种鸡场孵化死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解死亡鸡胚中沙门菌的感染状况,采集351枚孵化后期死胚进行沙门菌分离鉴定,并采用K-B法进行了20种抗菌药物的耐药表型检测,采用PCR法对6类共50种耐药基因分布进行检测。结果显示,共分离到62株沙门菌,包括6个血清型。分离菌株对磺胺异噁唑耐药情况较严重,耐药率为37.1%,对其余19种药物耐药率均在26%以下,其中对亚胺培南、美罗培南、多黏菌素E、氯霉素、呋喃妥因敏感,且有16.1%(10/62)的菌株存在多重耐药现象,最高可耐14种抗生素;此外,PCR共扩增到18种耐药基因,且6类耐药基因的检出情况与耐药表型的符合率均在60%以上,其中喹诺酮类、四环素类的符合率为100%。结果表明,该种鸡场中鸡胚源性沙门菌的血清型复杂、多重耐药情况严重,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中,药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性。     

三黄种鸡场孵化死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解死亡鸡胚中沙门菌的感染状况,从河南省4家三黄种鸡场自带孵化场采集死胚样品,进行沙门菌分离、血清型鉴定,并用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测。结果:从356份死胚样品共分离到173株沙门菌,包括5种血清型:鸡白痢沙门菌(162株)、布利丹沙门菌(5株)、塞罗沙门菌(4株)、肠炎沙门菌(1株)、菲尔摩雷沙门菌(1株)。不同来源死胚中沙门菌的分离率和耐药情况差异显著;173株沙门菌对磺胺异噁唑(82.1%)、氨苄西林(74.0%)、四环素(49.1%)、土霉素(48.6%)耐药情况较严重,且43.4%(75/173)的菌株表现为多重耐药;对其他抗生素耐药情况较轻,耐药率在11%以下;对头孢他啶、美罗培南、亚胺培南、多黏菌素E、氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星敏感。PCR共扩增到13种耐药基因,且耐药基因的检出情况与耐药表型的符合率在72%以上,其中ESBLs类、氨基糖苷类、头孢菌素类的符合率为100%。结论:三黄鸡鸡胚感染的沙门菌血清型复杂、多重耐药严重,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中。     

河南地区麻种鸡死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解麻鸡死胚中沙门菌的感染和耐药状况,本研究于2014年9月～2015年8月采集河南省郑州、平顶山、漯河、商丘地区4个父母代麻鸡场孵化场死胚样品,进行沙门菌分离、血清型鉴定,并用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测。结果显示,695份死胚样品共分离到263株沙门菌,分离率为37.8%。包括9种血清型:鸡白痢沙门菌203株、爱丁堡沙门菌17株、汤卜逊沙门菌14株、塞罗沙门菌13株、田纳西沙门菌9株、吉姆皮斯Ⅱ沙门菌4株、加瓦尼沙门菌1株、泰米尔纳德沙门菌1株、恩德培Ⅱ沙门菌1株。其中有两个鸡场样品禽副伤寒沙门菌分离率超过鸡白痢沙门菌。263株沙门菌对磺胺异噁唑(69.6%,183/263)、氨苄西林(40.7%,107/263)、四环素(35.7%,94/263)、土霉素(35.4%,93/263)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(34.2%,90/263)的耐药较严重,且26.2%(69/263)的菌株表现为多重耐药;所有分离株对多粘菌素E、亚胺培南、美罗培南敏感;不同种鸡场来源的沙门菌耐药情况差异较大;用PCR方法共扩增到15种耐药基因,且检出的5类耐药基因与耐药表型的符合率在81.6%以上。本研究结果为制订种鸡群沙门菌病综合防控措施提供了参考。     

