玉米再生体系建立及其影响因素的研究

以玉米骨干自交系K12、137、87-1和综3的幼胚为外植体,研究基因型、胚龄、继代次数、诱导（分化）培养基中激素浓度对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导、保持和植株分化的影响。结果表明,基因型是玉米幼胚培养能力的主要影响因子。中等大小（1.0～2.0 mm）的幼胚都具有较高的愈伤组织诱导率。2,4-D浓度对玉米幼胚的胚性愈伤组织诱导率有很大的影响,而且不同基因型的最大诱导率所需的2,4-D浓度也不相同。为防止2,4-D浓度过高引起无性系的变异,本试验确定的诱导培养基的2,4-D浓度为2.0 mg/L。继代培养基中1 mg/L的2,4-D对胚性愈伤组织诱导和保持起关键作用。最佳分化培养基为N6盐＋B5有机＋2.0 mg/L甘氨酸＋1 g/L CH＋1.0 mg/L 6-BA＋30 g/L蔗糖。     

影响小麦愈伤组织发生因素的研究

研究不同基因型、外植体和培养基对小麦愈伤组织诱导和植株再生的影响,试验结果表明:以幼胚为外植体诱导愈伤组织优于成熟胚;含2mg/L2,4-D的MS培养基诱导愈伤组织优于含0.5mg/L2,4-D的MS培养基;潍麦9品种诱导愈伤组织比鲁麦21和烟农15的频率高。     

郑麦9023胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

为建立高效稳定的小麦遗传转化体系,以小麦郑麦9023的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中不同质量浓度2,4-D、KT对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响,进而完成整个植株再生的进程。结果表明:以小麦郑麦9023的幼胚作为外植体来诱导愈伤组织,诱导效果最好的培养基是含有3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,出愈率最高达92.5%;愈伤组织进行继代培养的最佳培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮系继代时间为16 d;悬浮系中的成熟胚在基本培养基上可以发育成正常的植株。所建立的悬浮系可以用来进行小麦基因工程遗传改良和体细胞无性系突变体的筛选。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以小麦的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.研究结果表明,在MS+2,4-D(3.0 mg/L)+VB1(1.0 mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为72.3%,但愈伤组织质量较差;在低浓度2,4-D和添加了ABA的继代培养基中,愈伤组织质量明显改善,胚性愈伤组织增加.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0 mg/L)+NAA(0.3 mg/L)中,分化率达73.18%.该研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体的小麦组织培养再生体系.     

4种玉米自交系幼胚遗传再生体系的建立

选取4种玉米自交系H99、A188、7922和1322的幼胚作为外植体,接种于10种不同诱导培养基上,诱导愈伤组织并建立遗传再生体系,同时探讨了不同基因型、培养基种类、幼胚大小、蔗糖浓度、激素浓度和配比对愈伤组织诱导率的影响。结果表明:基因型对愈伤组织诱导率高低影响显著,4种基因型玉米幼胚在诱导培养基中均产生了愈伤组织,但继代培养后只有H99能诱导出胚性愈伤组织,诱导率为46.2%;对于不同基因型培养基诱导效果依次为N6MBMS;选择幼胚长度为1.5~2.0 mm、添加蔗糖浓度为30 g/L、2,4-D浓度为2.0 mg/L及Ag NO3浓度为10 mg/L时玉米愈伤组织诱导率最高且质量较好。     

玉米幼胚愈伤组织诱导及植株再生研究

以玉米幼胚为外植体,研究了2,4-D不同浓度对愈伤组织诱导以及6-BA不同浓度对愈伤组织分化的影响.结果表明,2,4-D浓度显著影响愈伤组织的诱导,愈伤组织诱导培养基中2,4-D适宜的浓度范围是2～3 mg/L,但不同品种的外植体对2,4-D浓度反应不同,其中辽单565愈伤组织诱导2,4-D最佳浓度为2.62 mg/L,自交系742愈伤组织诱导2,4-D理论最佳浓度为2.60 mg/L;6-BA对植株的再生有促进作用,胚性愈伤组织分化的最适6-BA浓度为1.0 mg/L.     

