产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、鉴定及其酶学特性的研究

利用筛选培养基从不同豆制品作坊附近的土样中筛选出一株产α-半乳糖苷酶的菌株D-1,对其进行分子鉴定及所产的α-半乳糖苷酶进行酶学特性研究。研究表明,菌株D-1为Aspergillus niger,此菌株所产α-半乳糖苷酶的最适反应温度是55℃,在60℃以下热稳定性较好;最适反应pH值为5.0,在pH值3.0～5.5范围内稳定性较好,相对酶活>64.1%;Mg2+、Na+、Pb2+、K+、Mn2+、Co2+、Al3+对α-半乳糖苷酶均有不同程度的抑制作用,其中Cu2+和Fe3+的抑制作用较为明显,而Ca2+、EDTA(乙二胺四乙酸)、Zn2+对α-半乳糖苷酶有一定的促进作用。     

饲用α-半乳糖苷酶稳定性及酶学特性的研究

本试验系统研究了通过固态发酵法生产的饲用α-半乳糖苷酶粗酶的稳定性及其酶学特性。结果显示,该酶具有较强的耐酸性能,稳定pH范围在3.5～6.5。酶的最适温度在50～60℃,在70℃以下时基本稳定,酶在干热条件下稳定性比湿热高。α-半乳糖苷酶经过猪胃肠液处理活力下降,但仍能保持活力70%以上。较高浓度(1×10-3mol/L)的各种金属离子均抑制酶活,在低离子浓度(1×10-4mol/L)时,Co2+和Mn2+对酶活力有促进作用,两种浓度的Ag+和Hg2+均强烈抑制酶活。粗酶制剂在常温储存6个月时仍保留原始活力的90.30%,到9个月时有80.58%,可见酶制品在储存条件下稳定。     

耐热性α-半乳糖苷酶突变体的筛选及酶学性质研究北大核心

研究旨在改造株链球菌来源的α-半乳糖苷酶基因Gal_(2)7A,获得耐热性高的突变体。在常规PCR体系中加入不同水平的MnCl_(2),将基因克隆至载体pGAPZαA并成功构建表达酶产物的重组质粒pGAPZαA-Gal_(2)7A。将线性化的重组质粒电转至毕赤酵母GS115,在含有100 g/L博来霉素的YPDS平板上筛选耐热性提高的突变体,通过pNPG的方法测定重组酶的酶学性质为最适温度65℃,最适pH值6.5,Ag^(2+)、Hg^(2+)对重组酶的酶学活性具有明显的抑制作用,Cu^(2+)对重组酶的酶活性具有促进作用。研究表明,试验成功构建耐热α-半乳糖苷酶高效表达菌株29和54,在55℃保温10 min与同等条件下的野生型进行对比,加热前后的保留酶活比的增幅大于45%。     

中性植酸酶的酶学性质研究

采用钒钼酸铵法对中性植酸酶的酶学性质进行了研究,并对酶活的测定条件进行了摸索。研究结果表明,该酶的最适反应温度为48℃;最适反应pH值为6.0;在pH值5.0～6.5之间有较大的活性区间;有较强的耐酸性,在pH值2.0～9.0之间处理1h仍有90%以上的活性;具有很强的耐热性,经湿热试验箱85℃、95%RH处理5min酶活能保存70%左右;Zn2+离子对酶活有一定的抑制作用,Mn2+离子对酶活有一定的激活作用;该酶抵抗胃蛋白酶的能力比较强,抵抗胰蛋白酶的能力较弱;该酶的米氏常数Km=0.563mmol/l,最大反应速度Vmax=6.250μmol/(mg·min)。     

