葡萄糖对体外培养的牛脂肪细胞HSL mRNA和ADPN mRNA丰度的影响

在体外牛脂肪细胞培养介质中分别添加0,5,10,15,20,25 mmol/L等不同梯度的葡萄糖,各浓度组均设置3个重复,应用荧光定量PCR技术,观测不同浓度的葡萄糖对体外单层培养的牛脂肪细胞脂联素（ADPN）mRNA与甘油三酯脂肪酶（HSL）mRNA丰度的影响。结果表明,葡萄糖可抑制牛脂肪细胞ADPN mRNA的表达,并促进HSL mRNA的表达。     

健康奶牛围产期脂肪组织ADPN mRNA和HSLmRNA丰度

为探讨脂联素(ADPN)与激素敏感脂肪酶(HSL)对围产期奶牛脂肪动员的影响及其相互关系,随机选取围产期健康奶牛10头,分别于产前28天、产前14天、产后1天、产后14天和产后28天,应用荧光定量RT-PCR法检测其脂肪组织ADPN mRNA和HSL mRNA丰度。结果表明:在围产期,随着分娩日龄的临近,其脂肪组织的HSL mRNA水平随着ADPN mRNA丰度的降低而下降,产后则随其升高而上升,初步推测脂联素可能是通过调控脂肪HSL mRNA的表达和分泌来调节围产期奶牛脂肪的。     

瘦蛋白(Leptin)对体外培养新生牛脂肪细胞Leptin、HSL基因表达的影响

取单层生长良好的脂肪细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、2.5、5、10、50、100μg/L的外源牛重组瘦蛋白(Leptin),培养12h后提取总RNA,每个处理3个重复(孔),应用半定量PCR方法检测外源Leptin对脂肪细胞Leptin mRNA和HSL mRNA水平的影响.结果表明,Leptin对脂肪细胞内Leptin mRNA表达具有抑制作用,但一定浓度的Leptin能提高脂肪细胞内HSL mRNA水平,其中以5μg/L Leptin的作用最为明显;当Leptin的质量浓度超过5μg/L,HSL mRNA表达水平呈下降趋势.     

NEFA和BHBA对体外培养的脂肪细胞HSL、ADPN mRNA表达的影响

在体外培养的牛脂肪组织和脂肪细胞中,分别添加5个浓度梯度的NEFA和BHBA,均设3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测不同浓度的NEFA和BHBA对牛脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明:NEFA在一定浓度范围内(0.2~0.8 nmol/L)对ADPN mRNA表达有显著促进作用并呈剂量依赖性,而高浓度(>1.6 nmol/L)时又显著下调其表达;0.2~0.8 nmol/L NEFA对HSL mRNA的表达有抑制作用,呈剂量依赖性,但在高浓度时(>0.8 nmol/L)反而促进了其表达(P<0.05)。低浓度的BHBA对HSL mRNA的表达无显著抑制作用,高浓度(1.2 mmol/L)的BHBA显著下调HSL mRNA的表达,并呈剂量依赖性;低浓度(<0.6mmol/L)的BHBA对ADPN mRNA的表达无明显作用,但高浓度的BHBA(>0.6 mmol/L)对ADPN mRNA的表达具有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:代谢中间产物可通过促进ADPN mRNA或抑制HSL mRNA的表达来调节脂肪代谢。     

乳牛前脂肪细胞原代培养过程中ADPN基因和HSL基因表达水平的检测

选取犊牛大网膜脂肪组织，进行牛前脂肪细胞的单层贴壁培养，在细胞接种后第4、6、8、10、12、14、16d分别提取细胞总RNA，采用实时荧光定量RT—PCR方法，检测了体外培养的犊牛前脂肪细胞不同时期ADPN基因mRNA和HSL基因mRNA的表达情况。结果表明，单层培养的脂肪细胞在第4、6、8、10、12、14、16d，ADPN基因mRNA的表达水平呈先下降后升高的趋势，而HSL基因mRNA的表达水平则呈下降趋势。     

脂肪细胞因子脂联素与围产期奶牛脂肪动员关系

选择健康奶牛和自然发生酮病奶牛,应用荧光定量RT-PCR方法,观测健康奶牛围产期间及酮病牛脂联素(ADPN)与激素敏感脂肪酶(HSL)表达的规律。结果表明,在健康奶牛的围产期,脂肪组织ADPN mRNA和HSL mRNA变动趋势相同且呈正相关,与机体能量代谢状态一致。酮病牛脂肪组织HSL mRNA的表达低于产后健康奶牛,但ADPN mRNA却极显著地高于健康奶牛产后各时段(P<0.01)。     

