绵羊冷冻胚胎切割移植成功

中国农业科学院畜牧所牛、羊胚胎库课题组,继取得绵羊冷冻胚胎解冻后成活率达66.1％(39/59),移植成功率达55％(22/40)的国内先进水平之后,与浙江省农科院畜牧所合作,在农村条件下,采用简易胚胎切割器械和方法,开展绵羊冷冻胚胎切割试验。1988年9月将切割后的绵羊冷冻胚胎移     

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<正> 绵羊胚胎冷冻后切割移植成功 中国农科院畜牧所牛、羊胚胎库课题组,继取得绵羊冷冻胚胎解冻后存活率达66.1％(39/59)、移植成功率达55％(22/40)的国内先进水平之后,与浙江省农科院畜牧所合作,在农村条件下,采用简易胚胎切割器械和方法,开展绵羊冷冻胚胎切割试验。1988年9月将切割后的绵羊胚胎移植给1头受体母羊,已于今年2月产下1公羔——我国首例冷冻胚胎切割后的半胚羊羔。     

奶牛新鲜和冷冻胚胎分割移植试验

用简单方法,分割7～8日龄新鲜牛胚胎(1分为2),裸半胚成对移植给66头受体,90天妊检,移植妊娠率为56.1％(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6％(9/26),半胚产犊率为29.2％(35/120)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的诸多因素如胚胎质量,胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、受体牛品种、黄体状况等进行了较系统的研究。同时对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5％(5/11),已产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0％(1/4)和57.4％(4/7)。     

绵羊冷冻胚胎切割移植成功

中国农科院畜牧所牛、羊胚胎库课题组,继取得绵羊冷冻胚胎解冻后成活率达66.1％(39/59)、移植成功率达55％(22/40)的国内先进水平之后,与浙江省农科院畜牧所合作,在农村条件下,采用简易胚胎切割器械和方法,开展     

奶牛冷冻胚胎分割和分割后半胚冷冻技术

用简易分割方法,分割奶牛冷冻胚胎16枚,获得半胚32枚,分割成功率为100％(16/16),可移植半胚29枚,移植于16头受体牛,到第3个情期未返情者经直肠检查有6头妊娠,妊娠率为37.5％(6/16)。其中,在分割前或者分割后经恢复培养0.5～2h再移植的10头受体牛,5头妊娠;而未经恢复培养,分割后直接移植的6头受体牛中,只有1头妊娠。移植后3个月,直肠检查确定2头流产。已有1头受体黄牛生出1头奶牛牛犊(母)和1头受体奶牛产1头奶牛牛犊。其余的2头妊娠受体牛将于9月份产犊。此外,用简易分割法分割奶牛胚胎5枚,得到半胚10枚,裸半胚直接冷冻,解冻后回收可移植半胚5枚,移植于4头受体牛,无一头妊娠。结果表明,冷冻胚胎的分割半胚优于分割后冷冻半胚移植效果;冷冻胚胎分割前或者分割后恢复培养移植优于未经恢复培养而直接移植;简易分割法可应用于冷冻胚胎的分割。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法

哺乳动物胚胎冷冻技术自建立以来,已进行了一些重大改进。其主要进展有: 1.缩短冷冻时间:提高慢速(0.3℃/分钟)降温操作的中止温度,至到较高的零下温度(-30～-40℃)或者快速降温,降到一定低温便保持此温度一段时间(两步冷冻法)。这样做虽然时间缩短了,但胚胎仍含有水分,这些水分在胚胎投入液氮的急剧降温过程中,便形成小冰晶或者不太稳定的玻璃态。因此,需快速解冻,以防止升温过程中形成有损于胚胎的冰晶。 2.缩短解冻后脱除低温保护剂时间:用非渗透剂(蔗糖)一步稀释,以避免保护剂脱出后胚胎发生渗透性膨胀。 3.玻璃化冷冻法(Vitrification):这是前不久研究出的一种新冷冻方法。其设计根据是,保护剂的稀释液在急剧降温到很低温度时,能被浓缩,而不会形成冰晶。作者已试验成功用两种浓度的低温保护剂,作为胚胎内液(10％甘油和20％丙二醇混合液)和外液(25％甘油和25％丙二醇混合液),且均能达到玻璃化。用此法冷冻的小鼠和牛的晚期桑葚胚已移植成功并产仔。     

ε-聚赖氨酸在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用

通过研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对牛胚胎玻璃化冷冻的影响,探讨ε-PL在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用,为优化牛胚胎玻璃化冷冻技术提供依据。单独以ε-PL作为冷冻保护剂,其质量浓度为20、35、50g/L,分别进行胚胎冷冻,结果均不能取得成活胚胎,说明ε-PL不能单独作为冷冻保护剂使用。在传统玻璃化冷冻剂中分别添加质量浓度为10、20、30g/L的ε-PL进行胚胎冷冻,结果发现添加ε-PL之后的冷冻保护液具有更好的保护效果,且ε-PL质量浓度为20g/L时效果最好,囊胚解冻孵化率可达42.37%。进一步探索了用该冷冻保护剂,缓冲时间分别为5、7.5、10min进行胚胎冷冻的效果,结果发现缓冲时间为7.5 min取得最高孵化率,孵化率为46.58%。结果表明,ε-PL对牛胚胎玻璃化冷冻具有一定的保护作用,且适当延长缓冲时间可取得更好的冷冻效果。     

