data with UPGMA, which are in high accordance with their own origins and main characteristics. The results demonstrated that these three marker systems could be useful for identification and genetic diversity analysis of radish cultivars.