中药蟾酥免疫增强剂对肉仔鸡免疫器官生长发育及免疫活性细胞影响的研究

本研究对肉仔鸡饲料中添加中药蟾酥免疫增强剂后,免疫器官的生长发育情况及免疫器官中免疫活性细胞的变化进行了观察。结果显示,中药蟾酥免疫增强剂组雏鸡胸腺、法氏囊和脾脏等免疫器官的重量和指数明显高于空白对照组,各免疫器官不同区域的T淋巴细胞和浆细胞数也明显增多,说明中药蟾酥免疫增强剂对肉仔鸡免疫器官的生长发育和免疫活性细胞的增殖都有明显的促进作用。     

鸡马立克氏病二价疫苗免疫鸡的病理组织学研究

1日龄雏鸡接种鸡马立克氏病二价疫苗(SB-1+HVT)3000PFU,而后18日龄攻以MDBJ-1血毒.定期剖杀三例并观察大体或显微MD组织病变.直至98日龄,在鸡内脏和外周神经等组织中始终可见到网状细胞或淋巴细胞的轻度增生.二价疫苗与HVT冻干苗、SB-1单价苗在相同条件下进行了比较.试验结果表明,眼观病变及组织淋巴细胞增生的出现,病灶范围和病变程度,经二价疫苗免疫的鸡较其他免疫鸡表现轻微.通常二价疫苗仅仅产生长期的轻度非致瘤性组织病理变化.     

鸡IL-2的毕赤酵母表达和生物活性鉴定

IL-2是一种重要的免疫相关细胞因子,借助PCR去掉鸡IL-2基因片段(387bp)信号肽,连接到pPICZαA表达载体中,通过电转化转入Pichia酵母GS115菌株的感受态中,对筛选出来的阳性菌株以终浓度为1%的甲醇诱导表达,经SDS-PAGE及Western Blot分析,结果表明酵母成功分泌表达了重组鸡IL-2,分子量为17.8kD。通过Ni-NTA His Bind 柱层析,250mM咪唑的洗脱液洗脱,得到纯度较高的重组鸡IL-2,淋巴细胞增殖实验证明,重组鸡IL-2具有明显的促进淋巴细胞增殖的生物活性,为进一步研究其免疫佐剂的作用提供了实验基础。     

鸡传染性法氏囊病的诊疗

<正>鸡传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病毒引起的以破坏鸡的中枢免疫器官-法氏囊为主要发病机理的病毒性传染病,该病的危害不仅使鸡只死亡、淘汰率增加、影响增重等直接经济损失,更重要的是病毒损伤法氏囊而导致免疫抑制,使病鸡对大肠杆菌、沙门氏菌、鸡球虫等病原更易感,对马立克疫苗、新城疫疫苗等免疫接种的免疫应答下降或丧失。1发病情况     

中药“增免散”对免疫抑制鸡免疫功能的影响

将300只1日龄雏鸡随机分成正常对照组、中药“增免散”组、环磷酰胺组、环磷酰胺组 左旋咪唑组、环磷酰胺 “增免散”组,6日龄用鸡新城疫LaSota疫苗免疫点眼滴鼻,14、21、28、35日龄测定鸡血液ND抗体效价、免疫器官指数、细胞免疫功能、红细胞免疫粘附功能等,探索中药“增免散”的免疫增强机理。结果表明:中药“增免散”不但能显著提高Lasota活苗接种雏鸡的特异性HI抗体水平,延长其持续时间,能促进雏鸡免疫器官的生长发育,能显著增高雏鸡外周血T淋巴细胞ANAE阳性率,并对雏鸡红细胞免疫粘附功能具有显著促进作用,而且对环磷酰胺的免疫抑制有部分拮抗作用。     

PEDV亚单位疫苗免疫增强剂的筛选

为了研究PEDV的新型亚单位疫苗,提高PEDV亚单位疫苗的免疫原性,选取免疫增强剂CVC1302、CVC1303与国家兽用生物制品工程技术研究中心构建的可溶性表达PEDV S蛋白核心表位COE的重组蛋白(p QZCOE-LTB)混合乳化制成疫苗,免疫4周龄的ICR小鼠,首免14 d后加免1次,随后采集首免14(加强免疫前),21,28,55 d的小鼠血清,分别用琼扩试验的方法定性检测血清IgG抗体以及用ELISA试剂盒定量检测小鼠血清IgG抗体滴度动态变化,肠组织sIgA抗体滴度。结果表明,重组蛋白与CVC1303配合使用免疫小鼠能产生显著高于灭活苗(CV777)阳性对照组的IgG和sIgA抗体水平,说明CVC1303免疫增强剂能有效增强该重组蛋白的免疫原性,提高亚单位疫苗免疫效果。     

