亚硒酸钠对绵羊睾丸间质细胞氧化应激及Keap1-Nrf2信号通路的影响

本试验旨在研究硒对绵羊睾丸间质细胞抗氧化能力及Keap1-Nrf2信号通路的影响。使用不同浓度亚硒酸钠（0、2、4、8μmol/L）处理绵羊睾丸间质细胞，采用试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和活性氧（ROS）含量，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分析抗氧化相关基因及蛋白表达。结果表明：2μmol/L硒组ROS和MDA含量显著低于其他各组，SOD和GSH-Px活性显著高于其他各组，8μmol/L硒组呈相反变化趋势；且随着硒浓度升高，Keap1表达量显著降低；NQO1表达量显著升高；Nrf2和HO-1的mRNA表达量显著升高，蛋白丰度呈上升趋势。综上，硒能通过调控抗氧化酶活性，激活Keap1-Nrf2抗氧化信号通路，调节细胞内的氧化应激反应。     

饲喂富硒酵母后猪肉的持水量加强与Sepw1基因表达增强的相关性研究

试验选取7周龄、体重(10.30±0.68)kg的缺硒猪30头,随机分为3组,分别饲喂添加0、0.3、3.0 mg/kg富硒酵母(SeY)的基础日粮,研究SeY对硒蛋白基因表达的影响,以及基因表达和抗氧化成分、肉品质之间的相关性,试验期8周。结果发现,日粮中添加SeY可提高肌肉的抗氧化成分;且随着日粮中SeY含量的增加,滴水损失和肌肉中的硫代巴比妥酸反应底物浓缩物含量显著降低(P<0.05);12个硒蛋白基因中肌肉Sepw1基因的mRNA表达水平极显著升高(P<0.01)。统计结果发现,滴水损失与Sepw1基因mRNA表达水平呈负相关。说明肌肉持水量增加与Sepw1基因表达增强有一定的相关性。     

低聚壳聚糖硒抵抗玉米赤霉烯酮诱导猪肠上皮细胞氧化损伤和内质网应激的作用研究

本试验旨在探究低聚壳聚糖硒拮抗玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的影响。试验设定为:对照组(C组)、 ZEN组(30μg/mL ZEN)、 ZEN+0.5 Se组(30μg/mL ZEN+0.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、 ZEN+1.5 Se组(30μg/mL ZEN+1.5μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)、ZEN+3.0 Se组(30μg/mL ZEN+3.0μmol/L低聚壳聚糖硒,以Se计)。测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位变化、氧化应激和内质网应激(ERS)相关蛋白的表达。结果表明:与对照组相比,添加ZEN显著增加LDH活性(P 0.05),极显著增加ROS含量(P 0.01),极显著降低线粒体膜电位(P 0.01),显著降低细胞存活率(P0.05);添加低聚壳聚糖硒可显著降低LDH活性(P0.05),极显著降低ROS含量(P0.01),显著增加线粒体膜电位(P0.05),极显著增加细胞存活率(P0.01);相比于对照组,添加ZEN显著降低转录因子E2相关因子(Nrf2)蛋白表达量(P0.05),添加低聚壳聚糖硒极显著降低Nrf2蛋白表达量(P0.01);相比于对照组,ZEN和ZEN+0.5 Se组血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达量显著降低(P0.05),ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se、ZEN+3.0Se组与ZEN组无显著差异(P0.05),但ZEN+1.5 Se、ZEN+3.0 Se组与对照组也无显著差异(P0.05);相比于对照组,添加ZEN显著或极显著增加葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)(P 0.05)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶/蛋白激酶R样内质网激酶(P-PERK/PERK)(P 0.05)、转录激活因子4(ATF4)(P0.05)、C/EBP同源蛋白(CHOP)(P0.01)蛋白表达量;添加低聚壳聚糖硒可显著或极显著降低GRP78(P0.05)、P-PERK/PERK(P0.01)、ATF4(P0.01)、CHOP(P0.05)蛋白表达量。综上所述,低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的IPEC-J2细胞氧化损伤和内质网应激。     

不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响

选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8 mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2 mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。     

