应用Dot-ELISA检测马铃薯卷叶病毒

 以硝酸纤维素膜(NCM)为固相载体,应用间接ELISA法对纯化的马铃薯卷叶病毒(PLRV)、感染PLRV的马铃薯植株的茎、叶、休眠块茎顶端、脐部、块茎打破休眠后萌发的芽,以及饲毒后的桃蚜体内的PLRV分别进行了测定。结果表明检测纯病毒的灵敏度为45.83pg~4.583pg,测定茎、叶、休眠块茎顶端、脐部、芽的稀释度分别可达到1/2048、1/512、1/2048~1/8192、1/512~1/2048和1/2048~1/8192,和常规DAS-ELISA相比,检测的灵敏度提高至少8倍。应用Dot-ELISA至少可检测1/2头带毒蚜虫体内的PLRV。     

番茄卷叶病的防治

番茄生产中 ,卷叶现象十分普遍 ,菜农往往束手无策 ,不管何种原因卷叶 ,均影响正常生长代谢作用 ,导致不同程度的损失。在大面积番茄生产中 ,卷叶现象虽不致于绝收 ,但严重影响产量和品质。番茄卷叶主要是由非侵染性因素引起的生理性卷叶和病毒侵染引起的传染性病毒病及人为造成的伤害引起卷叶。一、症状及发生原因１．生理性卷叶病。生理性卷叶一般分４种。第１种是整枝、摘心、摘叶过度造成中下部叶片磷酸积累 ,而导致叶片卷曲。肥水过剩 ,土壤干湿变化剧烈 ,特别是氮肥过剩时 ,往往全株所有叶片上卷 ,有的卷成筒形。第２种是土壤中缺铁、…     

马铃薯卷叶病毒分子鉴定及一步RT-PCR检测

病毒病的危害对马铃薯产量和品质构成较严重的影响.2003年初广东省阳东县田间约70%的植株呈现典型的马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)病症状.为此,笔者对其病原进行了分子鉴定,并建立了一步RT-PCR检测技术.     

巴西首次在马铃薯上报道番茄褪绿病毒

2011年6月,在巴西Goiás州Cristalina县的一个商业种植园中发现一些马铃薯植株的叶片特别是老叶表现叶片卷曲、脉间褪绿等症状,并且该种植园B型烟粉虱(Bemisia tabaci)发生严重。从表现症状的植株上采集4个块茎样品,用于检测马铃薯植株是否受到以下4种病毒的侵染:番茄褪绿病毒(Tomato chloro-     

大棚番茄卷叶原因与防治

在大棚番茄栽培过程中,常发生不同症状的卷叶现象,番茄叶片卷曲皱缩的原因一方面是由于栽培管理措施不当、环境条件不适等造成的生理性卷叶,另一方面是由病毒病及茶黄螨为害所致。措施不当及环境条件不适引起的叶片卷缩,应从栽培管理入手,而病毒病及茶黄螨引起的叶片卷缩,要及时用药防治。     

马铃薯病毒性退化及防止

马铃薯生长期间,出现植株变矮、分枝减少、叶片皱缩、花叶或卷叶、生长势衰退、块茎变小、产量一年不如一年,这种现象称为马铃薯病毒性退化。一、退化的原因马铃薯退化是由病毒侵染造成的。侵染危害马铃薯的病毒有二十几种,这些病毒一旦侵染马铃薯植株和块茎,就能造成各种不同的病态和不同程度的减产。病毒侵染块茎后,随块茎的种植使病毒代代相传。种植感病毒的马铃薯时间愈长,病毒侵入的机会就愈多（有的植株,常受２～３种病毒复合侵染）,病毒性退化就愈来愈重。最后患病的种薯在生产上失去了利用价值。二、如何防止马铃薯病毒性退…     

高温激活RNA沉默介导的心叶烟抗病毒防御反应

 在真核细胞内,RNA沉默是一种保守的抵抗病毒及外源基因等寄生分子的防御机制。温度可以明显地影响植物体与病毒之间的相互作用。在常温状态下,常常会伴随病毒病的爆发,但在较高温度下,症状则会减轻,甚至有些感病植株新生叶片可以较快地恢复健康。目前这类现象的内在机制还不完全清楚。本文通过定量分析不同温度下马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)侵染的心叶烟(Nicotiana glutinosa)植株体内病毒蛋白含量,结合症状观察,确定30℃左右是PVX和PVY在心叶烟上引起症状消失即发生系统性RNA沉默的临界温度,此时的感病植株上部新生展开叶片呈现无症状态,下部已发病叶片症状不变。在常温时,由病毒激发的RNA沉默会受到抑制,病毒来源的小分子干涉RNA (small interfering RNAs,siRNAs)含量极少或根本检测不到,植株对于病毒的敏感性较强。当温度达到30或32℃时,感病植株下部症状保持叶片中,病毒起源的siRNAs含量明显增加,而上部新生健康叶片中却检测不到siRNAs的存在。这说明高温激活了RNA沉默介导的植物抗病毒防御反应,导致病毒症状减轻甚至消失。     