胰岛素、胰高血糖素对体外培养的牛脂肪细胞HSL mRNA和ADPN mRNA丰度的影响

试验在单层培养的新生犊牛脂肪细胞中,分别添加胰岛素（INS）与胰高血糖素（GN）,每个激素设置6个梯度3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测2种激素对ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明,胰岛素抑制了脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,胰高血糖素促进了ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,且ADPNmRNA与HSL mRNA存在相关性。     

NEFA对体外培养的牛脂肪组织HSLmRNA和ADPNmRNA丰度的影响

脂联素(ADPN)是脂肪组织基因表达的蛋白质产物之一,脂联素的蛋白酶水解产生的球状头部区域(gAcrP30)可以降低高脂试验餐和静脉注射脂肪乳剂产生的血浆非酯化脂肪酸,可以增加组织细胞内甘油三酯(TG)含量,脂质代谢障碍时血浆脂联素浓度下降[1-3],可见脂联素参与了脂肪代谢.但代谢中间产物NEFA对脂肪细胞HSLmRNA 和ADPNmRNA表达的影响目前尚不清楚.     

重组脂联素对皖南花猪脂肪细胞脂联素及其受体mRNA表达的影响

脂联素（Adp）是主要由脂肪组织分泌的细胞因子,有重要的生理作用。本试验旨在研究重组脂联素（rAdp）对皖南花猪脂肪细胞脂联素及其受体2,AMP激活蛋白激酶（AMPK）、过氧化物增殖剂活化受体α（PPARα）mR-NA表达的影响。选择10d皖南花猪皮下脂肪组织分离前体脂肪细胞,增殖培养至80%融合后换分化培养基培养,细胞分化后用0、2和10mg/L rAdp分别处理12和48h。油红O染色法鉴定脂肪细胞,MTT方法检测细胞活力;酶法测定培养液中甘油释放量,荧光定量RT-PCR方法检测脂肪细胞脂联素（Adp）、脂联素受体1（AdpR1）、脂联素受体2（AdpR2）、PPARα和AMPK mRNA表达。结果显示,rAdp处理后,脂肪细胞活力总体有降低趋势,10mg/L处理48h达到显著水平（P〈0.05）;rAdp处理对甘油释放的抑制作用未达到差异水平。rAdp处理12h后,脂肪细胞AdpR1和AdpR2mRNA表达显著升高（P〈0.01）,但无剂量依赖性;rAdp处理48h后,脂肪细胞AdpmRNA表达显著下降（P〈0.05）。rAdp处理12h后,脂肪细胞PPARαmRNA表达显著升高（P〈0.01）,且有剂量效应性;而AMP AMPK mRNA表达均无显著性变化。结果提示,重组脂联素处理猪原代脂肪细胞有降低细胞活力和抑制脂肪细胞甘油释放量的趋势,能显著上调AdpR1、AdpR2和PPARα基因的表达,从而刺激脂肪酸氧化和甘油三酯的水解作用。     

围产期酮病牛脂联素mRNA和甘油三酯脂肪酶mRNA的表达

选择自然发生酮病牛10头、正常对照组奶牛（健康牛）10头。分别采取酮病牛和产后不同时期的奶牛尾部皮下脂肪组织,应用荧光定量PCR法检测脂联素（ADPN）mRNA与甘油三酯脂肪酶（HSL）mRNA表达的状况。酮病牛与对照组（健康）牛分别颈静脉采血,测定葡萄糖（GLU）、游离脂肪酸（NEFA）、β羟丁酸（BHBA）、甘油三酯（TG）以及胰岛素（INS）、胰高血糖素（GN）等相关指标。结果表明：酮病奶牛血糖显著降低,血浆NEFA和BHBA、血清INS降低和INS/GN变小;酮病奶牛HSLmRNA的表达低于围产期健康奶牛产后14d和产后28d,但ADPN mRNA却极显著地高于围产期健康奶牛产后的各生理时期,表明酮病牛因能量代谢紊乱脂肪动员产物NEFA和BHBA的增多,激发导致ADPN mRNA的表达,但ADPN mRNA的表达增加到一定量时反而会降低HSL mRNA的表达,说明ADPN参与了脂肪代谢的调节。     