不同硒源对蛋鸡组织硒含量及其抗氧化能力的影响

本试验比较研究了富硒益生菌(Selenium-enriched probiotics,SP)和亚硒酸钠(Sodium selenite,SS)对蛋鸡肝脏、肾脏和心肌硒含量及其抗氧化能力的影响。选取800羽健康罗曼蛋鸡,随机均分为8组,将2硒源分别以3个硒水平(0.2、0.5和1.0mg·kg-1)添加到基础日粮中组成6种试验日粮,同时将益生菌添加到基础日粮中作为益生菌对照,基础日粮作为空白对照,进行为期28d的饲养试验。在试验结束时,杀鸡取肝脏、肾脏和心肌分别进行硒含量及其谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的测定。结果表明,补硒能提高蛋鸡肝脏、肾脏、心肌的硒含量以及GSH-Px、CAT、SOD的活性和T-AOC(P0.05);且随着硒添加水平的升高,肝脏、肾脏和心肌的硒含量、GSH-Px活性均有显著升高(P0.05);添加SP在提高肝脏和心肌硒含量的能力上和在提高肝脏、肾脏和心肌的GSH-Px活性、CAT活性以及肾脏的SOD活性和T-AOC的能力上要优于或显著优于SS。结果提示,补充硒能提高蛋鸡组织硒含量及其抗氧化能力,特别提倡添加低中水平(0.2和0.5mg·kg-1)SP源硒。     

陕西富硒与非富硒地区山羊组织硒含量和GPX-7基因表达的比较

为了探讨陕西紫阳县(富硒地区)山羊各组织中微量元素硒的含量和谷胱甘肽过氧化酶7(Glutathione Peroxidase 7,GPX-7)基因的表达情况,以及组织中的硒沉积量对GPX-7基因表达的影响。利用原子荧光光谱法对年龄相仿、体质量相近的紫阳县双安镇(n=7)和广成镇(n=7)和宝鸡市陈仓区白山羊体内硒含量进行了测定;同时运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)相对定量技术测定GPX-7基因mRNA的相对表达量。紫阳双安镇山羊硒含量显著高于紫阳广成镇(P0.05),同时紫阳县均显著高于宝鸡陈仓区(P0.05);但是紫阳双安镇与紫阳广成镇山羊肺脏中硒含量差异不显著(P0.05)。GPX-7基因在各组织器官中广泛表达,但是不同地区的山羊表现出不同的组织差异性。紫阳双安镇山羊心脏、脾脏、肾周脂肪和背最长肌组织中mRNA水平与紫阳广成镇差异不显著(P0.05),但是紫阳地区均显著高于宝鸡陈仓区(P0.05)。在肺脏、肾脏、股二头肌和淋巴组织中,来自不同地区的山羊GPX-7基因mRNA的表达量地差异均两两显著(P0.05),其中紫阳广成镇山羊肺脏的表达量显著高于其他两个地区(P0.05)。由此可见,山羊各组织器官中微量元素硒的沉积量和GPX-7基因mRNA的表达量表现出较为一致的地域趋势,即紫阳双安镇紫阳广成镇宝鸡陈仓区,这表明微量元素硒上调GPX-7基因的表达,但是具有组织差异性。     