喜树愈伤组织诱导与抑制褐化的研究

[目的]筛选喜树外植体的最佳诱导培养基,研究抑制外植体及继代愈伤组织褐化的方法。[方法]以喜树的幼叶和种胚作为外植体,通过测定过氧化物酶和多酚氧化酶的活性,从外植体选择、培养基种类、激素配比、添加物的处理等方面进行愈伤组织的诱导和抑制外植体及继代愈伤组织褐化的研究。[结果]幼叶外植体的最佳诱导培养基为:SH+NAA2.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L;种胚外植体的最佳诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L。抑制幼叶外植体褐化的方法为:增加外植体大小,吹干培养基表面水分。抑制愈伤组织继代培养褐化的方法为:最佳诱导培养基附加30mg/L抗坏血酸和5g/L活性碳;1次继代后,将质地致密的愈伤组织转移到MS培养基上培养。[结论]该研究为喜树的遗传转化和植株再生提供理论基础。     

不同玉米自交系幼胚愈伤组织诱导和分化的研究

[目的]通过对玉米幼胚培养,建立一套稳定性好、再生率高的组织培养体系.[方法]以4个玉米自交系幼胚为外植体,研究不同基因型、幼胚大小、2,4-D浓度、AgN03浓度对愈伤组织诱导的影响,进一步研究6 - BA和蔗糖浓度对愈伤组织分化及IBA和NAA对再生苗的生根影响.[结果]2,4-D浓度为2.0 ～3.0mg/L,幼胚长度为1.0～2.0 mm时,对胚性愈伤组织诱导有良好效果;在诱导期间采用隔代法添加10 mg/LAgNO3能提高胚性愈伤组织的诱导率;当6- BA为0.5 mg/L、蔗糖浓度为50 g/L时,愈伤组织分化率最高且有利于小植株的形成;IBA浓度为0.6 mg/L对植株生根较有利.[结论]对4个玉米自交系幼胚培养研究筛选出适宜玉米幼胚培养的最佳诱导、分化及生根培养基.     

生长调节物质对甜玉米幼胚体细胞植株再生性的影响

[目的]系统探讨外源生长调节物质对甜玉米幼胚愈伤组织及体细胞再生植株的诱导作用,寻找最佳培养基配方。[方法]以甜玉米甜单10号杂交种幼胚为外植体,以复合型培养基为基本培养条件,应用正交试验设计方法对影响玉米幼胚再生的4个生长调节剂的作用进行探讨,通过DPS软件分析对9种培养基进行数据分析,得出适合实验基因型的最佳培养基,初步建立了甜玉米幼胚再生体系。[结果]AgNO3是诱导Ⅱ型愈伤的关键因素,其次是2,4-D和L-pro,而CH影响最弱。最佳培养基为N6(大量)+B5(微量)+0.1g/L肌醇+500mg/LPro+2mg/L2,4-D+10mg/LAgNO3。[结论]AgNO3对诱导愈伤组织有很大的促进作用,但使用浓度不宜太高,否则会增加畸形苗的比率。     

黑莓松散型胚性愈伤组织的诱导

为了诱导出黑莓松散型胚性愈伤组织,试验采用黑莓试管苗叶片、叶柄和茎段为外植体,在含有不同2,4-D及分裂素的MS培养基上进行愈伤组织的初步诱导,从中筛选出松散型愈伤组织的最佳培养基配方;再将诱导出的黑莓松散型愈伤组织转移到含有不同激素种类和浓度的MS培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导,从中筛选出最佳培养基配方。结果表明,在1/8 MS+3 mg/L 2,4-D+100 mg/L Vc+10 g/L蔗糖的培养基上可以诱导出松散的黑莓愈伤组织;先在MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上进行胚性愈伤的诱导继代2~3次,然后转移到MS+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上继续培养并继代3~5次后即可诱导出黑莓的松散型胚性愈伤组织。试验结果将为采用黑莓体细胞诱变育种研究奠定基础。     