脂多糖与β葡聚糖对迟钝爱德华氏菌亚单位疫苗的免疫促进效果研究

为了研究脂多糖与β葡聚糖的协同免疫促进效果,本论文重组表达了迟钝爱德华氏菌的一个高效亚单位疫苗候选蛋白甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）,利用纯化的重组GAPDH（rGAPDH）蛋白单独或混合脂多糖和β葡聚糖免疫牙鲆,免疫后通过检测牙鲆抗体水平、免疫相关基因表达及免疫保护力三方面指标变化对脂多糖和酵母β葡聚糖的免疫促进效果进行研究。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测结果显示,脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆的抗体效价在免疫后第14和30天均显著高于单独免疫rGAPDH蛋白的牙鲆,在第30天时其效价为211.76;荧光定量PCR检测结果显示,相比PBS对照组,牙鲆在注射免疫后脾脏组织中IL-1β、IL-6、MHC-IIα、IgM、TCRα及C型溶菌酶6种免疫相关基因表达量均出现不同程度的上调,而其中脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆在免疫后多个时间点其基因表达水平均显著高于单独免疫rGAPDH蛋白的牙鲆;免疫保护性实验结果同样显示,脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆在攻毒后累计死亡率显著低于对照组和单独免疫rGAPDH蛋白组,直至第14天累计死亡率为30%,相对免疫保护率为68%。研究表明,脂多糖和β葡聚糖作为疫苗免疫刺激剂使用可显著增强牙鲆的免疫应答水平,提升亚单位疫苗的免疫效果。     

PRRSV弱毒细胞疫苗与灭活疫苗生殖道黏膜免疫效果观察

应用组织学方法比较观察了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒细胞疫苗与灭活疫苗生殖道黏膜免疫的效果。试验选用5月龄长白×大约克夏二元杂交母猪18头。PRRSV弱毒细胞疫苗和灭活疫苗通过生殖道黏膜免疫接种。结果表明PRRSV弱毒细胞疫苗生殖道黏膜接种组母猪的子宫黏膜上皮内淋巴细胞数较灭活疫苗生殖道黏膜免疫接种组和对照组母猪显著减少(P＜0.01);而且子宫黏膜上皮变矮变薄,变得有些不规则。灭活疫苗生殖道黏膜接种组母猪子宫黏膜上皮内淋巴细胞数与对照组母猪间差异不显著(P＞0.05)。本试验结果显示PRRSV弱毒细胞疫苗经生殖道黏膜免疫接种则对生殖道黏膜上皮内淋巴细胞产生抑制作用。说明PRRSV弱毒细胞疫苗和灭活疫苗经生殖道黏膜免疫效果不理想。     

蟾酥注射液对新城疫疫苗免疫效果的影响研究

为了探讨蟾酥注射液对新城疫疫苗免疫效果的影响。选取1日龄健康雏鸡240只,随机分成4组,每组60只,设试验组（低剂量组、中剂量组和高剂量组）和对照组,选择不同浓度的蟾酥注射液与新城疫疫苗联合使用作为试验组。分别在21、28、35、42、49和56日龄,通过β-微量法,检测血清中ND-HI抗体;通过MTT法,检测外周血T细胞吸光度值（OD值）;通过称量体重和免疫器官重量的方法,检测免疫器官指数。结果显示：蟾酥注射液各组与对照组比较,ND-HI抗体水平、外周血T细胞转化、胸腺指数、法氏囊指数和脾指数均有不同程度的提高。说明蟾酥注射液能够提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,从而增强新城疫疫苗的免疫效果。     

鸡IL-2基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测

根据GenBank中已发表的鸡白细胞介素2 (IL-2)mRNA基因序列,利用Premier 5.0软件设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,以ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出鸡IL-2基因。经琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为432 bp,分离纯化片段,克隆入pMD-18T载体,转化DH5α感受态细胞,获得阳性重组质粒,经酶切鉴定,测序结果显示,我们得到了长432bp的基因,含有一个 432bp的开放阅读框,编码143个氨基酸。生物软件分析结果表明该序列与GenBank中发表的鸡的IL-2的核苷酸序列同源性为98.8%,与黄牛、马、鸡、绵羊、牛、犬、人、山羊、鼠、水牛的核苷酸同源性分别为31.2%、28.2%、27.3%、30.6%、26.2%、31.7%、30.1%、30.8%、26.6%、30.6%。与GenBank中发表的鸡IL-2编码的氨基酸序列同源性为95.8%,与上述动物的氨基酸序列同源性分别为7.6%、7.6%、9.7%、7.6%、6.9%、10.4%、11.8%、7.6%、9.0%、7.6%、10.4% 。这表明鸡的IL-2基因被成功克隆,它存在着种属特异性。这为进一步研究该基因的生物学作用特别是利用IL-2增强DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。     

