番茄叶片小RNA提取方法的优化

以番茄叶片为材料提取小RNA,比较分析UNlQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒+LiCl法,常规Tr-izol+LiCl法和改进的Trizol法+LiCl法的提取效果。结果表明,改进的Trizol+LiCl法能从番茄叶片中提取高质量的小RNA,总RNA琼脂糖凝胶电泳条带完整清晰,核酸蛋白测定仪显示RNA的浓度为1 026.8ng/μL,A260/A280比值为2.00;A260/A230比值为2.31。15%聚丙烯酰胺-7mol/L尿素凝胶电泳显示小RNA带型区域清晰。用该方法提取的高质量的番茄叶片小RNA符合RT-PCR,Northern blot等分子生物学试验的标准。     

玉米总RNA的小量快速提取

以玉米幼苗的根、茎和叶为材料,采用改良尿素法,分别提取其总RNA。提取的总RNA,经凝胶电泳检测,28SrRNA和18SrRNA带型完整;经紫外分光光度计检测,A260／A280值接近2．0;将RNA反转录合成cDNA,可用于RT-PCR分析。本方法在提取过程中不使用液氮,且提取的玉米总RNA质量好、纯度高。     

杜仲树皮总RNA提取方法的比较

[目的]从杜仲树皮中获得高质量的总RNA。为开展杜仲后续mRNA分离、杜仲抗真菌蛋白基因克隆、及杜仲树皮cDNA文库构建等研究奠定基础。[方法]以杜仲树皮为材料,分别采用改良CTAB-LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法进行总RNA提取,用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,用紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率。[结果]改良CTAB-LiCl法和RNA-pure PlantKit法提取的杜仲树皮总RNA纯度和完整性较高,A260/A280值均在1.800~2.000,28和18 SrRNA条带清晰,RNA得率较高;而RNAiso Plus法提取的杜仲树皮总RNA的纯度和完整性较低,A260/A280值为1.652,28S和18S rRNA条带存在降解和弥散现象,RNA得率低。[结论]改良CTAB-LiCl法和RNApure Plant Kit法抽提获得的杜仲树皮总RNA质量较高,能满足后续RT-PCR和RACE等试验的要求,这为成功克隆杜仲相关基因奠定了基础。关键词杜仲树皮;RNA提取;方法;比较     

番茄叶片总RNA提取方法的比较

番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除,试验比较研究了RNA plant Reagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明,改进的Trizol法能从番茄叶片中提取纯度较高的RNA,凝胶电泳显示条带清晰完整,分光光度计检测A260/A280比值为1.88。用该方法提取的番茄叶片总RNA可以用于逆转录、RT-PCR、Northern blot等分子生物学研究。     

‘鲁红一号’元宝枫叶片总RNA提取方法的比较研究

‘鲁红一号’元宝枫叶片中富含大量多糖、多酚物质,严重影响了总RNA提取的产率和质量。为了找出适宜‘鲁红一号’元宝枫叶片总RNA提取的方法,本试验运用试剂盒法、TRIZOL法和改良CTAB法提取其秋季叶片总RNA。结果表明,试剂盒法提取的叶片总RNA OD260/OD280、OD260/OD230均在1.8以上,但产率一般,有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230均在1.5左右,且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230均在2.0左右,且产率最高,电泳图较清晰。说明采用改良CTAB法提取的叶片总RNA质量和产率高,可以满足分子生物学进一步研究的需求,是‘鲁红一号’元宝枫叶片总RNA提取的适宜方法。     

一种适于cDNA-AFLP分析的茶树叶片总RNA提取方法

茶树富含多糖、多酚,从茶树组织中提取高质量的RNA较为困难,cDNA-AFLP技术对RNA质量要求较高,因而从茶树叶片中提取高质量的RNA是cDNA-AFLP试验正常进行的重要保障。该试验采用改进的CTAB法从茶树叶片中提取总RNA,结果表明:琼脂糖凝胶电泳显示28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,产率高;A260/A280值为2.07,范围为1.8~2.1,DNA和蛋白质污染较少;经逆转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足cDNA-AFLP技术对RNA质量和数量的要求。该方法为应用cDNA-AFLP技术顺利开展茶树分子生物学方面的研究奠定了基础,处理方式简单且成本较低。     

一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法

多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素.我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA.这种方法可以克服产率低和质量低的问题.RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520 μg到800 μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9.提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析（serial analysis of gene expression,SAGE）库的构建.     