乳铁蛋白对滇撒配套系断奶仔猪生产性能、血清抗氧化指标及组织抗氧化基因表达的影响

本试验旨在研究乳铁蛋白(lactoferrin,LF)对滇撒配套系断奶仔猪生产性能、血清抗氧化指标及组织抗氧化基因表达量的影响。选用(28±2)日龄滇撒配套系断奶仔猪192头,随机分为4个处理,每个处理6个重复,每个重复8头,对照组饲喂基础饲粮,LF1、LF2和LF3 3个试验组在基础饲粮基础上分别添加125、250和500mg/kg的LF。饲喂42d后,测定平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和腹泻率。采用试剂盒检测血清总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活力,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定心脏和肝脏谷氧还蛋白1(GRX1)、硫氧还蛋白1(TRX1)、超氧化物歧化酶(SOD)及GSH-Px基因表达量。结果表明:1)与对照组相比,LF2和LF3组显著提高了ADG、ADFI(P0.05),LF1和LF2组显著降低了料重比(P0.05),LF2和LF3组显著降低了仔猪的腹泻率(P0.05)。2)血清中,与对照组相比,LF1(P0.05)、LF2(P0.01)和LF3组(P0.05)T-SOD活力均显著或极显著提高;LF2组GSH-Px活力及T-AOC均显著提高(P0.05);LF2和LF3组的MDA含量均显著降低(P0.05)。3)与对照组相比,LF1和LF2组GRX1、SOD和GSH-Px基因在心脏和肝脏中的表达量均增加,其中LF1组肝脏GSH-Px差异显著(P0.05),LF2组肝脏GRX1、SOD和GSH-Px差异极显著(P0.01);LF1组TRX1基因在肝脏中的表达量极显著提高(P0.01);LF3组GRX1、TRX1基因在肝脏和心脏中及SOD、GSH-Px基因在心脏中的表达量均降低,其中心脏GRX1、TRX1和SOD差异极显著(P0.01)。结果提示:在断奶仔猪饲粮中添加一定量的LF(本试验添加250mg/kg最佳)可提高断奶仔猪的生长性能,提高血清抗氧化指标及心脏和肝脏中抗氧化基因GRX1、TRX1、SOD和GSH-Px的表达量。     

酵母硒和苜草素联用对产蛋后期蛋鸡蛋品质、抗氧化能力和胆固醇代谢的影响

本试验旨在研究不同水平酵母硒和苜草素联用对产蛋后期蛋鸡蛋品质、抗氧化能力和胆固醇代谢的影响。试验选取756只69周龄海兰褐蛋鸡,随机分为7组,每组6个重复,每个重复18只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.2 mg/kg酵母硒+500 mg/kg苜草素、0.2 mg/kg酵母硒+1 000 mg/kg苜草素、0.6 mg/kg酵母硒+500 mg/kg苜草素、0.6 mg/kg酵母硒+1 000 mg/kg苜草素、1.0 mg/kg酵母硒+500 mg/kg苜草素和1.0 mg/kg酵母硒+1 000 mg/kg苜草素。试验预试期2周,正试期8周。结果表明:1)饲粮添加酵母硒和苜草素可显著提高蛋鸡产蛋率(P0.05),显著降低料蛋比(P0.05),有提高鸡蛋蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位的趋势。2)饲粮添加酵母硒和苜草素极显著提高蛋鸡血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶活性、肝脏GSH-Px活性以及肝脏GSH-Px1、硫氧还蛋白还原酶1 mRNA表达量(P0.01);极显著降低蛋鸡肝脏甘油三酯含量和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶mRNA表达量(P0.01),极显著提高肝脏胆固醇7α-羟化酶和固醇调节元件结合蛋白-1c mRNA表达量(P0.01);极显著提高蛋黄硒含量(P0.01)。3)添加0.6 mg/kg酵母硒+1 000 mg/kg苜草素可极显著提高蛋鸡血浆总抗氧化能力(P0.01),极显著降低蛋鸡血浆丙二醛含量(P0.01),极显著降低蛋黄胆固醇和甘油三酯含量以及肝脏胆固醇含量(P0.01)。综上,饲粮中添加酵母硒和苜草素可提高产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、抗氧化能力及胆固醇代谢功能,以0.6 mg/kg酵母硒+1 000 mg/kg苜草素组合效果最佳。     