4个马铃薯品种感染马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）的症状

马铃薯纺锤块茎类病毒在中国及世界许多国家都是检疫性病害, 该病害可大幅度降低马铃薯产量和品质。根据植株及块茎的症状, 汰除感病的马铃薯种薯, 是控制PSTVd传播和危害的重要手段。本研究利用分子克隆及测序技术, 分离并鉴定了PSTVd的分离物351-17, 利用PSTVd田间接种技术, 分别接种了4个黑龙江省常用的马铃薯品种‘夏坡地’、‘克新18’、‘荷兰15’和‘尤金’, 对其侵染后第一代的株高、叶片、块茎外观和单株产量进行了调查, 结果表明：4个供试马铃薯品种感染PSTVd后均表现出了一定的症状, 其中‘克新18’在株高、叶片和块茎的症状方面最为明显, 单株产量下降显著, 表明其对PSTVd非常敏感。     

马铃薯卷叶病毒的RT-LDR-PCR检测

马铃薯卷叶病毒（Potato leaf roll virus,PLRV）属黄症病毒科Luteoviridae黄花病毒属Polerovirus,是目前严重影响马铃薯产量与品质的病毒,其分布局限于寄主植物的韧皮部,且含量非常低,难于提纯,这给PLRV检测带来很大的困难[1]。     

4种葡萄卷叶伴随病毒多重RT-PCR检测

 葡萄受卷叶伴随病毒侵染后,树势减弱,抗逆性变差,果穗着色不良,成熟期推迟,含糖量降低。目前已报道11种葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV)。为提高检测效率,降低检测费用,本文在研究单个卷叶伴随病毒RT-PCR检测技术基础上,对4种葡萄卷叶伴随病毒的多重RT-PCR模板浓度、引物浓度和退火温度进行优化,建立了同时检测葡萄卷叶伴随病毒-1(GLRaV-1)、葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)、葡萄卷叶伴随病毒-4(GLRaV-4)和葡萄卷叶伴随病毒-5(GLRaV-5)的多重RT-PCR技术体系。模板浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、退火温度和循环次数对多重RT-PCR检测结果均有较大影响,而在一定范围内改变延伸时间和dNTP浓度对检测结果影响较小。对4种葡萄卷叶伴随病毒的PCR产物进行克隆和测序,扩增基因片段与GenBank中登录的基因序列同源性为95%~99%。所建立的多重RT-PCR技术检测田间样品效果良好。     

马铃薯病毒病的危害及防治

马铃薯病毒病 (Ｐｏｔａｔｏｖｉｒｕｓ)在我国分布较广 ,为害也较严重 ,感染病毒的马铃薯 ,通过块茎积累 ,使块茎品质变劣 ,产量逐年降低 ,一般减产 2 0 %～ 5 0 % ,严重的达 80 %以上。马铃薯病毒病是一个包括多种病毒病的综合名称 ,主要包括普通花叶病、条斑花叶病、卷叶病、纤块茎病及丛枝病。1　症状与病原1.1　普通花叶病由马铃薯Ｘ病毒 (ＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＸ ,简称ＰＶＸ)引起 ,大多数品种都感染此病毒 ,但有些品种不表现症状。表现的症状有轻花叶、坏死性叶斑、矮化以及植株由下向上枯死 ,块茎变小。该种病毒颗粒体为弯秆状 ,5…     

转二价核酶基因马铃薯及抗病性研究

 用克隆的特异性切割马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)复制酶基因负链RNA的二价核酶基因,构建植物表达载体pROKⅡ/DR,经土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导叶盘法转化马铃薯外植体,获得再生植株。PCR和Southern-blot检测,证明目的基因已成功地导入马铃薯再生植株,其转化率约为14.5%,并能够在无性繁殖后代植株中稳定存在。RT-PCR检测表明,再生马铃薯植株中的二价核酶基因可以转录表达。经病毒接种的转基因马铃薯株系L5、L7、L8和J-1的无性繁殖后代在继发感染中仍表现出较高的抗病性,为最终获得抗PLRV马铃薯新品系打下了基础。     

北京地区番茄黄化曲叶病毒病的鉴定及防治对策

番茄黄化曲叶病毒病是一种由烟粉虱传播的病毒病,给番茄生产造成严重威胁。2009年在北京郊区调查时发现部分保护地种植的番茄植株表现典型黄化曲叶症状。通过提取典型症状样品总DNA利用粉虱传双生病毒检测简并引物PA/PB,进行PCR扩增到541bp的特异条带。通过测序和核苷酸序列比对表明该序列与番茄黄化曲叶病毒序列相似性最高为99%。分子检测结果表明北京郊区部分保护地种植的番茄已被烟粉虱传播的番茄黄化曲叶病毒侵染危害。     

