蓟县山区土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选

[目的]筛选能产生新的抗菌物质的放线菌菌株。[方法]采用稀释法从蓟县山区采集的土样中分离放线菌菌株,并通过抑制菌丝生长速率法、管蹀法和盆栽试验测定其抗菌活性。[结果]在分离到的159株放线菌菌株中,有9株放线菌的发酵液在离体条件下对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用;有26株菌株发酵液对至少1种供试病原真菌的菌丝生长抑制率在70%以上。其中,TJ93菌株发酵液对6种供试真菌均有较强的抑制作用,对黄瓜霜霉病和小麦白粉病有一定的保护和治疗作用。[结论]TJ93菌株抗菌谱较广,对植物病害的防治具有较大的研究开发潜力。     

大叶黄杨内生真菌的分离及抑菌活性研究

[目的]从大叶黄杨中找到具有抗菌活性的内生真菌。[方法]采用PDA双抗培养基从大叶黄杨茎和叶中分离内生真菌,对其分别进行液体培养,将发酵后所得的发酵液用乙酸乙酯萃取处理,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌为试验菌株,用纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌试验。[结果]从大叶黄杨茎和叶中分离得到28株内生真菌,其中有21株内生真菌的发酵液粗提物对指示菌株有一定的抑制作用,占总分离菌株的75%。[结论]大叶黄杨内生真菌的次生代谢产物中存在着丰富的天然活性抑菌物质,可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

一株海洋放线菌抗菌活性物质的分离与结构解析

为发掘天然抗菌物质新资源,从海洋放线菌库中筛选到一株对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有显著抗菌活性的放线菌菌株唐德链霉菌(Streptomyces tendae)。通过优化培养条件,发现该菌株在2216E液体培养基中28℃摇瓶培养96 h,其发酵液抑菌活性最强;进一步通过抗菌活性示踪和多级色谱方法对该菌株所产抗菌活性物质进行了分离纯化,并采用NMR和高分辨质谱等方法对其进行结构解析,研究发现该菌株所产的两个抗菌活性化合物分别为2-Hydroxy-3-propyl-hexahydro-pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione和3-Propyl-hexahydro-pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione,均为环二肽衍生物。     

乳酸菌对中草药的发酵及抑菌活性检测

选择13株性能良好的乳酸菌对5味抗菌、抗病毒中草药(板蓝根、甘草、陈皮、苦丁、苦藠)进行发酵,检测发酵产物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抗菌活性。结果显示,乳酸菌在5味中草药中均能生长,每种中草药均有最适发酵菌株;抑菌试验表明,不同的乳酸菌菌株发酵5味中草药表现出不同的抑菌能力,罗伊氏乳杆菌发酵板蓝根、陈皮、苦丁、苦藠的上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌都具有显著的抑菌效果,甘草被发酵后基本无抑菌活性。     

产广谱抑菌活性物质乳酸菌的分离筛选

[目的]研究筛选可产广谱抑菌性活性物质的乳酸菌,为食品保存方法的研究提供参考。[方法]以自制泡菜为材料,用含有溴甲酚紫的BCP培养基进行初筛,用添加CaCO3的MRS培养基制备上清液,复筛得到对4种指示菌有抑制作用的菌株,再经过排除酸和过氧化氢的抑制作用,且经过热稳定性试验和活性持效期试验筛选抑菌菌株。[结果]通过初筛和复筛,得到对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和酵母菌有抑制作用的菌有5株。其中菌株LP-6排除酸和过氧化氢的抑菌活性后仍具有明显的抑菌活性,且经过热稳定性试验,活性持效期试验,发现LP-6菌株的发酵上清液仍具有明显的抑菌活性。[结论]初步判断菌株LP-6产细菌素类抑菌物质,可应用于食品工业中。     

无花果内生真菌的抑菌活性筛选

以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）为测试菌种,对无花果根、茎、叶中分离出的87株内生真菌进行活菌筛选,结果表明：无花果87株内生真菌中有36株对1种或多种指示菌有拮抗作用,其中对金黄色葡萄球菌有抑菌作用的有18株,对枯草芽孢杆菌有抑菌作用的有11株,对大肠杆菌有抑菌作用的有7株;活性菌株抗菌活性多以中等活性为主,高活性和低活性的菌株较少。从36株有活性的菌株中选出具有代表性的20株内生真菌的代谢产物进行抗菌活性筛选,结果表明20株菌株的代谢产物至少对1种供试菌株具有抑菌活性。     