酵母硒对肉鹅免疫和抗氧化指标的影响

本试验旨在研究酵母硒对肉鹅免疫和抗氧化指标的影响.试验选用1日龄平均体重为(96.15±6.15)g的肉鹅96只,随机分成4组,每组3个重复,每个重复8只(公母各占1/2),分别饲喂在基础日粮中添加了0、0.1、0.3和0.5 mg/kg硒(酵母硒的硒含量为1 000 mg/kg)的试验日粮,试验期为9周.结果表明:与对照组相比,(1)免疫指标:0.3 mg/kg添加组的免疫器官指数显著升高(P＜0.05),各试验组淋巴细胞转化率显著升高(P＜0.05),0.3 mg/kg添加组鹅副黏病毒抗体效价在6周龄时显著升高(P＜0.05);(2)抗氧化指标:添加量为0.1 mg/kg时,血清中3和9周龄谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、6周龄总超氧化物歧化酶(T-SOD)、3和6周龄总抗氧化能力(T-AOC)以及肝脏中各周龄GSH-Px、3和9周龄T-SOD、3周龄T-AOC活性显著提高(P＜0.05);添加量为0.3 mg/kg时,血清中各周龄GSH-Px、T-AOC和6周龄T-SOD以及肝脏中各周龄GSH-Px、3和9周龄T-SOD、6周龄T-AOC活性显著提高;添加量为0.5 mg/kg时,血清中3周龄GSH-Px、T-SOD和3、6周龄T-AOC以及肝脏中各周龄GSH-Px、3和9周龄T-SOD活性显著提高;酵母硒添加量在0.1～0.5 mg/kg时,血清和肝脏中丙二醛(MDA)均有显著降低.由此得出,日粮中添加酵母硒可提高肉鹅的免疫与抗氧化能力,以0.3 mg/kg添加量效果最佳.     

硒源与硒水平对军曹鱼幼鱼生长性能、肝脏和血清抗氧化指标及组织硒含量的影响

本试验旨在研究硒源和硒水平对军曹鱼幼鱼生长性能、肝脏和血清抗氧化指标及组织硒含量的影响,以确定军曹鱼幼鱼对不同硒源的最适需要量。在基础饲料中分别添加0(对照)、0.3、0.6、0.9和1.2 mg/kg(以硒计)的亚硒酸钠(Se-S)或蛋氨酸硒(Se-Met),配制9种试验饲料(共用对照饲料),饱食投喂初始体重为(22.18±0.35)g的军曹鱼幼鱼10周。每种试验饲料投喂3个网箱(重复),每个网箱放养30尾试验鱼。结果表明:1)硒水平对特定生长率(SGR)和增重率(WGR)有极显著影响(P0.01),但对成活率(SR)和饲料系数(FCR)无显著影响(P0.05);硒源及硒源与硒水平的交互作用对SGR、W GR、FCR和SR均无显著影响(P0.05)。SGR和W GR随着硒水平的升高先升高后降低。2)硒水平极显著影响肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性和丙二醛(MDA)含量及血清GSH-Px活性(P0.01),并显著影响血清GR活性(P0.05);硒源极显著影响肝脏GR、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和MDA含量及血清T-SOD活性(P0.01);硒源和硒水平的交互作用显著影响肝脏CAT活性和MDA含量及血清T-SOD活性(P0.05)。肝脏和血清GSH-Px活性随着硒水平的升高呈先升高后稳定趋势,GR活性呈先下降后稳定趋势。2种硒源均在添加量为0.9 mg/kg时有最高的肝脏GSH-Px活性,最低的肝脏GR活性。肝脏CAT活性随着硒水平的升高逐渐升高。3)脊椎骨、全鱼和肝脏硒含量随硒水平的升高而增加。硒源极显著影响脊椎骨硒含量(P0.01),硒源和硒水平的交互作用极显著影响肝脏和脊椎骨硒含量(P0.01)。以蛋氨酸硒和亚硒酸钠为硒源,通过二次回归曲线分析得出饲料硒水平分别为1.29和1.46 mg/kg时军曹鱼幼鱼可以获得最大SGR。以SGR和全鱼硒含量为判据,军曹鱼幼鱼对蛋氨酸硒的生物利用率分别相当于亚硒酸钠的1.20和2.90倍。     

Determination of optimal dietary selenium levels by full expression of selenoproteins in various tissues of broilers from 1 to 21 d of age

