无血清全悬浮PK15细胞培养猪圆环病毒2型的研究

为改进猪圆环病毒2型的培养工艺,驯化了一株可无血清培养的全悬浮PK15细胞用于培养猪圆环病毒2型,并对病毒的敏感性、接毒时间、接毒量、收获方法进行了试验.结果表明,用该细胞培养猪圆环病毒2型,如果采用批次收获,接毒时细胞密度为0.5×106/mL,接毒量为0.1 MOI,接毒72 h后收毒,病毒滴度能达到106.4 T...     

猪圆环病毒2型高敏感性细胞的克隆

利用有限稀释法从现有PK15细胞系中克隆出一株对猪圆环病毒2型具有高敏感性的细胞克隆株PKK,初步研究了该克隆株对猪圆环病毒2型增殖的特性及稳定性。间接免疫荧光实验结果表明将该克隆株连续传代50代后对猪圆环病毒2型感染性不变,病毒滴度最高可达10^7.0TCID50/mL.这一研究结果将有利于进一步研究猪圆环病毒2型体外复制、体外诊断及开发高效价的PCV2全病毒灭活疫苗。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选

为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×10⁴拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。     

猪圆环病毒悬浮培养工艺研究

为了降低疫苗生产成本,本研究通过优化悬浮细胞培养和猪圆环病毒2型的增殖工艺,提高了病毒液的滴度和产量,从而提升疫苗效果。研究发现,悬浮细胞最佳的传代密度和培养时间分别为1.0×106 CFU/mL和72 h,在猪圆环病毒2型的增殖工艺优化中确定的最佳接毒剂量为5%,病毒液滴度最高的收毒时间为72 h。     

猪圆环病毒病及其防治

1病原猪圆环病毒属于圆环病毒科,本科有植物病毒和动物病毒,动物病毒有鸡传染性贫血病毒、鹦鹉嚎羽病毒和猪圆环病毒等。本病毒对环境的抵抗力较强,在70℃可存活15分钟,56℃不能将其灭活。     

猪圆环病毒分子生物学研究进展

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是迄今发现的最小的动物病毒,对养猪业造成的损失日趋严重.主要对猪圆环病毒的基因组、致病基因、病毒受体等进行综述,旨在为猪圆环病毒的研究和猪圆环病毒病的预防提供参考.     

猪圆环病毒2型PK15细胞系高敏感性细胞的克隆

利用有限稀释法从现有PK15细胞系中克隆出一株对猪圆环病毒2型具有高敏感性的细胞克隆株PKK,初步研究了该克隆株对猪圆环病毒2型增殖的特性及稳定性。间接免疫荧光实验结果表明将该克隆株连续传代50代后对猪圆环病毒2型感染性不变,病毒滴度最高可达107.0TCID50/mL。这一研究结果将有利于进一步研究猪圆环病毒2型体外复制、体外诊断及开发高效价的PCV2全病毒灭活疫苗。     

猪瘟病毒与猪圆环病毒2型混合感染病例的诊断

为查明贵阳市某猪场出现仔猪发病死亡和母猪流产的原因,采集病料进行细菌分离培养、病毒分子生物学检测.结果:病料中检出猪瘟病毒、猪圆环病毒2型核酸,未分离出细菌,结合临床症状、病理变化诊断为猪瘟病毒与猪圆环病毒2型混合感染.     

猪圆环病毒2型的分离鉴定及优化培养

为研究圆环病毒病的流行情况及防治奠定基础,从湖北省某些大型养猪场采集临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病死猪的淋巴结、脾等组织病料,进行病毒分离和鉴定。对分离病毒进行了间接免疫荧光鉴定、电子显微镜鉴定、核苷酸序列比对分析及动物感染试验;同时对病毒的培养条件进行优化,用RT-PCR检测感染细胞中的病毒核酸含量。结果表明,从猪病料中分离到1株猪圆环病毒2型(PCV2),命名为PCV2-WH。分离毒株经间接免疫荧光可检测到特异的PCV2荧光斑,电子显微镜下可观察到直径17 nm大小、圆形病毒粒子;利用一对圆环病毒2型ORF2基因引物进行了PCR扩增,将所得序列与GenBank收录的9株圆环病毒2型ORF2基因的核苷酸序列比对,同源性为98.2%～99.9%。非免疫猪接种出现明显的临床症状和病理变化。优化培养的结果显示,细胞与病毒同步接种培养24 h后,用300 mmol/L D-氨基葡萄糖于37℃作用30min后继续培养48 h的病毒滴度最高。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。     

