| 烟碱酰胺合成酶基因的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 蔡能,蒋建雄,王志成,陈智勇,储成才,易自力.烟碱酰胺合成酶基因的原核表达及多克隆抗体制备[J].草业学报,2008,17(3):65-70. |
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| 作者姓名： | 蔡能 蒋建雄 王志成 陈智勇 储成才 易自力 |
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| 作者单位： | 湖南农业大学生物科学技术学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学生物科学技术学院,湖南,长沙,410128;长沙理工大学生物与食品工程学院,湖南,长沙,410076;中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京,100101 |
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| 基金项目： | 湖南省自然科学基金
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湖南省教育厅科研项目 |
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| 摘 要： | 以重组克隆质粒p0390-MF-NASHOR1为模板,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出烟碱酰胺合成酶基因(nas)片段并将其克隆到原核表达载体pGEM-KG中,获得重组表达质粒pKG-NAS。将此重组表达载体质粒转化到大肠杆菌DH5α中,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达。聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-poly acrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果显示,烟碱酰胺合成酶基因在大肠杆菌中成功表达,表达的烟碱酰胺合成酶融合蛋白分子量大约为61 kDa。将初步的纯化产物作为免疫原去免疫新西兰大白兔制备兔抗烟碱酰胺合成酶血清,用蛋白免疫印迹法(western blot-ting)对制备的兔抗血清中的多克隆抗体进行了鉴定,显示该抗体具有较好的特异性。烟碱酰胺合成酶基因多克隆抗体的成功制备为检测该基因在草坪草中的表达提供了可靠的手段和技术平台,为进一步阐明该基因的作用机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 烟碱酰胺合成酶 原核表达 多克隆抗体 |
Prokaryotie expression of a NAS gene and preparation of its polyelonal antibody |
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| CAI Neng,JIANG Jian-xiong,WANG Zhi-cheng,CHEN Zhi-yong,CHU Cheng-cai,YI Zi-li.Prokaryotie expression of a NAS gene and preparation of its polyelonal antibody[J].Acta Prataculturae Sinica,2008,17(3):65-70. |
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| Authors: | CAI Neng JIANG Jian-xiong WANG Zhi-cheng CHEN Zhi-yong CHU Cheng-cai YI Zi-li |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | nicotianamine synthase(NAS) prokaryotic expression polyclonal antibody |
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