农杆菌介导籼稻中籼3037转化体系的优化及其应用

以籼稻品种中籼3037为材料,研究了影响农杆菌介导转化籼稻的几个重要因素,结果表明：MSⅡ培养基作为愈伤组织的诱导培养基好于N6D2;以幼胚为外植体,愈伤组织的诱导率和转化率明显比成熟胚和幼穗高;根癌农杆菌菌株EHA105介导的基因转化率高于AGLO;当以幼胚为外植体,根癌农杆菌菌株E-HA105介导的中籼3037的转化率为18.0%,而AGLO为5.5%;EHA105菌液OD值为0.6,浸染时间14min为中籼3037合适的转化参数;在分化培养基MSR中添加20g/L的山梨醇有利于抗性愈伤组织的分化。在此基础上,采用优化的农杆菌介导法转化中籼3037及其来源的突变体A和B,获得了转化植株,PCR、Southern杂交和T1代遗传分析表明外源基因已经整合到水稻基因组中。     

根癌农杆菌介导获得粳稻转基因植株研究

以水稻粳稻品种空育131、垦鉴稻6号、垦鉴稻7号为材料,用根癌农杆菌感染成熟胚诱导的愈伤组织,将反义蜡质基因导入受体材料。经两次抗性筛选后,转入分化培养基中分化培养后获得转基因小苗。将转化植株进行GUS染色、PCR鉴定,能证明外源目的基因已经整合到植株中。     

根癌农杆菌介导获得粳稻转基因植株

以水稻粳稻品种空育131、垦鉴稻6号、垦鉴稻7号为材料，用根癌农杆菌感染成熟胚诱导的愈伤组织，将反义蜡质基因导入受体材料。经两次抗性筛选后，转入分化培养基中分化培养后获得转基因小苗。将转化植株进行GUS染色、PCR鉴定，能证明外源目的基因已经整合到植株中。     

农杆菌介导玉米遗传转化体系的优化

以自交系18H、M017、9046和178的幼胚为材料,进行愈伤组织诱导,用根癌农杆菌EHA105和LBA4404对获得的Ⅱ型胚性愈伤组织进行转化,导入TERFI-LeERF2基因,并对农杆菌介导玉米遗传转化体系的条件进行了优化。结果表明：使用毒性较强的根癌农杆菌EHA105侵染愈伤组织;农杆菌浓度在0D600=0．6,侵染时间20min;侵染后的愈伤组织经7d的恢复培养后,先进行低浓度选择压的筛选培养,再进行高浓度选择压的筛选培养,以及在筛选培养基中添加10mg／LAgNO,提高了抗性愈伤组织的获得率。获得植株经PCR鉴定表明,外源基因已经整合到玉米自交系18H的基因组中。     

以甘露糖作为筛选剂的棉花遗传转化

以pmi基因作为筛选标记基因,以甘露糖作为筛选剂,通过农杆菌介导法将GFP基因导入棉花细胞并得到再生植株,经过PCR检测、Southern杂交证实外源基因已经整合到棉花基因组中,Westbloting与荧光显微镜检测证明GFP基因得到表达。本文研究讨论了甘露糖作为棉花转化细胞的筛选剂在农杆菌介导的转化中的应用浓度及方法,即:甘露糖的筛选浓度在30～50g·L 1之间,在愈伤组织诱导初期适当低一点,随着愈伤组织的生长而加大筛选浓度。由于甘露糖不利于再生胚的分化,当愈伤组织转入分化培养基时,要以葡萄糖代替甘露糖。     

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

摘要:以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L＋MES 400 mg/L＋CH 100 mg/L[7]＋40g/L麦芽糖＋8g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织, 每两周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基（MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+ MES 400 mg/L＋CH 100 mg/L+麦芽糖40g/L+gelrite 2.6g/L,PH5.8）上培养2－3周,然后转接到再生培养基(1/10MS+NAA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+蔗糖30g/L+ gelrite 2.6g/L,PH5.8)中进行再生成苗。接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织, Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株。在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性。X－gluc染色表明, 少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达。     

棉花外源基因导入及转基因再生植株条件的研究

用５～６ｄ的棉花无菌苗下胚轴切段与农杆菌共培,菌株质粒中Ｇｕｓ基因为标记基因,ＮＰＴⅡ基因为选择基因。在含０．１ｍｇ·Ｌ－１２,４－Ｄ和０．１ｍｇ·Ｌ－１ＫＴ的ＭＳ培养基上共培４８ｈ,转移到添加头孢霉素５００ｍｇ·Ｌ－１,卡那霉素５０ｍｇ·Ｌ－１的ＭＳ培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织,７０～８０ｄ时,进行ＧＵＳ检测,选择ＧＵＳ阳性愈伤组织,经体细胞分化生成转基因再生植株。     

农杆菌介导转Bt基因海岛棉的获得及抗棉铃虫效果分析

本研究采用农杆菌介导法,对海岛棉胚性愈伤组织进行遗传转化。经抗性培养基筛选得到抗性胚性愈伤组织,进而嫁接得到抗性植株。通过对抗性植株进行PCR以及Southern blot检测,确定了Bt基因已经整合至抗性植株的基因组中。通过对这些转基因植株进行室内抗虫性鉴定,调查棉铃虫幼虫的死亡情况、幼虫对转基因植株叶片的取食情况以及幼虫的生长状况为指标来综合评价其抗性程度,结果表明,6棵转基因植株对棉铃虫均具有一定的抗性,5号及6号植株抗性级别达到了抗。     

利用大白菜小孢子胚状体获得抗除草剂转基因植株

大白菜小孢子培养获得的子叶期胚状体,经粉碎的玻璃碴摩擦后,与农杆菌共培养,在加筛选剂Ｂａｓｔａ（和ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎ ５ｍｇ／Ｌ）的培养基上,再生出数株绿苗。自交留种后,对其后代苗期进行的Ｂａｓｔａ抗性鉴定显示,有４株抗此除草剂。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,抗性植株的基因组中各有一个ｂａｒ基因插入位点。对转化株的小孢子进行再培养,后代小孢子植株对Ｂａｓｔａ抗性的分离比显示,此转基因     

TDZ在棉花组织培养中的效应研究Ⅰ．TDZ单独使用对棉花组织培养的影响

ＴＤＺ是一种高效低毒棉花脱叶剂，它在棉花组织培养中表现出独特的生理作用。ＴＤＺ的添加促进了外植体的伸长和保绿，有利于外植体脱分化和胚性愈伤组织的诱导。但是ＴＤＺ不利于愈伤组织的保持和体细胞胚的发育，必须把在含ＴＤＺ培养基上诱导产生的愈伤组织转移到不含任何激素的培养基上，才能发育成成熟胚并再生出植株。ＴＤＺ的使用能诱导根的分化。不同外植体、不同基因型以及不同ＴＤＺ浓度之间在棉花组织培养中的表现均有差异。