反复冻融次数和不同保存温度对病毒滴度的影响

为探讨在有宿主细胞的情况下,反复冻融和不同保存温度对病毒滴度的影响,将收集的含ST细胞培养的猪细小病毒和含Vero细胞培养的伪狂犬病病毒经过不同次数的反复冻融,测定其病毒滴度。将收集的猪细小病毒液和伪狂犬病病毒液分别在4、22、-20、-80℃保存,间隔一段时间后测定半数组织细胞感染剂量(TCID_(50)),以了解病毒滴度。结果显示,含ST细胞的猪细小病毒和含Vero细胞的伪狂犬病病毒经过反复冻融3次之后,病毒滴度比未经冻融的病毒滴度分别提高了1.81lg和1.86lg。同一温度下,随着放置时间的增加,病毒滴度均呈下降的趋势。在一定时间内,不同保存温度下病毒滴度有明显区别,但在-20℃和-80℃条件下保存的病毒滴度下降比4℃和22℃条件下保存的慢。因此,在培养病毒的时候可以用反复冻融3次的方法来提高病毒的滴度。4℃和22℃只能作为病毒的短期储存温度,-20℃和-80℃对于病毒来说是合适的保存温度。     

猪圆环病毒病的防治

猪圆环病毒病是指一种由猪圆环病毒所引起的哺乳仔猪和育肥猪的临床或亚临床型传染病.对猪圆环病毒的临床症状、病理变化、诊断、治疗及防制措施等进行了概述.     

猪圆环病毒的危害与净化

猪圆环病毒是圆环病毒科圆环病毒属的DNA病毒,根据其基因型的不同可分为1型猪圆环病毒和2型猪圆环病毒。1型猪圆环病毒通常不会对猪造成任何危害,而2型猪圆环病毒则具有较大的致病性。该病毒不仅与猪细小病毒病和繁殖障碍综合症等多种疾病存在一定的相关性,同时可引发猪的肠炎以及间质性肺炎等多系统功能障碍性疾病,给生猪养殖业造成巨大的经济损失。因此,做好猪圆环病毒的净化工作具有非常重要的现实意义。     

细胞密度对猪圆环病毒增殖与检测准确度的影响

为了提高猪圆环病毒毒液生产批次间滴度的稳定性,提高培养毒液病毒滴度检验和成品疫苗效力检验的准确度,本实验对PK15细胞接种密度进行了研究。结果显示:病毒培养阶段,细胞最佳接种密度为2~2.5×10~5/m L,毒液滴度和疫苗效力检验时,最佳细胞接种密度为1.5~2×10~5/m L。     

PCR快速检测猪圆环病毒2型的方法建立及应用

根据GenBank公布的猪圆环病毒2型保守序列设计了一对引物,建立了检测猪圆环病毒2型的PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究.该PCR方法对猪圆环病毒2型扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对猪圆环病毒2型检测的灵敏性为1pg总DNA量.结果表明,该PCR方法特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于猪圆环病毒2型的早期确诊和病毒鉴定.     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是圆环病毒科圆环病毒属成员,为已知的最小动物病毒之一,分为I型(PCV-1)和II型(PCV-2)两个型.由于猪圆环病毒可以使感染猪出现免疫抑制,可以与多种病原混合感染导致多系统、多组织的损伤,造成严重的经济损失,已经成为当前世界关注的焦点.     

猪圆环病毒病诊断与综合防控技术

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起的,以系统功能障碍、免疫力下降为特征的一种传染病,猪是唯一的易感宿主,各年龄段的猪均可感染.我国自2001年发现该病以来,全国各地不同规模化的猪场都在发生该病,给生猪养殖行业造成了巨大的经济损失.文中从猪圆环病毒病的病原、流行特点、临床症状、诊断和防控措施进行阐述,为猪圆环病毒病的综合防治提供一定的参考依据.     