南海冷泉区深海沉积物来源放线菌的分离培养及其抑菌活性

为挖掘南海冷泉区可培养放线菌资源及其潜在的生物活性,采用稀释涂布法分离培养了来源于南海冷泉区深海沉积物中的放线菌,利用16S rRNA基因测序鉴定菌株,构建系统发育树,并分析了放线菌的多样性;通过K-B法药敏试验对放线菌发酵粗提物进行抑菌活性测试。结果显示：分离获得的50株放线菌隶属于5个科,7个属,其中5株放线菌被初步判定为潜在新种。7株放线菌的发酵粗提物对副溶血性弧菌、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌呈现不同程度的抑菌活性,其中活性最好的为小单孢菌属(Micromonospora)的2株菌,Micromonosporasp.LDBS3988抑菌活性最强,Micromonosporasp.LDBS3949抑菌活性较为广谱。     

草坪病害真菌拮抗放线菌的筛选及活性研究

[目的]筛选拮抗活性菌株和寻找新的活性代谢产物。[方法]以引起草坪真菌病害的3种病原真菌镰刀菌(Fusarium sp.)、丝核菌(Rhizoctonia sp.)、腐霉菌(Pythium sp.)为目标菌,通过琼脂块法初筛、管碟法复筛对采自云南香格里拉的茶园土壤进行了放线菌的分离筛选,并对其中活性较好的菌株进行了抗菌活性验证及活性物质的粗分离与检测。[结果]共分离得到85株放线菌,最终获得S-6、S-23、S-31 3株对病原真菌有较强作用的菌株,其中最高抑菌达61.90%。将3株拮抗放线菌液体发酵,并通过管碟法进一步验证抗菌活性;将发酵液乙酸乙酯萃取浓缩后,在萃取相中检测到活性成分。[结论]该研究结果为草坪病害防治提供了新资源。     

一株淮山炭疽病拮抗放线菌的分离及初步鉴定

[目的]从海南药用植物根际分离得到对淮山炭疽病具有拮抗活性的放线菌菌株,并对其分类地位进行鉴定。[方法]采用HV培养基从盾叶鸡蛋花根际土壤分离放线菌菌株;通过平板对峙培养和发酵代谢产物抑菌试验筛选活性放线菌;根据形态特征,结合16SrRNA基因序列分析鉴定活性放线菌的分类地位。[结果]从盾叶鸡蛋花的根际土壤分离到12株放线菌,筛选到1株对淮山炭疽病菌具有良好拮抗活性的菌株51173,菌株51173鉴定为链霉菌属Streptomyces violaceusniger16S rRNA gene clade中的成员。[结论]放线菌菌株51173在淮山炭疽病菌的生物防治中将具有很好的开发应用前景。     

鸡屎藤与鱼鳅串和抗生素联合抑菌试验研究

[目的]考察鸡屎藤、鱼鳅串水提物的体外抗菌活性及其与常用抗生素的联合抑菌效果。[方法]以金黄色葡萄球菌CMCC29178和大肠埃希氏菌ATCC25922标准菌株为检测菌,采用微量肉汤稀释法测定其最小抑制浓度(MIC)和联合抑菌指数(FIC)。[结果]鸡屎藤、鱼鳅串水提物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌都具有一定的抑菌效果,与常用抗菌药物合用表现出不同程度的协同或相加效应。[结论]水提法可广泛用于对具有抗菌活性的植物药材的初步筛选。     

抗多重耐药金黄色葡萄球菌土壤放线菌筛选

[目的]从土壤中发现拮抗多重耐药金黄色葡萄球菌的放线菌。[方法]将土壤稀释后在高氏一号培养基上划线分离放线菌,并测试抗菌活性。[结果]获得放线菌一株B0602具有很强的抗菌活性。[结论]放线菌B0602可能开发出高活性的抗生素制品。     

广西北仑河口红树林底泥放线菌多样性及其抑制甘蔗鞭黑粉菌活性分析

[目的]分析广西北仑河口红树林底泥放线菌多样性及其次级代谢产物抑制甘蔗鞭黑粉菌活性,为挖掘放线菌新物种及其新型农用杀菌剂打下基础.[方法]选取6种分离培养基,采用稀释涂布法对广西北仑河口红树林底泥样品进行分离培养,ISP2培养基纯化菌株,基于16S rRNA序列分析样品中放线菌多样性,并以牛津杯法对分离得到的菌株进行抑制甘蔗鞭黑粉菌活性测定.[结果]经排重合并和16S rRNA序列比对分析,从广西北仑河口红树林底泥中共分离得到36株放线菌,隶属于6目9科12属,链霉菌属(Streptomyces)为优势菌属,共有5株菌株的16S rRNA序列与标准菌株的相似性低于98.00%,可能为潜在新物种.抑菌活性测定结果表明,36株放线菌中有22株菌对甘蔗鞭黑粉菌有抑制作用,占所分离放线菌总数的61.11%.[结论]广西北仑河口红树林底泥中蕴藏着丰富的海洋放线菌资源,具有开发成新型农用生防杀菌剂的潜力.     

