不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽提取物对26种病原菌抑菌活性分析(英文)

[目的]探索经不同菌源诱导黄粉虫所产生的免疫物质——抗菌肽对病原菌是否存在活性差异。[方法]对饥饿后黄粉虫幼虫通过饲细菌、针刺饲真菌(放线菌)法产生诱导免疫反应,研磨、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对26种病原菌抑菌活性,利用三等分法划分四种类型评价抑菌活性及抑菌谱。[结果]经不同菌源诱导黄粉虫所产生的抗菌肽抑菌活性及抑菌谱上均存在明显差异。[结论]生防菌源在诱导昆虫体液免疫物质——抗菌肽表达上具有明显优势。     

黄粉虫幼虫抗菌肽的诱导特性及电泳组分研究初报

对黄粉虫幼虫分别进行空白对照、菌刺、菌饲、热激和超声波四种处理,并于处理后1d、2d、3d、4d、5d分别提取黄粉虫幼虫体内的抗菌肽,做抗大肠杆菌（革兰氏阴性菌）和抗金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌）试验及交叉抑菌试验,测定其抑菌圈大小,确定其抗菌活性和诱导特异性,同时还进行抗菌肽热稳定性及电泳试验。结果表明：水浴后提取的抗菌液抑菌效果明显,四种处理的黄粉虫幼虫均能产生抗大肠杆菌／金黄色葡萄球菌物质。其中抗金黄色葡萄球菌效果要略好于抗大肠杆菌效果,其抗菌效果显著性依次为：菌饲、对照、热激和超声波、菌刺,而抗大肠杆菌效果显著性则依次为：菌饲、菌刺、热激和超声波、对照。交叉抑菌试验表明黄粉虫幼虫体内抗菌肽的产生不具有诱导特异性。电泳图谱显示黄粉虫抗菌肽含有5种肽组分。     

不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽提取物对26种病原菌抑菌活性分析

[目的]探索经不同菌源诱导黄粉虫所产生的免疫物质——抗菌肽对病原菌是否存在活性差异。[方法]对饥饿后黄粉虫幼虫通过饲细菌、针刺饲真菌（放线菌）法产生诱导免疫反应,研磨、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对26种病原菌抑菌活性,利用三等分法划分四种类型评价抑菌活性及抑菌谱。[结果]经不同菌源诱导黄粉虫所产生的抗菌肽抑菌活性及抑菌谱上均存在明显差异。[结论]生防菌源在诱导昆虫体液免疫物质——抗菌肽表达上具有明显优势。     

不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽提取物对26种病原菌的抑菌活性

[目的]探索经不同菌源诱导黄粉虫产生的免疫物质——抗菌肽对病原菌是否存在活性差异。[方法]通过饲细菌、针刺饲真菌法诱导饥饿处理过的黄粉虫幼虫产生免疫反应,研磨、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对26种病原菌抑菌活性,利用三等分法划分4种类型评价抑菌活性及抑菌谱。[结果]经不同菌源诱导黄粉虫所产生的抗菌肽抑菌活性及抑菌谱上均存在明显差异。[结论]生防菌源在诱导昆虫体液免疫物质——抗菌肽表达上具有明显优势。     

黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌抑菌效果的研究

[目的]探究黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌抑菌效果.[方法]用浓度为1×108 CFU/mL的粪肠球菌菌液与麸皮混合饲喂诱导黄粉虫幼虫,在24h后提取黄粉虫抗菌肽,用考马斯亮蓝法(Bradford法)测定黄粉虫抗菌肽粗提液浓度,采用试管稀释法测定青霉素、庆大霉素对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC),用多步诱导法筛选出青霉素和庆大霉素耐药的粪肠球菌,用Kirby Bauer法测定黄粉虫抗菌肽对耐青霉素和庆大霉素的粪肠球菌的抑菌活性.[结果]经粪肠球菌诱导24h后提取的黄粉虫抗菌肽浓度,显著高于未用粪肠球菌诱导的对照组(P＜0.05),其抑菌活性也显著高于对照组(P＜0.05),并且诱导黄粉虫抗菌肽组对耐青霉素、庆大霉素粪肠球菌的抑菌效果显著高于抗生素组(P＜0.05).[结论]黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌具有显著的抑菌效果.     