表达PCV2 CAP蛋白和猪IL-18重组PRV PGO18株的生物学特性

为了探讨表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病病毒PGO18作为疫苗候选株的潜在价值,对其在ST细胞上的培养特性,ST、VERO、IBRS-2、PK-15和IPEC细胞上增殖情况,生长特性,遗传稳定性,对小鼠安全性及其理化特性等生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒PGO18株与亲本株猪伪狂犬病病毒HB98具有相似的培养特性和生长特性,在ST、VERO和IBRS-2细胞上的增殖滴度TCID50与亲本株(107.75/0.1mL)相当,遗传稳定性良好,安全性试验表明对小鼠是安全的;理化特性试验说明该病毒具有猪伪狂犬病病毒的通性。     

猪圆环病毒基因及其疫苗的研究进展

猪圆环病毒(PCV)感染是近几年新发现的一种猪的传染病,目前,国际上已分离获得2个不同血清型的猪圆环病毒(PCV),并命名为猪圆环病毒1型(PCV-1)和猪圆环病毒2型(PCV-2).PCV-1对猪无致病性,而PCV-2被认为是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原.该病在包括中国在内的各养猪国家广泛流行,发病猪死亡率10%～30%不等,较严重的猪场在暴发本病时死淘率高达40%,给养猪业造成严重的经济损失,同时也给各国科研人员带来了新的挑战和任务,现已受到国内外学者的高度重视,对此病的研究特别是对其疫苗的研究正日益受到关注.文章中就猪圆环病毒基因的结构特点、功能以及疫苗等方面进行了综述,以期为猪圆环病毒基因及其疫苗的研究提供一定依据.     

山东地区猪圆环病毒病的流行趋势与防控对策

在畜牧养殖方面,山东省属于养殖大省,尤其在生猪养殖业也是重要省份.近几年在养猪生产中虽然猪群已经接种免疫猪圆环病毒疫苗,但是免疫效果较差,猪群发生圆环病毒病的几率还是很高,给山东养猪业带来巨大的经济损失.猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型病毒引起的,猪群有的能够直接感染本病毒,有的在饲养环境恶劣、营养不良等情况下,体质变差...     

猪乙型脑炎病毒在Vero细胞上的繁殖特性及其灭活疫苗的免疫原性研究

试验旨在对猪乙型脑炎病毒（JEV,SA14-14-2株）在传代细胞上的繁殖培养特性及其制备的灭活疫苗免疫原性进行研究,确定猪JEV在细胞培养瓶中培养的关键技术参数及其灭活疫苗的免疫原性。以Vero细胞培养病毒,通过接种时间、接毒量、吸附时间、吸附温度、维持液pH、维持培养温度及培养时间7个条件的优化,将繁殖的病毒液冻融一次,采用病毒蚀斑数测定方法测定病毒滴度。按照优化好的条件繁殖一批毒液,经β-丙内酯灭活,与双相佐剂混合,制备成猪乙型脑炎灭活疫苗。两次免疫（间隔14 d）接种乙型脑炎抗体阴性仔猪,首次免疫前（0 d）、免疫后第7、14、21、28、35、42天采集血清,检测血清中和抗体。二免后第28天进行乙型脑炎P3强毒的攻击,攻毒前（0 d）、攻毒后第1、2、3、5、7、9天采集血浆,攻毒后第14天剖杀免疫猪,采集脑组织,检测血浆和脑组织中JEV。结果显示,用细胞培养瓶进行培养,将Vero细胞培养至48 h进行病毒接种,接种量为1 000 PFU/mL,病毒吸附温度为37℃,吸附时间为90 min,吸附后用pH 7.6~8.8维持液继续培养,培养温度为35℃,培养96 h后收获毒液,冻融一次,可获得较高滴度的病毒。仔猪免疫制备的灭活疫苗后血清抗体水平迅速升高,血浆和脑组织中均未检测出JEV,免疫组试验猪能抵抗强毒攻击,可获得有效免疫保护。本试验结果为猪乙型脑炎疫苗的生产提供了参考依据。