55株鸡胚源沙门菌的耐药性分析及ESBLs基因检测

为了解河南省某父母代麻鸡场死胚中沙门菌的耐药情况及ESBL基因流行特征,采集孵化后期死胚120份,通过PCR鉴定及血清分型鉴定,获得了55株沙门菌,包括6种血清型。采用K-B纸片法和双纸片协同测试法进行了药物敏感性及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,并运用PCR法对ESBLs阳性菌株进行了12种动物源沙门菌常见ESBLs基因的检测。结果显示,55株分离株对磺胺异恶唑(76.36%)、氨苄西林(65.45%)、磺胺甲恶唑(54.55%)的耐药情况较严重,对美罗培南、亚胺培南敏感;此外,产ESBLs的菌株有16株,阳性率为29.09%,PCR只检出TEM(100%)一种ESBLs基因,其余11种均未检出;ESBLs阳性菌株的耐药情况明显严重于ESBLs阴性菌株,且多表现为多重耐药。表明种鸡场感染的沙门菌血清型复杂、产ESBLs菌株阳性率较高,多重耐药现象与超广谱β-内酰胺酶密切相关。     

鸡源多重耐药沙门菌转座子与耐药基因的研究

为了解鸡源性沙门菌分离株多重耐药情况与转座子及耐药基因的携带关系,采用K-B纸片法对23株鸡源性沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR对分离菌株进行转座子及耐药基因检测。结果显示,23株分离株中有10株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,其中四环素-氨苄西林-甲氧苄啶-诺氟沙星-庆大霉素-环丙沙星是主要多重耐药谱;10株多重耐药菌中有8株分别携带不同种的转座子(tnpA、tn1721、tnp513、IS26),其中以转座子tnpA、tn1721和IS26的检出率最高,耐药基因中以blatem-1、tetA和tetB的检出率最高,携带转座子多的菌株中耐药基因检出率较高且耐药谱广。结果表明沙门菌多重耐药性与转座子的携带之间关系密切,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。     

广西钦州地区黄羽肉鸡场种鸡死胚沙门菌分离鉴定与耐药性分析

为了解广西部分地区黄羽肉鸡死胚中沙门菌的感染与耐药情况,于2018～2019年间分批次由广西钦州地区多个鸡场采集麻鸡死胚共计406个进行沙门菌分离、血清型鉴定。随后利用纸片法对所分离沙门菌的耐药性进行分析,并通过PCR方法对相应耐药基因进行检测。最终由406个死胚中分离164株沙门菌,且均为鸡白痢沙门菌。所分离菌株对磺胺异恶唑、四环素等抗生素具有较高的耐药性,且呈现严重的多重耐药现象。通过PCR方法共检测出16种耐药基因。研究结果为当地种鸡群鸡白痢净化及沙门菌病综合防治提供了有力参考。     

17株鹅源鼠伤寒沙门氏杆菌的分离鉴定与耐药分析

为了对鹅源鼠伤寒沙门氏杆菌进行分离、鉴定与耐药性分析,试验从病料中分离出菌株后采用生化试验、亲膜蛋白基因invA的PCR扩增、血清型鉴定、药敏试验对分离株进行了研究。结果表明:分离得到的17株菌株均为鼠伤寒沙门氏杆菌,这些分离株能发酵葡萄糖,不发酵乳糖,不利用蔗糖等,符合沙门氏杆菌生化特性;亲膜蛋白基因invA的PCR扩增得到大小为330 bp的目的条带;血清型鉴定显示,分离株血清型符合鼠伤寒沙门氏杆菌的血清型。药敏试验显示,82.35%的菌株对左氧氟沙星、氟苯尼考敏感,64.71%的菌株对卡那霉素敏感,64.70%的菌株对诺氟沙星敏感,58.82%的菌株对庆大霉素敏感,52.94%的菌株对新霉素敏感;64.71%的菌株对多西环素耐药,58.82%的菌株对链霉素耐药,35.29%的菌株对庆大霉素、卡那霉素耐药,29.41%的菌株对环丙沙星耐药;有11株分离株至少对2类抗生素耐药,其中7株分离株对3类及3类以上抗生素耐药。说明分离自鹅的鼠伤寒沙门氏杆菌对多种抗生素具有耐药性且出现多重耐药。     