米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果

本试验旨在研究米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果。以NCBI数据库中米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A的mRNA序列(GenBank登录号:XP_001817311.1)为依据,利用PCR扩增得到gal A基因并根据毕赤酵母使用密码子的偏好性优化基因序列,构建野生型和优化型毕赤酵母工程菌株,摇瓶发酵120 h,测定酶学性质。设置25和45℃2个温度,每个温度下各设置0.6、1.2和2.4 U 3个加酶量,用发酵得到的α-半乳糖苷酶酶解10 mL豆浆中的大豆寡糖。结果显示:该α-半乳糖苷酶基因gal A全长1 605 bp,不含内含子,编码534个氨基酸,诱导120 h后优化型工程菌株的α-半乳糖苷酶活性为1.952 U/mL,比野生型工程菌株提高了285%。发酵得到的α-半乳糖苷酶的最适pH为4.33,最适温度为55℃;在pH 3.00～8.00间稳定性良好,在55℃条件下保持40 min后残余α-半乳糖苷酶相对活性为60%;该酶对大部分金属离子具有抗性,但其被MnSO4抑制;以对硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷(p NPG)为底物时的酶动力学参数米氏常数(Km)为0.024 3 mol/L,最大反应速度(Vmax)为1.0×10-7mol/(L·s)。酶解试验结果显示,45℃下加酶量为2.4 U反应12 h后,大豆寡糖中棉籽糖的降解率为50.0%,水苏糖的降解率为31.9%。由此可见,本试验中生产的α-半乳糖苷酶对豆浆中的大豆寡糖有一定的降解作用。     

α-半乳糖苷酶的性质研究

文章主要测定了α-半乳糖苷酶酶活、pH对酶活的影响,以及α-半乳糖苷酶的耐热性、耐酸性。结果表明,α-半乳糖苷酶各方面的性质都较优越,作为饲料添加剂,能起到降解饲料中存在的半乳糖苷等抗营养因子,促进蛋白质的合成,提高瘦肉率;降低豆类原料引发的幼龄动物腹泻;降低动物维持需要量,提高饲料能量效价;减少饲料中抗生素的用量等作用。     

不同条件下木聚糖酶稳定性的研究

本试验研究了木聚糖酶在不同温度、pH值和保存条件下酶活变化情况.结果表明:木聚糖酶整体耐高温性能较好,85℃下相对酶活仍然能保持在70%以上,同时随着处理时间的延长在不同温度下酶活损失也呈增加趋势;偏酸性条件木聚糖酶能保持较高的酶活,碱性条件不利于木聚糖酶的存活;在常温和37℃恒温保存条件下木聚糖酶都具有良好的稳定性.     

产植酸酶菌株的筛选及酶学性质的研究

从100多个自然样品中,分离、筛选出一株高产植酸酶的曲霉(Aspergillus sp.)茵株.在30℃摇瓶发酵4 d时酶活达到6105.5 IU/mL,并对其粗酶液的性质作了研究:该酶作用的最适温度为45 ℃;最适pH为5;该酶在55℃、pH为3～7时,相对酶活大于80%;金属离子Zn2+"、Al3+、Mn2+,Cu2+等对该酶有较强的抑制作用,而Mg2+等则有一定的激活作用.     

中温α-淀粉酶酶学性质的研究

从地衣芽孢杆菌得到的α-淀粉酶的理化性质进行了研究,结果表明:该酶的最适pH是6,pH在5～6.5时酶活比较稳定.最适反应温度是60 ℃,高于75 ℃后,酶活下降很快.Ca2+、Mn2+ 和Mg2+对该酶活力具有较明显的促进作用,乙二胺四乙酸(EDTA)对酶活具有较强的抑制作用.该酶是Ca2+依赖性型淀粉酶,添加0.01 mol/L的Ca2+能明显提高酶活力,添加0.125 mol/L,的Ca2+还能明显提高酶的热稳定性.     

羔羊皱胃酶和微生物凝乳酶部分特性的探讨

探讨了温度、pH值及金属离子(Ca2+、Al3+、Cu2+、Zn2+)等因素对羔羊凝乳酶和微生物凝乳酶凝乳活性的影响。结果表明:羔羊凝乳酶和微生物凝乳酶的最适作用温度分别为70℃和45℃;两种酶在温度分别低于60℃和50℃时,热稳定性较好;二者的最适凝乳pH值均为5,其活性随底物pH增加而下降;Ca2+、Al3+是两种酶的激活剂,Cu2+、Zn2+都是它们的抑制剂。     

多种碱性蛋白酶酶学性质的比较研究

试验旨在探究不同碱性蛋白酶的酶学性质差异,评估多种碱性蛋白酶在不同条件下的酶活性。结果表明,酶D的最适反应温度为50℃,其余为60℃;酶D的耐热性最好;所有酶最适反应pH值均为10.5;酶活性均受到Cu2+的显著抑制,相对酶活低于30%;酶活受化学试剂影响较小;均对胰-胃蛋白酶耐受性较差,相对酶活低于14%;Km值在3.45～33.33之间,νmax值在0.05～1.75 g/min之间。研究表明,不同来源的碱性蛋白酶有不同的酶特性。     

