| 摘 要： | 为制备杆状病毒表达系统表达的番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)VP2蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs),并测定其免疫原性,本研究通过PCR扩增得到MDGPV PT株VP2基因,通过杆状病毒表达系统构建了表达MDGPV VP2的重组杆状病毒MDGPV-rBV。以MOI 5的MDGPV-rBV感染Sf9细胞后,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测结果显示,MDGPV-rBV感染的细胞出现亮绿色荧光;western blot检测VP2蛋白,结果显示在约65 ku处出现特异性条带,表明VP2蛋白正确表达。收集MDGPV-rBV感染的Sf9细胞制备细胞超薄切片样品,同时超速离心富集病毒样品,分别经透射电镜观察,可在细胞核观察到与MDGPV病毒粒子二十面体形态一致的VLPs,直径约20 nm,表明表达的VP2能够组装成VLPs。按常规方法制备VLPs油佐剂疫苗,以42μg/只VLPs经胸部肌肉注射免疫130日龄番鸭,免疫后2至7周每周采血并分离血清,利用GPV胶乳凝集抑制试验(LPAI)和微量中和试验检测免疫番鸭的MDGPV抗体效价,结果显示免疫后抗体效价逐渐升高,至第4周达到峰值,随后平缓下降,免疫番鸭的LPAI效价及中和效价峰值分别为4.9±1.10 log2、7±1.15 log2,以上结果表明构建的MDGPV VLPs具有良好免疫原性。本研究为MDGPV VLPs在疫苗和诊断试剂的开发应用奠定了基础。
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