江苏菜豆上分离的番茄黄化曲叶病毒基因组序列分析

 2012年,江苏南京菜豆上出现了一种新的病毒病害,病株表现明显的叶片皱缩、植株矮化等症状。根据其症状及介体发生状况,对其伴随的病毒种类进行了研究,结果从中检测到一种粉虱传双生病毒,对其基因组DNA-A组分克隆测序后发现其全长2 781 bp,编码6个ORF,BLAST及聚类分析结果显示该病毒与番茄黄化曲叶病毒同源性最高(99%),是番茄黄化曲叶病毒的一个分离物。这是江苏省番茄黄化曲叶病毒侵染菜豆的首次报道,暗示番茄黄化曲叶病毒可能是我国菜豆种植的重要潜在威胁。     

葡萄卷叶病毒RT-PCR检测技术

为调查葡萄植株携带葡萄卷叶病毒(GLRaV)的情况，以带毒和非带毒指示植物“品丽珠”为试验材料提取总RNA，并以此总RNA为模板进行RT—PCR扩增，建立了GLRaV的RT—PCR检测体系，并对GLRaV cDNA序列进行测定，结果成功地检测到了GLRaV。经多次试验证明，该检测结果准确可靠，可以用于GLRaV的检测。     

海南红麻曲叶病的病原检测与鉴定

 红麻曲叶病是2012年在海南省海口市发现的一种新病害,病株表现为叶片向上卷曲、叶脉肿大、叶脉变深绿色等症状。PCR检测结果显示,该病样中均存在菜豆金色花叶病毒属病毒。基因克隆及序列分析结果表明,该病毒分离物(HN08)基因组仅含A组分(DNA-A),其全长为2 738 nt,与木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMuV)各分离物的相似性均大于89.0 %,其中与中国各分离物的相似性均大于99.0 %。该病毒分离物也伴随有β卫星分子,其全长为1 346 nt,与CLCuMuV各分离物伴随的β卫星分子(CLCuMuB)序列相似性大于83.0 %,其中与分离物Fz1的序列相似性最高,为99.7 %。构建了HN08 DNA-A及其β卫星分子侵染性克隆,通过农杆菌注射接种红麻,接种后30 d,HN08 DNA-A及其β卫星分子混合接种的红麻植株新出叶片开始产生曲叶症状;接种后60 d,二者混合接种的植株大部分叶片表现为严重的曲叶症状,且与田间自然病株症状相同,而二者各自单独接种的红麻植株没有产生明显的症状。PCR及Southern blot检测进一步证实这些症状是由HN08 DNA-A及其β卫星分子的共同侵染引起的。因此,海南红麻曲叶病是由CLCuMuV及其伴随的β卫星分子(CLCuMuB)共同侵染引起的。本文首次报道了红麻是CLCuMuV自然新寄主。     

双重RT-PCR同步检测马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒

根据马铃薯A病毒全基因序列和马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白区序列分别设计PVA和PLRV的特异性引物,应用双重RT-PCR同步检测马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒,分别得到300bp和222bp大小的扩增片段.试验从反转录、PCR等方面对双重RT-PCR同步检测2种病毒进行了探索和优化.结果表明反转录反应中dNTPs浓度、2种病毒下游引物浓度比例以及PCR反应中Mg2+浓度对双重RT-PCR同时检测PVA和PLRV有较大的影响.     

番茄潜叶蛾与马铃薯块茎蛾形态特征及为害症状的比较

番茄潜叶蛾Phthorimaea absoluta Meyrick是一种重要的世界性检疫性害虫。2017年8月入侵我国,现已扩散蔓延至我国多个省市,对露地和保护地鲜食番茄生产构成了严重威胁。在田间种植的番茄和马铃薯上,番茄潜叶蛾与同科的马铃薯块茎蛾常混合发生,且形态与取食为害特征相似,较容易混淆,给田间识别带来困难。本文详细描述和比较了番茄潜叶蛾和马铃薯块茎蛾成虫、卵、幼虫和蛹的外部形态及幼虫为害症状。本文将为番茄潜叶蛾和马铃薯块茎蛾的准确识别及田间调查提供指导,还可为这两种害虫的精准测报奠定基础。     

葡萄卷叶相关病毒2号在美国密苏里州杂交葡萄“Vidal Blanc”品种上的首次报道

葡萄卷叶病是在世界范围内普遍发生的病毒病害之一。目前已知至少有10种葡萄卷叶相关病毒(GLRaV 1～7号,9号,10号,11号)与这种病害有关。葡萄卷叶相关病毒2号(GLRaV-2)有许多不同的分离物,它们不仅能引起卷叶症状,还会引起嫁接不亲和、葡萄幼树衰退、砧木茎部枯死等。     

葡萄卷叶伴随病毒4和5简并引物和多重PCR检测

研究建立了葡萄卷叶伴随病毒4和5(Grapevine leafroll associated virus 4and 5,GLRaV-4and 5)的简并引物及多重PCR检测方法。比较了单一PCR、多重PCR和简并引物检测方法的灵敏度,并对简并引物的特异性进行了分析。结果表明,采用简并引物和多重PCR对这两种病毒进行检测,其灵敏度与单一PCR相同,且简并引物仅对葡萄卷叶伴随病毒4和5具有特异性。本研究建立的方法能够同时、快速、灵敏地检测上述2种葡萄卷叶病毒,提高了检测效率,降低了检测费用。