木聚糖酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从实验室保藏的13株菌株中筛选到l株高产木聚糖酶菌株-黑曲霉2107,酶谱检测发现,该茵株产2种木聚糖酶X-1和X-2.X-1和X-2的最适反应温度都为50℃,并在30～50℃都较稳定.X-1的半失活温度50～55℃,X-2的半失活温度为55～60℃.X-1的最适pH约为5,pH 4～10较稳定;X-2的最适pH约为3和4之间,pH 2～5之间较稳定.各种金属离子对2种酶都有不同程度的抑制作用.     

响应面法优化里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶培养条件

本试验采用响应面法对里氏木霉(Trichoderma reesei)固体发酵产α-半乳糖苷酶的培养条件进行了优化。首先根据单因素实验设计Plackett-Burman试验筛选出影响产酶的3个主要因素:玉米芯与甘蔗渣的碳源配比、牛肉膏与硫酸铵的氮源配比和发酵初始pH。在此基础上运用最陡爬坡路径法逼近最大响应值区域,最后利用响应面分析法确定主要因子之间的交互作用及最佳培养条件。结果表明,里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶的优化培养条件为:碳源配比即玉米芯与甘蔗渣比值为3.86,氮源配比即牛肉膏与硫酸铵之比1.17,初始pH为9.12。优化后,里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶的酶活可达到342.98U/g,与模型预测值353.43U/g接近,比优化前的酶活提高113.91%。综上,影响里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶最重要因素分别为碳源、氮源及pH,三者之间相互影响,分别在碳源配比3.86、氮源配比1.17及初始pH 9.12时α-半乳糖苷酶酶活最大。     

黑曲霉生产木聚糖酶固态发酵及粗酶制剂性质的研究

筛选了一株产木聚糖酶活力较高的黑曲霉菌株 ,研究了其固体培养的工艺条件。该菌的最适培养条件为 :起始 pH 4 .8,2 8℃ ,孢子悬液接种量 1 0 % ,玉米秸粉∶麸皮 (6∶4 ) ,培养时间 72h。木聚糖酶活力最高达 2 6 5 0IU/g ,营养盐、pH值及发酵时间对木聚糖酶活力影响较大。该酶的最佳作用条件 :温度 5 0℃、pH 4 .6 ,在不同温度下保温 1h ,测得半失活温度 (t1 / 2 )为 5 2℃。盐析后的酶粉活力为 91 0 5IU/g ,收率 5 0 %。酶对 3种底物降解力依次为麸皮、玉米芯和玉米秸     

微生物酶和小牛皱胃酶凝乳特性的研究

以黑白花奶牛的新鲜奶为原料,研究了微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度、热稳定性、酸度影响、pH稳定性、金属离子及有机溶剂的影响.结果表明微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度分别为65℃和60℃;两种酶在温度分别低于50℃和45℃时,热稳定性较好;二者的活力随酸度增加而上升,并且在pH值为4时其稳定性最好;Ca2+、Fe2+是两种酶的激活剂,Cu2+是二者的抑制剂,Na+、Mg2+对二者无显著影响;丙酮有一定的促凝乳作用.     