高母源抗体下蛋雏鸡新城疫最佳免疫程序探讨

通过在不同日龄和不同母源抗体水平时对具有鸡新城疫（ND）较高母源抗体的蛋雏鸡进行免疫,探讨在高母源抗体下蛋雏鸡新城疫免疫程序与免疫效果的关系。结果表明：用新城疫弱毒疫苗和油乳剂疫苗同时免疫后,免疫越早,受母源抗体干扰越大,总体免疫效果越差;当ND母源抗体降到6log2左右（大约在11～13日龄）时进行首免,隔14天进行二免,鸡体产生保护水平（6log2）以上的ND抗体最快、抗体水平上的最高、维持时间最长,总体免疫效果最好。因此,母源抗体6log2时首免,14天后二免为最佳免疫程序。     

肉种鸡免疫两不同ND-IB-IBD-Reo四联灭活疫苗后的抗体水平比较

为了检测肉种鸡开产前免疫两不同的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病-病毒性关节炎四联灭活疫苗（ND-IB-IBD-Reo四联苗）后的抗体水平差异,在鸡群20周龄分别用A、B疫苗免疫,免疫后28 d和56 d 用HI检测ND抗体水平和ELISA检测IB、IBD和Reo的抗体水平。结果显示,免疫后28 d和56 d,B疫苗的IBD和REO抗体效价效价显著高于A疫苗（P﹤0.05）,ND和IB的抗体效价虽较A疫苗高但差异不显著（P﹥0.05）。结果表明,B疫苗的免疫抗体水平优于A疫苗,该研究为肉种鸡ND-IB-IBD-Reo四联灭活疫苗的筛选和合理免疫程序的制定提供依据。     

鸵鸟皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官指数及T淋巴细胞数量的影响初探

摘要：为了观察非洲鸵鸟皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官指数及T淋巴细胞数量的影响,进而研究其对雏鸡免疫系统的调节能力。选取50只1日龄健康雏鸡,随机分为两组：试验组（T）从1日龄开始每天在饮水中加入浓度为1μg/ml的鸵鸟皮肤抗菌肽提取物,对照组（C）饮水中不添加抗菌肽提取物,分别于1、4、7、10、17日龄时随机抽取5只雏鸡称重后处死,采取免疫器官称重并运用ANAE染色方法测定免疫器官T淋巴细胞数量。结果发现抗菌肽能够提高10~17日龄雏鸡体重,提高4~7日龄雏鸡的免疫器官指数及7日龄免疫器官的T淋巴细胞数量( P < 0.05)。结果表明饮水中添加非洲鸵鸟皮肤抗菌肽可以促进促进雏鸡免疫器官发育,增强机体的细胞免疫。     

左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响

为探讨免疫增强剂左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响,将20只20日龄雏鸡,随机分成A、B、C、D四组,每组5只。分别皮下注射新城疫灭活疫苗0.5ml／羽,同时注射A组雏鸡高(0.6mg)、B组中(0.3mg)、C组低(0.15mg)剂量的左旋咪唑,对照组D不加。免疫后0d、7d、14d、21d和28d,翅下静脉采血并检测新城疫抗体滴度。结果显示：免疫前四组抗体水平基本一致,无统计学意义;免疫后7d,14d,21d,高、中、低三组抗体水平基本一致,四组的抗体水平相差均在2个滴度以内,统计分析无明显差异;免疫后28d,B组抗体水平较高。统计分析显示,对照组与高中低三组均有显著差异,但无剂量差异;在高中低 三组中,以中剂量添加最佳,抗体效价高（7.2log2）,但中剂量组与高、低二组的差异不显著。这表明,左旋咪唑的添加提高新城疫抗体滴度,并且与免疫后时间长短有关系。从趋势看,随着时间的推移,添加组的抗体水平好于对照组。     

表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原表位乳酸菌对实验小鼠免疫功能的影响

为了探讨表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗原表位乳酸乳球菌对小鼠安全性及免疫功能,以口服的方式给实验小鼠免疫重组乳酸菌,观察小鼠的精神状态,采用ELISA试剂盒方法检测免疫指标。结果表明：重组乳酸菌对小鼠的精神状态及体重均无影响,能显著提高小鼠血清中IgG和粪便sIgA的含量。与对照组相比,免疫后1周、2周、5周的血清中IgG的含量差异显著(P<0.05),3周、4周差异极显著(P<0.01),表明能显著提高小鼠体液免疫水平;能显著提高外周血中T淋巴细胞增殖情况,与对照组相比,差异极显著(P<0.01),表明能显著提高小鼠细胞免疫水平。表达TGEV S蛋白抗原表位乳酸菌能显著提高小鼠体液免疫和细胞免疫水平,具有良好的免疫原性,且安全可靠。     