The current NRC dietary selenium (Se) requirement (0.15 mg/kg) of broilers is primarily based on growth performance data reported in 1986. Our study aimed to determine optimal dietary Se levels of broilers fed a practical corn-soybean meal diet for the full expression of selenoproteins in various tissues. A total of 384 one-d-old male broilers (n = 8 replicates/diet) were fed a basal corn-soybean meal diet or the basal diet supplemented with 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 or 0.5 mg Se/kg in the form of Na₂SeO₃ for 21 d. Regression analysis was conducted to evaluate the optimal dietary Se levels using broken-line, quadratic or asymptotic models. The activity of glutathione peroxidase (GPX) in the plasma, liver, kidney and pancreas, iodothyronine deiodinase (DIO) in the plasma, liver and pancreas, and thioredoxin reductase (Txnrd) in the liver and pancreas, the mRNA levels of Gpx1, Gpx4, Dio1, selenoprotein (Seleno) h, Selenop and Selenou in the liver, Gpx4, Dio1, Txnrd1, Txnrd2, Selenoh, Selenop and Selenou in the kidney, and Gpx1, Gpx4, Selenoh and Selenou in the pancreas, and the protein levels of GPX4 in the liver and kidney of broilers were influenced (P < 0.05) by added Se levels, and increased quadratically (P < 0.05) with the increase of added Se levels. The estimates of optimal dietary Se levels were 0.07 to 0.36 mg/kg based on the fitted broken-line, quadratic or asymptotic models (P < 0.001) of the aforementioned selenoprotein expression in the plasma, liver and kidney, and 0.09 to 0.46 mg/kg based on the fitted broken-line models (P < 0.001) of the aforementioned selenoprotein expression in the pancreas. The results indicate that the optimal dietary Se levels would be 0.36 mg/kg to support the full expression of selenoproteins in the plasma, liver and kidney, and 0.46 mg/kg to support the full expression of selenoproteins in the pancreas of broilers fed a practical corn-soybean meal diet from 1 to 21 d of age.     

不同水平无机及有机复合微量元素对蛋鸡血浆抗氧化能力的影响

本试验旨在研究不同水平无机及有机复合微量元素对蛋鸡血浆抗氧化能力的影响。选取990只22周龄的京红1号蛋鸡,随机分为11组,每组6个重复,每个重复15只鸡。1组为对照组,试验组分别在饲粮中按NRC(1994)推荐需要量的25%、50%、75%、100%、125%添加不同水平的无机(2~6组)或有机复合微量元素(7~11组),其中锰(Mn)、铁(Fe)、锌(Zn)、硒(Se)添加水平参照蛋鸡NRC(1994)标准,铜(Cu)添加水平参照肉鸡NRC(1994)标准。试验期24周。结果表明:1)与对照组相比,添加NRC推荐需要量的75%、100%、125%无机复合微量元素极显著提高了蛋鸡的血浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性(P0.01);添加NRC推荐需要量的100%、125%无机复合微量元素极显著提高了血浆谷胱甘肽过氧化物歧化酶(GSH-Px)活性(P0.01);添加NRC推荐需要量的125%无机复合微量元素极显著提高了试验第8周和第24周时血浆总抗氧化能力(T-AOC)(P0.01);添加NRC推荐需要量的75%、100%、125%无机复合微量元素极显著降低了试验第16周时血浆丙二醛(MDA)含量(P0.01)。2)与对照组相比,添加不同水平的有机复合微量元素均极显著提高了试验第8周时蛋鸡的血浆T-AOC,试验第4周、第8周和第16周时血浆T-SOD活性和试验第16周时血浆GSH-Px活性(P0.01);添加NRC推荐需要量的50%、75%、100%、125%有机复合微量元素极显著降低了试验第4周和第16周时血浆M DA含量(P0.01)。3)NRC推荐需要量的75%水平时,试验第8周,有机组血浆T-AOC显著高于无机组(P0.05);试验第16周和第24周,有机组血浆GSH-Px活性显著高于无机组(P0.05)。NRC推荐需要量的125%水平时,试验第16周,有机组血浆T-SOD活性显著高于无机组(P0.05)。试验表明,蛋鸡饲粮中添加NRC推荐需要量的75%以上无机复合微量元素有利于提高血浆的抗氧化能力;蛋鸡饲粮中添加NRC推荐需要量的25%、50%有机复合微量元素有利于提高血浆的抗氧化能力;在NRC推荐需要量的75%、125%水平时,有机复合微量元素对蛋鸡抗氧化能力的提高效果优于无机复合微量元素。     