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

以临优145的幼胚为外植体诱导植株再生,并进行农杆菌转化研究.以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+40 g/L麦芽糖+8 g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织,每2周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基(MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+麦芽糖40 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)上培养2-3周,然后转接到再生培养基(1/10 MS+NAA 0.5mg/L+KT0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)中进行再生成苗.接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织,Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株.在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性.X-gluc染色表明,少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达.     

超甜玉米自交系幼胚高效成株系统的建立

以超甜玉米自交系S1、S2、S3和粤甜 3号等为材料 ,建立了超甜玉米高效再生系统。研究结果显示 ,超甜玉米基因型、幼胚的大小是影响胚性愈伤组织生成的主要因素 ,幼胚长度在0 5～ 1 2mm之间时 ,胚性愈伤组织的诱导频率最高。培养基中蔗糖浓度和细胞分裂素浓度对胚性愈伤组织的分化和小植株再生频率有重要影响 ,低浓度的蔗糖 (2 0 g/L)和 6 -BA (2mg/L)获得的再生频率较高。继代培养中ABA处理可使愈伤组织的再生频率提高 1 6 8倍 ,IBA浓度在 3 0mg/L ,可以明显提高小植株生根     

玉米自交系愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

玉米的组织培养比较困难,其再生体系还不完善,建立骨干自交系稳定、高效的遗传转化体系是玉米转基因技术的必要前提。以玉米常用自交系齐319、478、502、黄C和7922不同大小（1.0、1.5和2.0 mm）的幼胚为外植体,探讨不同基因型、胚大小和植物生长调节剂浓度对幼胚再生的影响,从而建立玉米高频再生体系。结果表明：以1.5 mm大小的齐319幼胚为外植体,愈伤诱导率最高,达到了86.2%;1.5 mg/L的24-D有利于胚性愈伤的形成和胚性的保持;两步法分化培养可以提高愈伤组织分化、再生成苗。确定了玉米自交系齐319较适合的培养程序为：将1.5 mm大小的幼胚盾片向上接于诱导培养基（N6＋24-D 1.5 mg/L＋L-脯氨酸0.7 g/L＋蔗糖30 g/L＋琼脂粉8 g/L＋硝酸银5μmol/L）,在25℃下暗培养20 d;挑选胚性愈伤组织在温度25℃、暗培养条件下进行继代培养,继代培养基与诱导培养基相同,每14 d继代1次;将愈伤组织继代42 d后转移至分化培养基1（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖60 g/L＋gelrite 3 g/L）,继续暗培养10 d左右,待愈伤组织形成象牙白色的块状物且有绿点出现时,将其转移到分化培养基2（MS＋肌醇100 mg/L＋蔗糖30 g/L＋gelrite3 g/L）进行光培养,2～3 d即可分化出苗;待幼苗长到4～5 cm高时,移至生根培养基（1/2 MS＋IBA0.8 mg/L＋蔗糖30 g/L）,14～21 d幼苗长出大量的根系,形成完整的植株。     

2,4-D对扁穗牛鞭草幼穗离体培养的影响

以雅安扁穗牛鞭草的幼穗为外植体,研究了2,4-D浓度和不同取材部位对愈伤组织诱导的影响以及继代培养时不同浓度的2,4-D对愈伤组织增殖、分化、生根的影响.结果表明:以幼穗下部为外植体接种在MS+2,4-D 7.0 mg/L培养基中,颗粒状愈伤组织的诱导率高达100.00％;MS+2,4-D 1.0 mg/L是幼穗愈伤组织较为适宜的继代增殖培养基,在该培养基上颗粒状胚性愈伤组织的出愈率为89.44％,愈伤组织的绿苗分化率和生根率都可达100％,平均绿芽点数和生根数等均极显著高于其他处理.     