坦布苏病毒囊膜蛋白诱导的小鼠免疫应答

为了研究坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)的免疫原性,利用大肠杆菌表达系统高效表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并对其诱导小鼠免疫应答进行了研究。结果表明,E蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫组小鼠血清中抗体效价均可达1∶51 200以上;同时,E蛋白可显著诱导血清中细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达,免疫组小鼠血清中IL-2、TNF-α的含量均极显著高于对照组(P0.01),IFN-γ含量则显著高于对照组(P0.05);此外,与对照组相比,E蛋白还可极显著刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,上述结果表明,E蛋白免疫后,小鼠机体可产生显著的体液免疫和细胞免疫反应。攻毒保护性试验结果显示,攻毒后,经荧光定量RT-PCR检测,E蛋白免疫组小鼠脑、肝脏、脾脏、卵巢、肾脏中坦布苏病毒载量均显著低于对照组,表明免疫E蛋白可有效抑制坦布苏病毒在小鼠各个组织中的增殖。结果表明,大肠杆菌表达的坦布苏病毒E蛋白可作为坦布苏病毒亚单位疫苗的候选抗原,为进一步预防和控制坦布苏病毒病奠定理论基础。     

不同佐剂对猪传染性胃肠炎病毒S蛋白和猪流行性腹泻病毒S蛋白免疫原性的影响

本研究旨在探究不同佐剂对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白和猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白免疫原性的影响。IPGT诱导重组表达菌株Rosetta(DE3)-pET28a-TGEV-S2/3和BL21(DE3)-pET28a-PEDV-S1/2/3,制备重组蛋白TGEV-S2、TGEV-S3、PEDV-S1、PEDV-S2和PEDV-S3,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,将重组蛋白等量混匀分别与3种佐剂ISA 71VG、ISA 201VG和ISA 15AVG进行乳化制备免疫原免疫蛋鸡;Western blot检测蛋鸡血清抗体效价,免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体与病原的反应活性;监测鸡群平均日增重。结果显示,重组蛋白TGEV-S2、TGEV-S3、PEDV-S1、PEDV-S2和PEDV-S3的分子量依次为25 ku、28 ku、26 ku、24 ku和21 ku。Western blot分析显示,5种蛋白均具有良好的免疫原性;疫苗二次免疫后7天抗体效价达到高峰,ISA 201VG佐剂组、ISA 71VG佐剂和ISA 15AVG佐剂组组最高抗体效价依次为64000倍、32000倍和8000倍,对照组未检测到特异性抗体;ISA 71VG和ISA 201VG组对产蛋率下降相对较大,ISA15AVG 佐剂疫苗免疫组对产蛋率影响相对较小,免疫后7天后试验组产蛋率恢复正常。ISA 71VG佐剂组蛋鸡平均日增重显著降低,ISA 201VG和ISA 15AVG佐剂组蛋鸡平均日增重与对照组无显著差异;ISA 201VG佐剂组血清抗体与病毒反应活性良好,中和效价可达1:256。ISA 201VG佐剂配伍的疫苗免疫效果优于其他两种佐剂疫苗。     

牛磺酸对肉鸡饲粮养分利用率、免疫器官发育及屠宰性能的影响研究

为了探讨牛磺酸对肉鸡饲粮养分利用率、免疫器官发育及屠宰性能的影响。将艾维茵商品代肉鸡450只,随机分成5组,每组设3个重复,每个重复30只。试验1组饲喂基础日粮,试验2、3、4和5组分别在基础日粮中添加0.05%、0.10%、0.15%和0.20%的牛磺酸。试验期42天。结果表明：试验3、4组粗蛋白和粗脂肪的利用率与试验1组差异显著(P<0.05);3周龄时,试验3、4组的脾脏指数与试验1组差异显著(P<0.05)。6周龄时,试验3组的法氏囊指数与试验1组差异显著(P<0.05);试验4组的胸肌率及皮脂厚与试验1组差异显著(P<0.05),试验4、5组的瘦肉率与试验1组差异显著(P<0.05)。在肉鸡饲粮中添加牛磺酸,显著提高肉鸡对营养物质的利用率。能够提高肉鸡的免疫器官指数,增强肉鸡的免疫机能。对肉鸡的屠宰性能有一定改善作用,明显提高肉鸡胸肌率、瘦肉率,显著降低皮脂厚。     

诺维康对肉鸡免疫器官和及血液中T淋巴细胞数量的影响

为进一步了解中药免疫增强剂对动物肌体免疫调节作用,在雏鸡饮水中添加0.1%中药方剂-诺维康,分别检测试验组和对照组中每只鸡的免疫器官指数,以及外周血中T淋巴细胞的数量。结果表明,添加诺维康的试验组中的免疫器官指数和外周血中T淋巴细胞的数量比对照组明显提高（P<0.05）;因此中药免疫增强剂确实可以提高动物肌体免疫能力,这一结果对于商品肉鸡场具有一定的兽医指导意义。