| PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 李珣,陈思宇,胡传活,王晓晔.PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定[J].南方农业学报,2016,47(5):726-730. |
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| 作者姓名： | 李珣 陈思宇 胡传活 王晓晔 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院,南宁,530005 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31502079;31402151)，广西自然科学基金项目(2015GXNSFBA139067 |
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| 摘 要： | 目的]构建PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库,为深入研究猪伪狂犬病病毒(PRV)与宿主细胞间的相互作用机制打下基础.方法]提取PK-15细胞总RNA,采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA(ds cDNA),并对其进行均一化和SfiI酶切处理.处理后的ds cDNA分别连接3种阅读框pGADT7-SfiI载体,将连接产物转化至大肠杆菌BH5α构建三框cDNA初级文库,取三框cDNA初级文库进行混合扩增,通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集文库细菌提取文库质粒.结果]3种读码框cDNA文库的库容量分别为3.0× 106、2.0× 106和2.0× 106 CFU,文库实际扩增基数>150万CFU;一号和三号读码框的基因重组率均为100%,二号读码框的基因重组率大于93%.cDNA文库外源基因插入片段长度在500~3000 bp.cDNA文库质粒浓度约1.0 mg/mL,质粒收获量约3.0 mg.结论]构建的PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库具有较高的重组率和库容量,符合酵母双杂交筛选要求,可用于研究PRV与PK-15细胞间的相互作用机制.
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| 关 键 词： | PK-15细胞 酵母双杂交 三框cDNA文库 均一化 猪伪狂犬病病毒(PRV) |
Construction and identification of yeast two-hybrid three-frame cDNA library of PK-15 cells |
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| LI Xun,CHEN Si-yu,HU Chuan-huo,WANG Xiao-ye.Construction and identification of yeast two-hybrid three-frame cDNA library of PK-15 cells[J].Journal of Southern Agriculture,2016,47(5):726-730. |
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| Authors: | LI Xun CHEN Si-yu HU Chuan-huo WANG Xiao-ye |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PK-15 cells yeast two hybrid three-frame cDNA library normalization pseudorabies virus(PRV) |
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