家畜卵和胚胎冷冻的现行方法及有待研究的问题

近17年来,采用建立起来的牛非手术采卵及冷冻方法,已能将牛桑葚胚和囊胚冷冻,并获得较高的存活率。现在试验中和商业上牛胚胎冷冻大多数是采取控制降温和解冻的程序。解冻后存活率按形态评定可达90％～100％,非手术移植的妊娠率为60％。绵羊、山羊和马的桑葚胚和囊胚用控制降温和解冻程序也能有效的冷冻。简化的控制降温和解冻程序的一步法用于牛胚胎,妊娠率可达50％。此法免去了解冻后较繁琐的脱除冷冻保护剂和胚胎评定过程。玻璃化法和快速冷冻法是较先进的方法,可大大缩短胚胎冷冻时间,而且无需复杂的冷冻设备。不过,迄今家畜胚胎冷冻的结果还是有待提高的,尽管牛、绵羊、山羊桑葚胚和囊胚用玻璃化法冷冻已经成功,移植后产了仔。另外,卵母细胞、早期胚胎、显微手术(切割、克隆、活组织检查)后的胚胎、猪胚胎冷冻成功率还很低。因此,为使胚胎移植技术能在生产中应用和开展胚胎显微操作、体外受精、克隆和基因转移之类生物技术的试验及应用,很有必要加强研究建立起更为有效的胚胎冷冻解冻方法。     

牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究

本文进行了牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究。摸索出了提高牛冷冻胚胎成活率和移植受胎率的综合配套技术。牛冷冻胚胎解冻成活率达８４．４％（５７／１２２）。其中１９９６年移植受胎率达到５５．６％（２０／３６）。Ａ级胚胎达以７７．８％（２１／２７），并在我国首次获得中国荷斯坦牛冷冻胚胎的二分胚的同孵孪生牛犊。且达到４２．９％（３／７）移植受胎率。     

牛冷冻胚胎移植的探索与应用

用不同的冷冻方法对胚胎质量和移植成功率进行比较，常规冷冻法胚胎可用率高达８０．２６％；受体牛与供体牛发情同期化越接近，胚胎质量越好，移植成功率越高。３年来共移植冷冻胚胎１５２头牛，受胎６７头，冷冻胚胎移植成功率平均４４．０８％。     

不同抗冻剂和冷冻—解冻方法对绵羊胚胎冷冻效果的研究

<正> 前言 到目前为止,国外研究绵羊胚胎冷冻并获得活的后代的有:Moor,N.W.(1976);Willadsen,S.M.(1977);Willadsen,S.M.(1976)。牛、羊胚胎冷冻一解冻后,存活率的变化幅度很大,多数移植成活并发育至产出活仔畜的数量约占全部冷冻胚胎数的35％。 哺乳动物胚胎冷冻过程中,不同抗冻剂配合使用不同的冷冻—解冻方法,对冷冻胚胎解冻后的存活率有明显的影响。目前很多学者对抗冻剂及冷冻和解冻方法进行了大量     

猪胚胎冷冻移植成功

将哺乳类动物的胚胎冷冻保存在液氮中的试验已经在一些动物成功,如小鼠(Whit-tingham等,1972),牛(Wilmut和Rowson,1973)、绵羊(Willadsen等,1976)、山羊(Bilton和Moor,1976)和马(Yamamoto等,1982)。牛的冷冻胚胎已经商业化生产。然而,猪胚胎的冷冻和解冻还未获得成功。据报道,猪的胚胎对于低温,即使是+10℃(Wil-mut,1972;Niemann,1985)都极敏感。本研究是检验由桑葚胚到孵出期囊胚各胚龄猪胚胎冷冻-解冻后能否存活。采用有性周期的8～24个月龄、体重120～     

进口奶牛冻胚一步解冻移植效果的研究

冷冻胚胎移植效果不仅能检验胚胎冷冻保存技术的可靠性,且直接影响牛胚移技术的普及应用与商业利益。与传统的胚胎冷冻一解冻处理技术相比较,牛冷冻胚胎解冻后立即移植给受体牛更适于现场操作,简化了移植前胚胎的分步脱甘油处理,具有省时、不需专门仪器设备等优越性。如果直接移植效果接近或超过冷冻精液人工授精技术水平（情期受胎率平均55％）,则对提高冷冻胚胎的利用率,增进国际问的引种,以及形成胚胎产业化、推动胚胎移植技术商业化具有重要意义。     