栽培燕麦叶片总RNA提取与质量分析

为筛选出适合栽培燕麦叶片RNA提取方法,本试验利用三种方法提取两种栽培燕麦材料的总RNA。研究结果表明,方法一提取的总RNA经非变性琼脂糖凝胶电泳检测,28S和18S条带清晰,28S条带的亮度约是18S条带的2倍。紫外分光光度计分析显示OD260／OD230和OD260／OD280比值约为2．3和1．9,RNA质量较好,产率较高;并且该方法在两种栽培燕麦间的RNA提取效果稳定,使用范围比较广,是提取栽培燕麦总RNA较为理想的方法。     

骆驼蓬总RNA的4种提取方法比较

以骆驼蓬(Peganum harmala L.)为材料,采用植物总RNA提取试剂盒法(TIANGEN)、TRIZOL试剂盒法(TIANGEN)、SDS-异丙醇法、CTAB-LiCl法提取总RNA,比较4种方法提取总RNA的得率和纯度.结果表明:CTAB-LiCl法效果最好,电泳条带清晰,RNA完整性好,28S条带亮度约是18S的2倍,所提RNA的OD260/OD280的值在1.80～2.0之间.经RT-PCR获得了600bp大小的特异条带,说明利用改良的CTAB-LiCl法从骆驼蓬中提取到的RNA质量高、完整性好,完全适合于进一步的分子生物学研究.     

山药叶片总RNA提取方法的比较

[目的]提取高质量的山药叶片总RNA。[方法]以山药叶片为材料,采用异硫氰酸胍法、改良CTAB法提取山药叶片总RNA并进行比较分析,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度。[结果]改良CTAB法提取的总RNA的28S、18SrRNA条带清晰、整齐,测得A260/A280为1.72.0。[结论]改良的CTAB法适合山药叶片总RNA提取。     

白菜总RNA的高效提取方法及常见问题分析

[目的]建立从白菜叶片组织中快速提取高质量RNA的方法,为进行LD—PCR、AnP、SRAP及其他分子生物学试验奠定基础。[方法]通过增加高速离心时间,用3％H2O2处理试验器皿等措施对Trizol试剂法进行优化,建立了一种简单、快捷、经济、高效的RNA提取方法。[结果]在1．5h左右可得到高质量的总RNA,经琼脂糖凝胶电泳、蛋白核酸分析仪检测,提取的总RNA具有清晰的28S、18S、5S3条带,且28S的宽度是18S的2倍左右,0D260／DD280比值为1．90—2．16。进一步以提取的总RNA为模板成功进行了单链cDNA的合成和LD—PCR。[结论]改良的Trizol试剂法所提取的RNA纯度和完整度极高,可用于LD—PCR、SRAP、基因克隆及表达分析等后续分子生物学试验。     

阔叶薰衣草叶片总RNA两种提取法的比较

分别采用TRIzol法和改良的CTAB法提取阔叶薰衣草叶片的RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对其提取效果进行鉴定。实验结果表明：TRIzol法提取的总RNA浓度高,但杂质较多且有部分降解、稳定性差;改良的CTAB法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.909,效果稳定,有良好的可重复性。因此,...     

适用于转录组测序的大豆根总RNA的提取方法研究

[目的]获得高质量、高产量并能满足转录组测序要求的大豆根总RNA。[方法]比较分析了Trizol法、CTAB-Li Cl法和试剂盒法的提取效果。[结果]3种方法均能从大豆根中提取出总RNA。但与Trizol法、CTAB法相比,试剂盒法提取的大豆根总RNA纯度高、完整性好,平均浓度达413.9 ng/μL,A260/A280≈2.14,A260/A230≈2.10,方法可重复性好。[结论]试剂盒法提取的RNA满足转录组测序的质量要求,可进行后续的转录组测序和其他分子生物学相关研究工作。     

一种有效的可口革囊星虫体壁总RNA提取方法

[目的]为从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。[方法]采用Trizol法、改良Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。[结果]改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象；而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。[结论]传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取；改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。     

黑穗醋栗花中RNA提取方法的比较研究

以黑穗醋栗花为试验材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了Trizol法、硼砂-SDS法、CTAB法、植物RNA提取试剂盒等4种方法提取总RNA的质量和纯度。结果表明,利用硼砂-SDS法提取的RNA,28S和18S两条带型清楚,两条带之间无弥散现象,且纯度最高,D260/D280达到2.06,经计算得出总RNA产率达61.60μg·g-1,反转录条件下可得500～1000bp之间的弥散cDNA条带,进一步证明硼砂-SDS法提取得到的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的需要。     

油菜种子高质量总RNA提取的一种有效方法

设计了1种从油菜种子中分离高质量总RNA的方法,有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总RNA经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测,可见28S和18S rRNA的2条清晰的带型,完整无降解,其A260/A280在1.8~2.0之间。研究结果证明,利用本方法提取的油菜种子总RNA具有很高的质量和纯度,且得率高,完全能满足后续的RT-PCR、全长基因的克隆和Northern blotting分析等分子生物学研究。