温度对鲤鱼复合酶制剂中3种酶活性的影响

试验研究了温度对鲤鱼复合酶制剂中蛋白酶、淀粉酶和β-葡聚糖酶3种酶活性的影响。结果表明,蛋白酶、淀粉酶和β-葡聚糖酶的最适pH分别为3.0、6.0和5.0;粗酶液在4℃时放置72h,3种酶出现活性峰值;在4、25和40℃时保存10、20和30d,复合酶制剂中蛋白酶和淀粉酶的活性随温度的升高和保存时间的延长而降低,酶活损失率分别为1.91%~36.91%和5.17%~19.57%,酶活受温度的影响显著,受时间的影响不显著。相反,β-葡聚糖酶的活性随温度的升高和保存时间的延长而升高,酶活损失率为10.19%~48.46%,酶活受温度及时间的影响显著。在30d内,复合酶制剂中各种酶对低温的稳定性由强至弱依次为淀粉酶>蛋白酶>β-葡聚糖酶;在60、80、100和120℃时处理5、10和15min,蛋白酶和淀粉酶的最大活性分别出现在100和80℃,最大酶活分别为原酶活的78.95%~82.99%和85.72%~91.89%;β-葡聚糖酶的活性随温度的升高和处理时间的延长而降低,最大酶活分别为原酶活的82.45%~90.73%,酶活受温度的影响显著,受时间的影响不显著。在15min内,复合酶制剂中各种酶耐干热高温的稳定性由强至弱依次为淀粉酶>β-葡聚糖酶>蛋白酶。     

饲用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究

木聚糖酶是饲用复合酶制剂中的主要酶种之一,本文对某商品酶制剂中的木聚糖酶进行了酶学性质的研究,这对于木聚糖酶的酶活测定、保存及应用均具有重要的指导意义.实验结果表明:该木聚糖酶的热稳定性良好,最适反应温度为50℃,最适pH为5.0,Km值为4.485 mg/mL,Cu2+、Zn2+、Mn2+和Fe3+对本木聚糖酶有抑制作用,而Na+、K+及(NH4)2SO4能提高此木聚糖酶的活性.     

毕赤酵母产木聚糖酶发酵条件优化及其酶学特性研究

本研究在50 L发酵罐水平上对毕赤酵母产木聚糖酶发酵条件进行优化,并对其酶学特性进行研究。利用单因素试验系统考察了微生物种龄、诱导时机、诱导培养温度和诱导时期p H值对产木聚糖酶的影响。结果表明:在最佳种龄23 h、发酵液细胞湿重121 g/L左右开始诱导,诱导培养温度26℃,诱导时期维持p H值5.6的优化工艺条件下,木聚糖酶酶活可达到47570 U/m L;酶的最适反应p H值为5.0~6.0,且具有较好的耐热性,85℃作用2 min后酶活收率仍可达到87.8%,能够用于饲料高温制粒。     

α-半乳糖苷酶在小猪日粮中的应用效果

144头75日龄小猪随机分成3个处理组,每组设4个重复。1组为对照日粮组;2组别为对照日粮+300g/tα-半乳糖苷酶;3组别为对照日粮+500g/tα-半乳糖苷酶,此外,2组和3组的日粮在配方设计时,将豆粕的代谢能和氨基酸参数分别提高7%和5%,营养水平的计算值与1组相同。2组和3组的日粮配方成本比1组分别低41和25元/t(已扣除酶制剂使用成本)。通过连续40d(75～115日龄)的饲喂,结果表明,在3个组别之间,"增重"和"平均日增重"都没有显著的差异,而对照日粮组的"耗料量"略高于2组和3组。添加500g/tα-半乳糖苷酶的3组,其"料肉比"显著低于对照组;添加α-半乳糖苷酶的2组和3组每千克增重成本分别降低0.15和0.55元。因此,α-半乳糖苷酶在配方中的添加使用可以在不影响动物生长性能的前提下显著降低饲料的配方成本和养殖成本。     

Neosartorya fischeri α-半乳糖苷酶酶学性质的研究

为获得酶学性质优良的α-半乳糖苷酶,研究根据Gen Bank数据库提供的嗜热微生物Neosartorya fischeri的α-半乳糖苷酶的氨基酸序列,经密码子优化合成该酶的编码基因。将合成的基因转化大肠杆菌BL21进行原核表达,获得重组α-半乳糖苷酶,并对酶学性质进行研究。结果显示:以棉籽糖为底物时,酶的最适反应温度为55℃,最适p H 6.0,有较好的热稳定性和酸碱稳定性。Fe2+(铁)、Mn2+(锰)和Ca2+(钙)离子可使酶活性大幅提高,而Cu2+(铜)离子则可强烈抑制酶的活性,Pb2+(铅)、Ba2+(钡)、Al3+(铝)、EDTA(乙二胺四乙酸)和SDS(十二烷基硫酸钠)对酶活也有一定的抑制作用。在模拟胃肠环境时发现该酶有良好的稳定性,肠液对该酶甚至有轻微的激活作用。