黄粉虫不同生长阶段诱导抗菌肽的效果分析

分析黄粉虫不同生长阶段所提取的抗菌肽抗菌活性及抗菌肽组分差异.通过针刺使黄粉虫各虫态感染大肠杆菌产生抗菌肽,经过研磨、离心等步骤提取抗菌肽,用药敏试验检测这些抗菌肽的抗菌效果,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳试验分离其蛋白及多肽条带.药敏试验的结果表明处于蛹期和成虫期的黄粉虫所产生抗菌肽的抑茵效果不如处于幼虫期所产生抗菌肽的抑茵效果明显,但差异不显著;电泳图谱显示黄粉虫幼虫有8条带,成虫有5条,蛹有5条,说明黄粉虫蛹期和成虫的抗菌肽种类较幼虫期的少,但是它们都还有更多的小肽段未被分离开.     

诱导源及其诱导剂量对黄粉虫幼虫血淋巴抗菌活性的影响

采用紫外线、超声波、菌液饲喂、菌液注射等方法对黄粉虫(Tenebrio molitor)进行抗菌肽的诱导,每种诱导方法分别采用不同诱导剂量,以确定最佳的诱导方法和最适的诱导剂量。结果表明:不同诱导方法的黄粉虫幼虫血淋巴抑菌活性大小为菌液注射紫外线菌液饲喂超声波。菌液注射法适宜的注射剂量为104cfu/头,诱导后培养48 h抑菌效果最好。采用琼脂糖孔穴扩散法进行测定,其对猪致病性大肠杆菌等6种动物病原细菌均有不同程度的抑制作用,特别是对猪致病性大肠杆菌和猪链球菌具有较强的抑菌活性。     

黑色型黄粉虫不同发育时期酯酶和过氧化物酶同工酶的比较研究

［目的］对黑色型黄粉虫各虫态及龄期的酯酶和过氧化物酶同工酶进行研究,为其物种鉴定和大规模饲养提供理论依据。［方法］采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析不同发育时期的黑色型黄粉虫的酯酶和过氧化物酶同工酶谱。［结果］黑色型黄粉虫各虫态酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶间存在着较大的差异性,并且不同龄期的幼虫之间和不同性别成虫之间也存在差异。［结论］不同发育时期黑色型黄粉虫的酯酶和过氧化物酶同工酶存在差异,表现出不同的生理特征。     

链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性研究

[目的]为枯草杆菌诱导后的家蝇幼虫提取物在饲料中的应用提供依据。[方法]采用抑菌圈测量法测定链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性,分析其对温度、酸碱和离子强度稳定性的影响。[结果]链球菌诱导的家蝇幼虫提取物对细菌的抑菌圈直径为6.55~11.01 mm。诱导组中家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其对革兰氏阳性菌的抑制作用较强。而未诱导组提取物对细菌的抑菌圈直径为6.01~8.01 mm,诱导组的抗菌活性高于未诱导组。抗菌肽样品具有较好的温度稳定性。当pH值为4~10时,抗菌肽样品的抗菌活性均较高,以pH值为8时最高。抗菌肽样品的抗菌活性随离子强度的升高而下降。[结论]抗菌肽的抑菌活性受环境离子强度的影响,与其作用机理有关。     

黄粉虫体内脂类抗菌活性物质及化学成分分析

为探索提取黄粉虫体内脂类抗菌活性物质的新途径,用5种不同有机溶剂对黄粉虫幼虫和成虫体内的抗菌物质进行提取,利用硅胶柱层析法和薄层层析法对粗提物进行分离,利用圆形纸片扩散抑菌法检测幼虫和成虫粗提物及各步纯化物对11种细菌的抗菌活性.结果表明:两类虫体的粗提物及各步纯化物对11种细菌均有显著抑菌效果,其中,以乙醇洗脱组分的抑菌效果最强,对两类虫体的乙醇洗脱组分进行薄层层析,各筛选出一条抗细菌活性最强的条带,用气相色谱-质谱法(GC-MS)确定各条带的主要化学成分,并分析其抗菌机理,为黄粉虫体内脂类抗菌活性物质的研究开发提供了理论依据,为寻找新型抗菌药物提供了重要来源.经过柱层析纯化后得到的乙醇洗脱组分的抗菌活性比粗提物明显提高.     

黄粉虫幼虫抗真菌物质的诱导及其抗真菌活性研究

[目的]研究用真菌诱导黄粉虫幼虫表达抗菌物质及其对真菌的影响。[方法]用黄粉虫幼虫从土壤中诱捕真菌,培养出2种病原真菌作为诱导源分别对黄粉虫幼虫做诱导试验,每种试验分别进行对照、菌刺和菌饲3种处理,并于处理后1、2、3、4和5 d分别提取抗菌物质,用平板琼脂打孔扩散法测定其抑菌圈直径而确定其抗真菌活性。[结果]结果表明,黄粉虫幼虫受真菌诱导后抗真菌活性比对照都有不同程度的增加,同时不同真菌诱导表达样品对于相应的诱导真菌均表现明显的抗真菌活性。说明不同真菌诱导产生的抗真菌物质与诱导源有关,抗真菌物质为黄粉虫幼虫体内固有成分,诱导增加了抗真菌物质的表达量,同时刺激新的抗真菌物质的产生。[结论]用真菌直接诱导黄粉虫幼虫可以产生抗真菌物质。     