银川地区鸡源沙门菌血清型鉴定及耐药性分析

为了解银川地区鸡源沙门菌的耐药性及优势血清型,采用药敏纸片扩散法测定了69株鸡源沙门菌对常用12种抗菌药物的耐药率,同时采用玻板凝集法对沙门菌进行了血清型鉴定。结果显示,所有菌株对12种抗菌药物均产生了不同程度的耐药性,其中对萘啶酸、复方新诺明、氨苄西林、头孢唑啉的耐药率较高;对美洛培南、环丙沙星的耐药菌株比率较低;多重耐药情况比较严重,部分菌株同时具有对12种抗菌药物的耐药性,具有5重耐药能力的菌株占21.74%。分离到的菌株中主要血清型为鸡白痢沙门菌(S.gallinarum),其次为鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium)和伤寒沙门菌(S.typhi)。     

重庆市荣昌区动物源沙门菌的检测与耐药性分析

为了了解重庆市荣昌区畜禽源沙门菌的流行特征和耐药情况,从荣昌区的一家规模化生猪养殖场和一家肉鹅养殖场分别采集动物粪便样品80份和30份,样品经过前增菌、选择性增菌、平板划线接种、挑取可疑菌落革兰氏染色并扩增沙门菌特异性基因invA,从而鉴定沙门菌分离株。对沙门菌分离株进行血清型分型和药物敏感性试验。试验结果显示,110份样品中共分离到8株沙门菌,其中猪源沙门菌6株,鹅源沙门菌2株。沙门菌血清型鉴定表明,8株沙门菌中有5株为鼠伤寒沙门菌,1株为乙型副伤寒沙门菌,1株为圣保罗沙门菌,1株沙门菌尚不能判断。药敏试验表明,沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的耐药现象最为严重,其次为酰胺醇类、青霉素类和氨基糖苷类。8株沙门菌分离株菌均为多重耐药菌株,尤其需要注意的是,分别有1株鹅源和猪源沙门菌对16种和17种抗菌药物产生耐药,多重耐药现象严重。     

河南省种鸡场鸡白痢沙门菌的耐药性分析

为调查河南省种鸡场鸡白痢沙门菌耐药状况,选用20种抗菌药物,采用K-B纸片法对2014-2015年分离自6个地区12个规模化种鸡场的395株鸡白痢沙门菌的耐药性进行检测,并运用PCR法对37种相关耐药基因进行检测。结果显示:分离菌株对磺胺异噁唑(74. 18%)、氨苄西林(50. 89%)、四环素(44. 56%)、土霉素(43. 05%)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(17. 97%)耐药较严重;且27. 84%(110/395)的菌株表现为多重耐药,最严重的可耐14种药物; 88. 19%的菌株对环丙沙星表现中介;分离菌株耐药率与耐药谱在不同地区或同一地区不同场间存在差异;共检测到12种耐药基因,且耐药基因与耐药表型的符合率在83%以上。表明河南省种鸡场鸡白痢沙门菌对青霉素类、四环素类、磺胺类药物耐药普遍,多重耐药较严重,耐药基因广泛存在于耐药菌株中。     

鸡源印第安纳沙门菌多重耐药性分析

采集山东不同地区鸡源沙门菌,根据Kauffmann-White方法测定分离株血清型,采用肉汤微量稀释法测试分离株对16种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测10种耐药基因,分析耐药表型和耐药基因之间的关系。结果显示：共鉴定出沙门菌80株,其中印第安纳沙门菌60株。药敏试验证实：60株印第安纳沙门菌对阿莫西林-克拉维酸、头孢唑啉、多黏菌素、氨苄西林、多西环素和甲氧苄啶等16种抗菌药物普遍耐药。88.33%菌株多重耐药分布在12~15耐,未发现3耐以下的菌株。PCR扩增出int1,blaTEM,aac（6’）-Ib-cr,floR,catA1,tetA,strA,cmlA 8种耐药基因。超过90%的菌株携带int1,blaTEM,floR和aac（6’）-Ib-cr耐药基因。上述结果表明,耐药表型及耐药基因的符合呈现相关性。     