酵母硒、黄芪多糖及其复合剂对半番鸭生长性能、肉品质和抗氧化能力的影响

本文旨在研究酵母硒、黄芪多糖及其复合剂对半番鸭生长性能、肉品质和抗氧化能力的影响。从同一批饲养的22日龄半番鸭中挑选出体重相近的144只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复12只鸭,试验期为49 d。采用2×2因子水平设计,对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ组饲喂基础饲粮+0.3%酵母硒,试验Ⅱ组饲喂基础饲粮+300 mg/kg黄芪多糖,试验Ⅲ组饲喂基础饲粮+复合剂(300 mg/kg黄芪多糖+0.3%酵母硒)。试验期间测定生长性能指标,并于70日龄每组随机选择12只(每重复4只)进行屠宰,测定其胸肌肉品质和抗氧化指标。结果显示:1)试验Ⅰ组和试验Ⅱ组平均日增重、平均日采食量及料重比与对照组相比差异均不显著(P0.05);试验Ⅲ组平均日增重显著高于对照组(P0.05),平均日采食量和料重比与对照组无显著差异(P0.05)。2)与对照组相比,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组24 h p H均显著或极显著提高(P0.05或P0.01),48 h滴水损失率、蒸煮损失率、剪切力显著或极显著降低(P0.05或P0.01);试验Ⅲ组肉色红度(a*)值显著提高(P0.05);试验Ⅱ组和试验Ⅲ组肉色黄度(b*)值均显著降低(P0.05)。3)试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组24~120 h的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC)均显著或极显著高于对照组(P0.05或P0.01);试验Ⅰ组、试验Ⅱ组48~120 h和72~120 h的丙二醛(M DA)含量分别显著或极显著低于对照组(P0.05或P0.01),试验Ⅲ组24~120 h的MDA含量极显著低于对照组(P0.01)。随储存时间延长,各组SOD、GSH-Px活性和T-AOC均呈下降趋势,MDA含量则呈上升趋势,但3个试验组各抗氧化指标的变化速度比对照组缓慢。4)酵母硒和黄芪多糖对肌肉24 h p H、剪切力、24~120 h的SOD活性、48~120 h的GSH-Px活性、120 h的M DA含量有显著或极显著交互作用(P0.05或P0.01)。由此可见,酵母硒、黄芪多糖均可改善半番鸭肌肉品质和提高抗氧化能力,降低脂质过氧化程度,有效延长货架期,且二者对于肌肉抗氧化、p H和嫩度改善均具有明显的协同效应。     