不同复合饲料对黄粉虫幼虫生长发育的影响

[目的]研究不同复合饲料对黄粉虫幼虫生长发育的影响,以期为黄粉虫人工饲料配方的筛选提供依据。[方法]配制黄粉虫不同复合饲料,研究不同复合饲料对黄粉虫幼虫生长发育的影响,探索适合黄粉虫幼虫的饲料配方。[结果]黄粉虫人工复合饲料最适配方为95%玉米粉+5%螺旋藻粉配制的饲料配方E,黄粉虫幼虫的体重增长较为明显,其次是95%玉米粉+5%胆固醇配制的复合饲料(配方D)。[结论]该研究结果可为黄粉虫规模化养殖奠定基础。     

2种色型黄粉虫触角感器的扫描电镜观察

[目的]明确黄粉虫触角感器的种类、形态、分布以及功能,为黄粉虫规模化生产、规模杂交制种提供理论依据。[方法]利用扫描电镜对黄粉虫黄色、黑色2种类型成虫的触角形态和感器进行观察。[结果]通过电镜观察,在黄粉虫的触角上共发现了11类感器,分别为毛形感器、刺形感器、锥形感器、锥形乳头状感器、柱形感器、腔锥形感器、盾形感器、耳形感器、芽形感器、乳头状感器、棒形感器。其中黄粉虫黄色型、黑色型触角感器类型不同。雌、雄个体之间触角感器的类型、分布不同。不同感器在触角各节上的数量、长度与分布不同。[结论]黄粉虫黄色型和黑色型2种色型之间,雌和雄个体之间每种感受器的分布有明显差异。     

黄粉虫虫粉对白僵菌生长的影响

[目的]研究黄粉虫虫粉对白僵菌生长的影响。[方法]利用黄粉虫幼虫作为添加物,添加到PDA培养基中,制成4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 g/100 ml 7个浓度,以不加虫体的培养基为对照,对白僵菌菌株的生长速度、孢子萌发率、菌丝直径、产孢时间、产孢量和POD酶活性等指标进行测定。[结果]PDA培养基中添加黄粉虫幼虫能提高白僵菌的生长速度、孢子萌发率、产孢时间、产孢量和POD酶活性,但是对孢子大小及菌丝直径影响较小。通过综合评价筛选,黄粉虫添加量为4 g的培养基上白僵菌生长最优,各项指标都有明显的优势。[结论]该研究可为应用黄粉虫培养白僵菌的研究提供理论依据。     

黄粉甲抗冻蛋白基因afp72 cDNA的克隆和序列分析

[目的]为抗冻蛋白基因afp72的体外表达和生物学功能研究奠定基础。[方法]从黄粉甲脂肪体中提取总RNA,通过RT-PCR克隆抗冻蛋白基因afp72,并构建克隆重组质粒pUCm-T-afp72。经双酶切后,将其与表达载体pMAL-p2X连接并转化到大肠杆菌TBI,构建表达重组质粒pMAL-p2X-afp72。[结果]afp72 cDNA长度为216 bpa;fp72的测序序列与GenBank中编码84个氨基酸的黄粉甲afps序列的同源性为89.48%a;fp72基因可能来自其他黄粉甲抗冻蛋白基因的突变或缺失;从蛋白水平上证实AFP72是一个抗冻蛋白,afp72是一个抗冻蛋白基因;表达重组质粒pMAL-p2X-afp72的构建是成功的。[结论]该研究为利用基因工程方法构建抗冻蛋白转基因植物提供了材料。     

厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达的初步分析（摘要）

[目的]研究厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达。[方法]通过对前期所获得的厚壳贻贝多条mytilin和myticin抗菌肽基因进行筛选,选择其中5条厚壳贻贝抗菌肽基因,采用PCR技术和DNA重组技术构建了相关的真核表达载体,并采用LiAC转化法将其转化到S78酿酒酵母中并进行初步表达分析。[结果]5种厚壳贻贝抗菌肽基因的真核表达载体构建成功,对转化酵母其进行mRNA检测结果表明,5种厚壳贻贝抗菌肽的基因在S78酵母中成功转录。[结论]该研究结果为最终采取基因工程手段表达厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin并在此基础上开展厚壳贻贝抗菌肽的后续研究奠定基础。