锦江牛保种胚胎制作效果初探

为加快牛冷冻胚胎生物保种技术的应用推广,探索冷冻胚胎制作方法及效果,选择年龄16月龄至6岁的锦江母牛20头,分成初产母牛组(8头)和经产母牛组(12头)2组,采取同期发情、超数排卵、人工授精、冲胚、胚胎鉴定和冷冻保存等方法,采集制作锦江牛的冷冻胚胎并对其效果进行分析。结果表明,经产和青年2组牛同步发情征状明显分别占83.3%和87.5%,差异不显著(P0.05);胚胎采集方面:胚胎总数经产牛头均(7枚)是青年牛(6.3枚)的111.1%,A级、B级胚胎经产牛头均(5.4枚)是青年牛(2.7枚)的2倍。同期发情、超数排卵效果明显;年龄在3岁左右的经产母牛冷冻胚胎采集制作效果更好。     

牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究

进行了牛胚胎冷冻技术研究，重点研究了提高超排效果和冷冻胚胎移植受胎率的方法。头均获可用胚胎数达到７．０－７．４枚，牛冷冻胚胎移植受胎率达到４６．７％（５７／１２２），其中１９９６年达到５５．６％（２０／３６），Ａ级胚胎达到７７．８％（２１／２７）。在我国首次获得中国荷斯坦牛冷冻胚胎二分胚的同卵孪生牛犊，二分胚移植受胎率达到４２．９％（３／７）。     

奶牛胚胎超低温长期保存成功

用6～7日龄奶牛胚胎进行超低温冷冻保存试验。有10个胚胎在1.5MDMSO中以1℃/分从室温降到-7℃,诱发结晶后,以0.3℃/分降温到-60℃,然后放入液氮内保存373～375天。解冻时从液氮取出,以4℃/分的速率(-50℃到-10℃)升温到-10℃,直接放入20℃水中。除去DMSO后,有5个形态正常。把8个(其中3个异常)移给4头受体后,有2头妊娠,1头生下1对双胎(1母1公),另1头产1母犊。试验比较了不同冷冻保护剂和不同方法冷冻保存奶牛胚胎后的结果。40个胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存2-375天后,有17个形态正常(42.50％)。把20个胚胎移给13头受体,有2头妊娠(15.38％),63个胚胎在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存1-297天后,找回的57个中有30个形态正常(52.63％)。把29个胚胎移给22头受体没有1头受孕。试验表明,奶牛胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存1年后仍然存活。解冻后正常胚胎的百分率和在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存的胚胎解冻后的正常胚胎百分率没有显著差异。但后一种冷冻方法冷冻的胚胎移植后没有成功。应再进一步试验研究。     

湟水谷地大面积推广荷斯坦牛的胚胎移植试验

自1951年美国第1头胚胎移植牛诞生以来，胚胎移植技术发展得非常迅速。到1990年，美国荷斯坦牛核心母牛群的27．5％和最好种公牛的44．0％来自胚胎移植的后代，在欧洲牛冷冻胚胎的使用率达47．8％。据不完全统计，目前全世界年产胚胎移植牛超过35万头。我国牛胚胎移植技术起步较晚，但发展快，1978年手术胚胎移植奶牛诞生，1982年冷冻胚胎移植成功，     

影响锦江牛胚胎制作效果的因素分析

利用生物辅助保种技术(冷冻胚胎),探索影响锦江牛胚胎制作效果的因素,对牛个体膘情、经产牛、青年牛、胚胎制作时间等进行分析研究。结果显示:经产牛头均A、B级胚胎数、头均获卵数分别是青年牛的190%和181.3%;中上等体膘牛(3~4分)头均A、B级胚胎数、头均获卵数分别是上等体膘牛(4分)的3.1倍、2.3倍;A、B级胚胎数占获卵数的比例为68.2%,高于上等体膘的53.5%(P0.05)。结果表明:锦江牛冷冻胚胎制作效果与牛个体膘情密切相关,选择中上等体膘(3~4分)经产牛是最优选择。     

牛胚胎冷冻移植技术

牛胚胎冷冻保存,是胚胎移植实践中不可缺少的技术。试验人员自1981年后用程序冷冻机对牛胚胎进行了初步试验。材料及方法:①供试胚胎:所用18个胚胎(后期桑椹胚——囊胚期的胚胎),都是由超排处理和人工授精的供体牛上于第7天(排卵日为第1天)非手术收集的;②冷冻液:在林格氏液和非活化血清的2:1的液体内加青霉素800U/ml,再逐步加入甘油1.0M作为冷冻液,使胚胎在冷冻液中平衡60分钟;③冷冻方法:把胚胎放入装冷冻精液用的0.5ml管内,用程序冷冻机(第三代,FFP_(190))冷冻,该程序     

中国荷斯坦牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究

牛冷冻胚胎解冻成活率达８４．４％（３８／４５）;冷冻胚胎移植总受胎率达到４６．７％（５７／１２２）,其中１９９６年达到５５．６％（２０／３６）,Ａ级胚胎达到７７．８％（２１／２７）。并在我国首次获得中国荷斯坦牛冷冻胚胎二分胚的同卵孪生牛犊,且达到４２．９％（３／７）的移植受胎率。