不同蛋白质源饲料中添加α-酮戊二酸对杂交鲟幼鱼肝脏谷氨酰胺含量、抗氧化能力及生长激素、胰岛素样生长因子-Ⅰ基因表达的影响

本试验旨在研究不同蛋白质源饲料中添加α-酮戊二酸对杂交鲟(Acipenser schrenckii♀×Acipenser baeri)幼鱼肝脏谷氨酰胺(Gln)含量、抗氧化能力及生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因表达的影响。分别以大豆浓缩蛋白和大豆浓缩蛋白+鱼粉为蛋白质源,设2个α-酮戊二酸(AKG)添加量(0和1%),配制4种试验饲料。选取平均体重为(7.65±0.04)g的杂交鲟幼鱼500尾,随机分为4组,每组5个重复,每个重复25尾,养殖周期为8周。结果表明:饲料中添加1%AKG显著提高肝脏Gln含量和谷氨酰氨合成酶(GS)活性(P0.05),对肝脏碱性磷酸酶(ALP)活性无显著影响(P0.05)。蛋白质源对肝脏Gln含量、GS活性和ALP活性无显著影响(P0.05),且蛋白质源和AKG添加量对肝脏Gln含量、GS活性和ALP活性无显著交互作用(P0.05)。饲料中添加1%AKG显著降低肝脏丙二醛(MDA)含量,显著提高肝脏还原型谷胱甘肽(GSH)含量(P0.05)。与大豆浓缩蛋白+鱼粉作为蛋白质源相比,大豆浓缩蛋白作为蛋白质源显著提高肝脏GSH含量(P0.05)。蛋白质源和AKG添加量对肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均无显著影响(P0.05),且蛋白质源和AKG添加量对肝脏各抗氧化指标无显著交互作用(P0.05)。饲料中添加1%AKG显著提高肝脏GH、IGF-Ⅰ基因的相对表达量(P0.05)。与大豆浓缩蛋白+鱼粉作为蛋白质源相比,大豆浓缩蛋白作为蛋白质源显著提高肝脏IGF-Ⅰ和GH基因的相对表达量(P0.05)。蛋白质源和AKG添加量对肝脏GH、IGF-Ⅰ基因的相对表达量无显著交互作用(P0.05)。综上所述,杂交鲟幼鱼饲料中添加1%AKG可以通过提高肝脏中GS的活性进而提高Gln的含量,通过提高肝脏中GSH的含量进而降低MDA的含量,并可提高肝脏中生长相关基因GH、IGF-Ⅰ的表达。     

脂多糖刺激后不同时间断奶仔猪空肠上皮细胞铁死亡的变化规律

本试验旨在探究用脂多糖(LPS)刺激后不同时间断奶仔猪空肠上皮细胞发生铁死亡的变化规律。选取体重和遗传基础相近的21日龄杜×长×大断奶仔猪42头,饲喂基础饲粮14 d后,空腹注射LPS,按100μg/kg BW注射LPS后不同时间随机分为7个处理,分别于0、1、2、4、8、12、24 h屠宰取样,测定空肠上皮细胞铁死亡相关基因mRNA表达量以及抗氧化水平。结果表明:在LPS刺激后8 h,空肠上皮细胞铁死亡关键基因膜蛋白转铁蛋白受体1(TFR1)、热休克蛋白B1(HSPB1)、铁反应元件结合蛋白2(IREB2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的mRNA表达量最高(P<0.05);在LPS刺激后2 h,胱氨酸/谷氨酸反向转运体亚基(SLC7A11)的mRNA表达量最高(P<0.05);在LPS刺激后8、12、24 h,空肠上皮细胞总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均显著降低(P<0.05);在LPS刺激后8 h,谷胱甘肽(GSH)含量最低(P<0.05)。由此可见,在LPS刺激后8 h,断奶仔猪空肠上皮细胞铁死亡发生程度最为严重。     

T-2毒素致猪肾细胞损伤及氧化应激相关机理的研究

试验旨在研究T-2毒素对猪肾细胞(PK15)的毒性作用及其氧化应激反应。用不同浓度的T-2毒素处理细胞,通过MTT法检测细胞活性、测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)释放率及苏木素伊红(HE)染色观察细胞形态变化评估T-2毒素对细胞的毒性作用;通过检测细胞内的活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性,评估不同剂量T-2毒素对细胞氧化应激水平的影响;检测Nrf2-ARE信号通路相关基因Nrf2、Keap1、GPx-1、Nqo1及Hmox1 mRNA的表达水平,分析T-2毒素对该信号通路的影响。结果表明,PK15细胞活性呈毒素剂量依赖性下降(P<0.05),LDH释放率呈毒素剂量依赖性上调(P<0.05);随T-2毒素剂量升高,细胞间隙逐渐增加,细胞固缩,细胞数量也随之减少。细胞内ROS阳性细胞率呈剂量依赖性升高,且T-2毒素为100 nmol/L时,ROS阳性细胞率显著高于其他剂量组(P<0.05);细胞内MDA含量与GPx活性呈毒素剂量依赖性升高(P<0.05),而GSH含量呈毒素剂量依赖性下降(P<0.05)。20、50及100 nmol/L的T-2毒素可显著上调Keap1、Gpx-1及Nqo1基因mRNA的相对表达量(P<0.05),且50 nmol/L的相对表达量最高。T-2毒素对K15细胞有毒性作用,可诱导其氧化损伤,且该氧化应激过程受Nrf2-AER信号通路调控。     