上海市鸭源沙门菌的分离鉴定、血清分型及耐药性分析

为了解上海市农贸市场和超市中鸭源沙门菌的污染情况、血清型分布及耐药情况,于2014年从上海市各大农贸市场和超市随机采集鸭肉、鸭粪便样品186份,通过常规分离鉴定和PCR鉴定,获得了44株鸭源沙门菌。对分离株采用Kauffman-White法进行血清学分型和K-B纸片法进行16种抗生素的药敏试验。结果显示,鸭源沙门菌分离率为23.65%,共鉴定出13种血清型,优势血清型为鼠伤寒(43.18%)。耐药性结果显示,分离株对萘啶酸(63.64%)的耐药率最高,对磺胺异恶唑(47.73%)、链霉素(47.73%)、四环素(40.91%)的耐药率次之,对头孢吡肟(4.54%)、头孢噻肟(4.54%)、环丙沙星(2.27%)、庆大霉素(2.27%)等耐药率低,对氧氟沙星(0.00%)和亚胺培南(0.00%)两种药物敏感。其中,多重耐药率为43.18%,最多可耐受11种抗菌药物。表明上海市鸭源沙门菌的污染率较高,血清型分布广且耐药模式多样,多重耐药菌株较严重。提示鸭源沙门菌的流行和耐药情况值得我们密切关注,同时为进一步做好食品中沙门菌的防控提供数据支持。     

食品动物源沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

为了解食品动物源沙门菌血清型分布及耐药状况.采用生化鉴定、血清学及沙门菌invA基因PCR方法对分离自不同食品动物源菌株进行沙门菌鉴定;采用微量肉汤稀释法进行菌株对20种药物的敏感性试验.结果显示,本次研究共鉴定出316株沙门菌,14个血清型,以鸡白痢、菲利斯河沙门菌和吉韦沙门菌为主;316株菌株对20种药物呈不同水平的耐药性,对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、链霉素、四环素、多西环素、奈啶酸、磺胺异噁唑等药物耐药率超过40％;95.5％的菌株呈多重耐药性;猪源、牛源菌株耐药性较禽源严重.以上情况说明,本次分离的食品动物源沙门菌血清型分布广,菌株耐药性较为严重.临床上应把生长周期长的动物体内细菌作为耐药性检测重点,在食品动物生产上应谨慎使用抗菌药物.     

重庆地区鸡源大肠杆菌、沙门氏杆菌耐药性的测定与分析

为了掌握重庆地区养鸡场大肠杆菌、沙门氏杆菌的耐药情况,试验选取10种抗生素对分离到的110株大肠杆菌、14种抗生素对分离到的8株沙门氏杆菌进行药敏试验,测定大肠杆菌的耐药基因,比较分析大肠杆菌耐药表型与耐药基因的关系。结果表明:多黏菌素对所有大肠杆菌均敏感,4株大肠杆菌对环丙沙星、庆大霉素、头孢噻肟耐药,20株大肠杆菌对恩诺沙星耐药,24株大肠杆菌对卡那霉素耐药,28株大肠杆菌对链霉素耐药,40株大肠杆菌对阿莫西林、氟苯尼考耐药,72株大肠杆菌对磺胺甲口恶唑耐药;在110株大肠杆菌中80. 00%为多重耐药株,其中对2种抗菌药物耐药占32. 73%,对7种药物耐药占7. 27%,多重耐药性主要集中在二到四重,占63. 64%。沙门氏杆菌对环丙沙星、氨曲南、头孢噻肟敏感;而对氯霉素、磺胺异口恶唑、氨苄西林、四环素、复方新诺明、头孢唑啉、多西环素均耐药; 8株沙门氏杆菌中100%为多重耐药株,其中对2种抗菌药物耐药占12. 50%,对8种药物耐药占12. 50%,多重耐药性主要集中在四到八重,占87. 50%。大肠杆菌药敏试验和耐药基因的检测结果表明,磺胺类耐药基因与耐药表型符合率较高,为75. 00%(72/96)。β-内酰胺类中头孢噻肟耐药基因与耐药表型符合率较低,为6. 78%(4/59);阿莫西林耐药表型与耐药基因符合率为67. 80%(40/59)。大部分检测的基因在受试菌株中具有较高的流行性,表明这些基因在编码受试菌株耐药性中发挥非常重要的作用。说明分离的大肠杆菌沙、门氏杆菌耐药性十分严重。     