空间诱变水稻H4成熟胚再生体系的建立

以空间诱变水稻H4成熟胚为外植体,通过调节2,4-D浓度、激素组合和分化途径,建立适宜的再生体系.结果表明:诱导培养基以NMB为基本培养基,添加2.5 mg/L 2,4-D、1.0 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,26℃暗培养30 d,愈伤诱导率达91.63％;继代培养基中添加2 mg/L ABA,对胚性愈伤组织的形成及后续分化率有一定的促进作用;两步分化法可提高愈伤组织的分化效率,分化率达84.76％,植株再生率为77.67％.初步建立了H4成熟胚愈伤组织的再生体系,为后续的遗传转化研究奠定基础.     

水稻武育粳3号成熟胚愈伤组织诱导及植株再生研究

以粳稻品种武育粳3号的成熟胚为外植体,研究不同基本培养基、蔗糖浓度、2,4-D浓度以及激素配比对愈伤组织诱导率的影响.研究表明,愈伤组织诱导培养基为:M_8+30 g/L蔗糖+10 g/L琼脂+5 g/L山梨醇+2 mg/L2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+2 mg/L ABA,最高出愈率为87.5%,多种激素配合使用比单一使用效果好;植株分化培养基为:MS+30g/L蔗糖+8 g/L琼脂+0.5 mg/L 2,4-D+1 mg/L 6-BA+1 g/L活性炭,植株分化率可以达到38%.     

高羊茅成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

[目的]优化高羊茅成熟胚的组织培养条件。[方法]以高羊茅成熟胚为外植体,MS为基本培养基,探讨不同浓度激素和激素组合对愈伤组织诱导、继代培养及植株分化的影响。[结果]添加2,4-D2.0mg/L的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,达63.5%;在1.0～4.0mg/L范围内,随着培养基中2,4-D浓度的降低,愈伤组织的颗粒性增强,致密性增加,含水量下降,其中MS＋2,4-D2.0mg/L为愈伤组织继代的最佳培养基;愈伤组织在含2.0mg/L6-BA和0.10mg/LNAA的MS培养基上植株分化率最高,达80.2%;将再生苗转移至不含植物生长调节剂的1/2MS培养基上进行增殖、壮苗,然后将其移栽入沙质壤土中,移栽成活率可达90%。[结论]该研究建立了高羊茅的高效再生体系。     

提高玉米愈伤组织再生率的研究

为了提高玉米愈伤组织再生率,以1个玉米自交系和3个杂交种的幼胚愈伤组织为试材,接入含有不同浓度2,4-D的分化预处理培养基(N6+脯氨酸700 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L+蔗糖30 g/L),2,4-D浓度设0、0.5、1.0和1.5 mg/L计4个处理,培养7 d后转移到分化培养基中进行分化处理,以继代培养7 d的愈伤组织直接转入分化培养基进行植株再生作为对照,研究了不同浓度2,4-D分化预处理对玉米愈伤组织再生率和再生进程的影响。结果表明:愈伤组织在转入分化培养基前进行预处理,可以提高玉米植株再生率。分化预处理培养基以不加2,4-D的效果最好,玉米愈伤组织再生率最高,与对照差异达到了极显著水平,且分化成苗进程加快。不同基因型中,杂交种87-1×郑22的植株再生率最高,与其他2个杂交种差异不显著,但三者的植株再生率均极显著高于自交系87-1。对玉米愈伤组织进行分化前的预处理,可以提高植株再生率,加快再生进程。     

幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油幼胚为材料,研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2,4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响,结果表明,长轴为5~7.9 mm低温处理18 h的幼胚,诱导胚性愈伤组织的效果最好;使用山梨醇(浓度为3%)为碳源、含氮量低的WPM培养基,胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基;幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2,4-D浓度为2.0 mg/L,培养基中附加5.0 mg/L AgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。