INS、GLN和LP对体外培养牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度的影响

为了阐明胰岛素（INS）、胰高血糖素（GLN）和瘦蛋白（LP）对牛脂肪细胞内激素敏感酯酶（HSL）、LP的mRNA表达的调控作用，本试验采用体外原代培养牛脂肪细胞的培养液中添加不同浓度的胰岛素（0、5、10、20、50、100mmol／L）、胰高血糖素（O、25、100、200、500、1000pg／mL）和瘦蛋白（O、2．5、5、10、50、100ng／mL），培养12h后，应用建立的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法检测牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度。结果表明：胰岛素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用，对LP的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用。胰高血糖素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用，对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达无作用。瘦蛋白对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达先呈现剂量依赖性促进作用，后呈现抑制作用。但对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用。     

NPY对犊牛脂肪细胞HSL和ACC的影响

试验探讨NPY在脂肪动员中的作用。体外培养犊牛脂肪细胞,通过添加不同浓度的外源性NPY(0、50、100、200、500、1 000 pg/ml)观察对脂肪细胞脂肪动员关键酶的影响。结果表明:①NPY降低脂肪细胞HSL mRNA的水平和活性,具有一定的剂量依赖性;②NPY可直接上调ACC的表达,并具一定的剂量依赖性;③随着NPY添加时间的延长,脂肪细胞HSL mRNA的水平和活性逐渐降低;④随着NPY添加时间的延长,脂肪细胞ACC的表达也逐渐升高。因此,NPY可在一定程度上促进脂肪合成,抑制脂肪动员的发生。     

地塞米松、油酸、乳酸对体外培养脂肪细胞HSL mRNA表达的影响

取体外培养生长良好脂肪细胞,培养介质中分别添加0、10、20、40、80、160mg/L地塞米松,0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mmol/L油酸,0、10、20、30、40、50mg/L乳酸,培养24h后提取总RNA,每个处理3个重复,分别采用荧光定量PCR法检测地塞米松、油酸、乳酸对脂肪细胞HSL mRNA丰度的影响。结果表明油酸、乳酸抑制脂肪细胞内HSL mRNA表达,抑制作用随浓度增加而增强;地塞米松促进脂肪细胞内HSL mRNA表达,是剂量依赖性。     

猪甘油三酯水解酶和激素敏感脂酶基因表达规律的研究

利用半定量RT-PCR法分析比较了甘油三酯水解酶(Triacylglycerol hydrolase,TGH)和激素敏感脂酶(Hormone-sensitive lipase,HSL)基因在不同猪种、不同发育阶段及不同部位脂肪组织中转录表达的差异,探讨其在猪脂肪组织的表达规律。结果显示,脂肪型个体TGHmRNA表达丰度显著低于瘦肉型和杂交型个体,成年猪较初生仔猪低,皮下、腹膜和内脏脂肪组织中TGH表达量依次递增;其变化规律与HSL相同。此外,对分离培养的原代前体脂肪细胞通过诱导分化和油红O染色区分分化状态,分析TGHmRNA表达的时序变化,发现TGH在前脂肪细胞中不转录表达,诱导分化后开始表达,且在诱导分化第4天表达量最高,分化第10天表达量下降,达到峰值的时间较HSL早。结果表明,TGH的表达与个体肥胖程度、年龄、脂肪组织部位以及脂肪细胞分化程度相关,同时,在脂肪细胞分化过程中,TGH表达峰值早于HSL,提示TGH在脂肪细胞发育过程中可能较早承担基础脂解作用。     

神经内分泌因子、代谢产物对体外培养新生犊牛肝细胞胰高血糖素受体mRNA丰度的影响

为阐明神经内分泌因子胰岛素（In）、胰高血糖素（GLN）、瘦素（LEP）和代谢产物非酯化脂肪酸（NEFA）、β-羟丁酸（BHBA）、葡萄糖（GLU）在奶牛肝糖代谢、脂代谢中的调控作用，应用荧光定量PCR（fluorescent quantitative PCR）法观察了神经内分泌因子、代谢产物对体外培养新生犊牛肝细胞胰高血糖素受体（glucagon receptor，GLNR）mRNA丰度的影响。结果显示：随着培养液中In、NEFA、BHBA和GLU的升高，GI。NRmRNA表达逐渐增加（P〈0．01）；随着培养液中GLN浓度的升高，GLNRmRNA表达逐渐降低（P〈0．01）；而随着培养液中瘦素浓度的升高，GLNRmRNA的表达呈先升高后降低的趋势（P〈0．01）。表明：神经内分泌因子In、GLN、LEP和代谢产物NEFA、BHBA、GLU直接调控新生犊牛肝细胞GLNRIT／RNA的表达。     