西藏部分地区藏猪源沙门菌分离鉴定及耐药表型

利用细菌的分离鉴定、K-B法和PCR检测方法,对西藏自治区林芝市朗县、昌都市2个地区所分离的33株藏猪源沙门菌的药物敏感性及耐药基因进行了研究。结果显示,共分离得到33株藏猪源沙门菌,其中肠炎沙门菌是优势血清型;33株藏猪源沙门菌分离菌株对氨基糖苷类、酰胺醇类和磺胺类药物均表现出不同程度的耐药,对链霉素耐药率33.33%,对庆大霉素耐药率33.33%,对丁胺卡那耐药率0.00%,对氯霉素耐药率为96.96%,对氟苯尼考耐药率96.96%,对复方新诺明的耐药率为75.75%,同时存在多重耐药现象,耐药基因检测结果与药敏试验结果一致。结果表明,藏猪源沙门菌确实存在,并且分离株表现出不同程度的耐药现象;沙门菌在西藏林芝、昌都均有分布,应引起重视。西藏地区要根据各地实际情况需要加强监测沙门菌引起的腹泻,建立流行毒株预警机制并合理用药。     

禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因调查分析

为了更好地了解禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因分布,从不同来源的家禽样品中分离沙门菌,调查其对四环素的耐药性以及耐药菌株中8种四环素耐药基因[tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(W)、tet(M)、tet(D)、tet(K)和tet(L)]的携带情况.结果表明,18.8%的沙门菌分离株对四环素耐药,健康成鸡分离株对四环素的耐药性明显高于雏鸡、死胚或病禽分离株;四环素耐药株中tet(A)、tet(B)和tet(M)基因的携带比例分别为73.1%、11.5%和3.8%,说明沙门菌对四环素的耐药机制以tet(A)和tet(B)基因介导的主动外排为主.本研究首次在对四环素耐药的沙门菌中检测到tet(M)基因,说明tet(M)基因在沙门菌对四环素的耐药性方面也具有潜在的作用.     

山东地区零售鸡肉中沙门菌耐药基因东地区零售鸡肉中沙门菌耐药基因、毒力基因及PFGE分型研究

为了解山东地区零售鸡肉中沙门菌耐药和毒力基因的携带状况以及PFGE分子分型情况,采用PCR方法对分离的25株沙门菌携带的耐药基因和毒力基因进行检测,并运用XbaⅠ酶进行酶切并完成PFGE分析,利用BioNumerics软件对分离菌株的指纹图谱进行聚类分析。结果显示,分离菌株携带耐药基因的携带情况与耐药表型的符合率为95%,其中88%的分离菌株携带酰胺醇类耐药基因(catⅠ)和β-内酰胺类耐药基因(blatem-1/blapsE-1/blaCMY-1/blaoxA-1);所有分离菌株均携带fimAstn、IacP、prgK四种毒力基因,其次是spvr、spva、spvc,携带率均为64%;25株沙门菌共分为10个群,包括16个不同的带型,菌株相似度为60%~100%。     