金钮扣提取物体外抑菌活性的初步研究

[目的]研究金钮扣提取物的体外抑菌活性。[方法]采用药敏纸片扩散法及2倍稀释法测定金钮扣提取物对金黄色葡萄球菌等10种细菌的抑菌效果。[结果]①对金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、微球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌、白色葡萄球菌6种供试菌有抑制作用。②及③对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、微球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌6种供试菌有较强的抑制作用。②及④对白色葡萄球菌有较弱的抑菌作用。[结论]金钮扣不同提取物对供试菌抑菌效果不同;②的抑菌效果优于①;而③及④是主要活性成分,具有抑菌作用。     

鱼腥草内生放线菌的分离及杀菌活性研究

[目的]探索鱼腥草内生放线菌的杀菌生物活性。[方法]以新鲜鱼腥草为材料,从其根、茎和叶部共分离得到7株内生放线菌。采用抑制菌丝生长速率法和抑制孢子萌发法对7株内生菌发酵产物进行杀菌活性筛选。[结果]这7株内生放线菌均具有一定抑制活性。其中,编号为K3和K15的2株内生菌发酵液对玉米纹枯病菌、玉米小斑病菌、黄瓜枯萎病菌和禾谷镰刀菌等4种植物病原真菌均有较强抑菌活性,其抑制率均在70%以上,对玉米小班病菌孢子萌发的抑制率在90%以上。进一步研究K15和K3菌株的抑菌活性可知,K15和K3菌株发酵液对玉米小斑病菌的孢子萌发的EC50值分别为3.71和14.97 mg/ml;盆栽和田间试验结果均表明K15和K3菌株发酵液对小麦白粉病有较好的防治效果,对小麦白粉病的盆栽保护和治疗效果均高于70%,田间防治效果分别为77.46%和66.55%。[结论]K15和K3菌株发酵产物具有广谱的杀菌活性,特别对小麦白粉病菌有很好的田间防治效果。     

冬凌草根际土壤微生物抗肿瘤活性菌株筛选

[目的]为开发利用冬凌草根际土壤微生物资源。[方法]使用K562细胞的SRB法筛选模型,对从贵州省施秉县采集的冬凌草根际土壤样品中分离的207株微生物(放线菌112株、真菌95株)进行了抗肿瘤活性筛选。[结果]得到活性菌株共27株,阳性率为13.0%,其中真菌13株,放线菌14株。[结论]冬凌草根际土壤微生物是寻找抗肿瘤活性代谢产物的良好资源。     

生化黄腐酸抑菌作用的研究

[目的]探索生化黄腐酸(BFA)对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌效果的最适试验条件。[方法]采用4个因素4个水平的正交试验方案。4个因素为BFA浓度、培养基pH、培养温度和菌种的生长时期。以抑菌圈直径为指标,研究BFA的抑菌作用。[结果]BFA具有抑菌作用,对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要好于大肠杆菌。试验条件的最优组合为:BFA浓度80 mg/ml,培养基pH 7.6,温度18℃,2种菌均处于对数生长期。[结论]当试验条件为最优组合时,BFA对2种菌的抑菌效果最佳。     

姜黄素的体外抑菌活性研究

[目的]考察姜黄素的体外抑菌活性。[方法]以最小抑菌浓度、抑菌圈为指标对姜黄素的体外抑菌效果进行考察。[结果]姜黄素在体外条件下对枯草杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别是0.100 0、0.200 0、0.100 0 g/ml,对大肠杆菌、青霉、木霉和黑曲霉均无最小抑菌浓度;以最小抑菌浓度作抑菌圈试验,其对上述各菌的抑菌圈直径分别为12.0、10.0、12.0、6.0、6.0、6.0、6.0mm。[结论]姜黄素在体外对枯草杆菌、沙门氏菌和金黄葡萄球菌敏感,而对大肠杆菌、青霉、木霉及黑曲霉均不敏感。