大豆异黄酮对奶牛脾脏和肠系淋巴结淋巴细胞干扰素γ、白介素2和白介素4浓度以及雌激素受体β mRNA表达的影响

本试验旨在研究大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结淋巴细胞增殖、活化及细胞因子分泌的影响.采用单因素试验设计,不同浓度的大豆异黄酮[0.00(对照)、0.25、1.00、5.00、25.00和100.00μg/mL]与淋巴细胞于37℃、5％CO2下分别共育4、24和48h,采用双抗夹心酶联免疫法测定培养上清液中的干扰素γ、白介素2和白介素4的浓度,用实时定量PCR法测定脾脏和肠系淋巴结的淋巴细胞中雌激素受体βmRNA表达量.结果表明:1)0.25和1.00 μg/mL的大豆异黄酮与脾脏淋巴细胞共育一定时间后均能显著或极显著提高培养上清液中干扰素γ和白介素2的浓度(P＜0.05或P＜0.01),48 h后,5.00和25.00 μg/mL大豆异黄酮能显著抑制脾脏淋巴细胞干扰素γ和白介素2分泌(P＜0.05).2)1.00和5.00 μg/mL大豆异黄酮与肠系淋巴结淋巴细胞共育一定时间后干扰素γ和白介素2浓度均显著或极显著提高(P＜0.05或P＜0.01);0.25 μg/mL大豆异黄酮趋于增加二者浓度,但差异不显著(P＜0.05);48 h后,25.00 μg/mL大豆异黄酮抑制了干扰素γ(P＜0.05)和白介素2(P＜0.05)的分泌.3)与对照组相比,试验组脾脏淋巴细胞白介素4浓度无显著变化(P＞0.05),而肠系淋巴结淋巴细胞白介素4浓度显著或极显著降低(P ＜0.05或P＜0.01).4)大豆异黄酮能够提高脾脏淋巴细胞干扰素γ/白介素4,但趋于降低肠系淋巴结淋巴细胞干扰素γ/白介素4.5)大豆异黄酮显著或极显著提高了奶牛脾脏和肠系淋巴结中淋巴细胞雌激素受体βmRNA的表达量(P＜0.05或P＜0.01),且二者间存在正比的剂量关系.总之,大豆异黄酮能够促进奶牛脾脏和肠系淋巴结中淋巴细胞分泌干扰素γ和白介素2,提高干扰素γ/白介素4,促进雌激素受体βmRNA表达,降低白介素4浓度;低剂量(0.25～5.00 μg/mL)的大豆异黄酮能够获得较好免疫促进效果,而高剂量(25.00～100.00μg/mL)更能促进雌激素受体βmRNA表达.     

不同能量摄入水平对围产期奶牛脂肪组织Leptin mRNA和HSL mRNA表达的影响

选用围产期健康奶牛30头随机均分为3组,其中组为对照组,组和组为试验组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组于产前28d开始分别饲喂中国奶牛饲养标准(2000)标准日粮(能量摄入100%组)、标准日粮增加20%日粮(能量摄入120%组)和标准日粮减少20%日粮(能量摄入80%组),产后各组奶牛均饲喂同一标准日粮至56 d。试验各组奶牛分别于产前28、14 d、产后1、14、28、56 d尾根部手术采取脂肪样品,采用荧光RT-PCR法对脂肪组织Leptin mRNA及HSL mRNA表达水平进行定量分析。结果表明,不同能量摄入水平显著影响脂肪组织Leptin mRNA和HSL mR-NA表达。低能饲喂明显提高了脂肪组织中Leptin mRNA表达,降低了HSL mRNA表达;高能饲喂明显降低了脂肪组织中Leptin mRNA表达,提高了HSL mRNA表达。     

日粮类型对猪肌肉组织HSL mRNA和Obese mRNA基因表达的影响

选用20 kg左右的"杜×长×大"外三元杂交仔猪20头,随机分为2组,分别饲喂豆粕型和杂粕(双低菜籽粕+豆粕)型2种不同类型的日粮,饲养猪至体重达到100 kg左右时屠宰测定瘦肉率,取背最长肌肌肉组织,采用RT-PCR技术检测分析HSL mRNA和Obese mRNA表达情况,以探索出日粮类型与基因表达的关系。结果显示,杂粕日粮较豆粕日粮可显著增加HSL mRNA表达量、减少Obese mRNA表达量(P<0.05),2种日粮类型虽对猪瘦肉率无显著性影响,但是从实际值来看,杂粕日粮表现出提高趋势,较豆粕日粮提高3.5%(P>0.05)。