腹泻仔猪肠道沙门氏菌耐药性研究

为了解贵州省规模化养殖场腹泻仔猪肠道沙门菌耐药表型与耐药基因型相关性,本试验采集了贵州省7个规模化养猪场的腹泻仔猪肠道样本进行沙门菌分离鉴定,并对分离的沙门菌用药敏纸片法进行耐药表型分析,利用PCR方法对分离菌进行耐药基因扩增。结果显示:共分离鉴定沙门菌21株;药敏试验表明所鉴定的沙门菌对抗菌药物的耐药率从高到低依次是卡那霉素、磺胺异口恶唑和诺氟沙星等,且均为多重耐药株,耐药种类达8种以上;耐药基因与耐药表型分析结果显示分离的沙门菌β-内酰胺类耐药基因与耐药表型符合率高达100%,喹诺酮耐药基因与耐药表型符合率为62.5%,氨基糖苷耐药基因符合率为73.3%,磺胺类耐药基因符合率81.8%。研究结果对合理使用药物控制仔猪沙门菌感染提供了理论依据。     

广东省部分地区禽源和猪源沙门菌血清型与耐药性及Ⅰ类整合子分析

为了解广东省禽场和猪场沙门菌的血清型和耐药性情况,本研究2015年从广东省多个养殖场共采集样品126份,分离出沙门菌24株,分离率为19.04%。采用Kauffmann-White法、Kirby-Bauer法和PCR方法对分离株进行了血清型鉴定、药敏试验和Ⅰ类整合子检测。血清型鉴定结果显示,24株沙门菌共鉴定出4种血清型,分别是鼠伤寒沙门菌(14株)、印第安纳沙门菌(8株)、科瓦利斯沙门菌(1株)和阿尔巴尼沙门菌(1株)。药敏试验结果显示,分离株对四环素(83.33%)、氨苄西林(70.83%)、磺胺异恶唑(70.83%)、萘啶酸(66.67%)、复方新诺明(58.33%)、卡那霉素(54.17%)、阿米卡星(54.17%)、庆大霉素(50.00%)的耐药率较高,有54.17%(13/24)的菌株对8种及8种以上抗菌药物耐药。Ⅰ类整合子检测结果显示,Ⅰ类整合酶阳性率为29.17%(7/24),整合酶阳性菌株中仅有1株扩增到携带耐药基因aadA2的基因盒。上述结果表明,广东省禽场和猪场沙门菌分离率较高,耐药情况严重,菌株的耐药性与其血清型和Ⅰ类整合子的携带有一定的相关性。     

致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌分子分群、耐药表型及耐药基因型检测与分析

为分析邢台和秦皇岛地区致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)分离株的分子分群情况及耐药表型和耐药基因型之间的相关性,本研究采用PCR法和96孔板微量肉汤稀释法分别对临床分离的42株致鸡卵黄性腹膜炎E.coli的系统进化分群、耐药基因和12种抗菌药物耐药表型进行检测。结果显示,42株分离菌株中属于A、B1、B2、D群的分别有7株、9株、14株、12株,以B2+D群流行为主;42株分离菌株对12种抗菌药物耐药性严重且呈现多重耐药性,其中对阿莫西林-克拉维酸、磺胺间甲氧嘧啶、多西环素等9种药物耐药率在45.24%以上,对其它药物耐药率在19.04%～38.10%,耐12种、9种抗菌药物分离菌株最多,分别占分离菌株的19.05%、16.67%;42株分离菌株中耐药基因tetA、Sul1、TEM、Sul2、mcr-1、floR、SHV、tetR检出率在59.52%以上,其它耐药基因检出率为14.29%～38.10%;ESBLs类、四环素类、喹诺酮类、头孢菌素类、磺胺类、多肽类和酰胺醇类7类抗菌药物的耐药表型和耐药基因型符合率在52.6%以上,其中酰胺醇类、多肽类的耐药表型与耐药基因型符合率为100%。本实验为致蛋鸡卵黄性腹膜炎E.coli防控及临床用药提供参考。