CRISPR/Cas13d介导猪胎儿成纤维细胞SUV39H1/SUV39H2基因敲降

研究旨在利用CRISPR/Cas13d系统对猪胎儿成纤维细胞（PEF）中的胚胎发育相关基因SUV39H1/SUV39H2进行RNA水平的敲降，从而在猪上建立CRISPR/Cas13d介导的基因敲降系统。根据SUV39H1、SUV39H2基因的编码序列各设计3个靶向编码链的sgRNAs，并以单链寡核苷酸的形式合成，退火后与BspQⅠ线性化的sgRNA表达载体进行连接，构建SUV39H1-sgRNA和SUV39H2-sgRNA表达载体，用Sanger软件进行测序；将Cas13d表达载体和靶向SUV39H1/SUV39H2基因的sgRNA载体按照1∶1、1∶2、1∶4、2∶1和4∶1比例转染猪胎儿成纤维细胞，48 h后收集细胞，用流式细胞术分选检测细胞转染效率，用半定量PCR和实时荧光定量PCR检测敲降效率；用半定量PCR和免疫荧光检测敲降SUV39H1/SUV39H2基因后，靶基因转录水平及组蛋白H3K9me3水平的变化。测序结果表明，针对2个基因设计的各3条sgRNAs均成功连入载体中；流式细胞术分选结果显示，转染效率约70%；半定量PCR结果表明，与对照组相比，3个sgRNAs均极显著降低了SUV39H1和SUV39H2基因的表达（P<0.01），其中SUV39H1-sgRNA-2和SUV39H2-sgRNA-1均可使SUV39H1和SUV39H2的表达降低50%；Cas13d∶sgRNA为1∶1、1∶2和1∶4组细胞的存活率高于2∶1和4∶1组；实时荧光定量PCR结果表明，Cas13d∶sgRNA为1∶2、1∶4、2∶1和4∶1组敲降效率均显著高于1∶1组（P<0.05），且Cas13d∶sgRNA为1∶2组敲降效率最高（70%）。半定量PCR结果显示，转染SUV39H1-sgRNA-2和SUV39H2-sgRNA-1极显著降低SUV39H1和SUV39H2的表达，表达量为对照组的25%~30%（P<0.01）。免疫荧光检测结果表明，敲降SUV39H1和SUV39H2基因后，组蛋白H3K9me3水平显著降低（P<0.05）。因此，本研究利用CRISPR/Cas13d系统在猪胎儿成纤维细胞中成功敲降SUV39H1和SUV39H2，并下调其催化的H3K9me3水平。     

L-茶氨酸对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡的影响

本试验通过建立过氧化氢(H_2O_2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究L-茶氨酸对H_2O_2诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率及其凋亡通路关键基因表达量的影响。选取42日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,培养于含5%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基中,待细胞密度达到60%~70%时,随机分为5组,分别为培养基中无额外添加物的对照组、添加800μmol/L H_2O_2的Ⅰ组、添加800μmol/L H_2O_2+4 mmol/L L-茶氨酸的Ⅱ组、添加800μmol/L H_2O_2+8 mmol/L L-茶氨酸的Ⅲ组和添加800μmol/L H_2O_2+16 mmol/L L-茶氨酸的Ⅳ组,每组3个重复。作用12 h后,应用流式细胞术(FCM)检测山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率,并采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡通路关键基因半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸-8(Caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)、Fas相关死亡域蛋白(FADD)和凋亡酶激活因子(Apaf-1)的表达量进行检测。结果显示:1)通过膜联蛋白-V(annexin V)/碘化丙啶(PI)联合染色结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组)细胞晚期凋亡比率显著降低(P0.05),且细胞晚期凋亡比率随L-茶氨酸添加浓度的增加逐渐降低。2)通过RT-q PCR检测结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1基因的表达量皆显著降低(P0.05)。由此得出,L-茶氨酸对H_2O_2引起的山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡具有一定的保护作用,该结果可为今后研究反刍家畜瘤胃氧化应激损伤机制提供技术支持和理论参考。