| 摘 要： | 为了阐明细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因(EGR-03347)生物学功能及其免疫原性,本研究通过分析已发表细粒棘球绦虫原头蚴高通量mRNA测序数据,从中筛选出细粒棘球绦虫脂肪酸代谢主要的调控基因之一—EGR-03347,将其克隆于原核表达载体pET-32a中,构建的重组质粒经诱导、纯化后通过SDS-PAGE及western blot检测。结果显示,重组EGR-03347蛋白(rEGR-03347)以包涵体的形式存在,分子量约47 ku;western blot结果显示,纯化的蛋白可与犬棘球蚴阳性血清特异性结合,具有较好的反应原性。将纯化的rEGR-03347与弗氏佐剂等体积混合并乳化后对小鼠经皮下多点注射(50μg/只),共免疫4次,分别于首免后不同时间采血分离血清,经ELISA检测小鼠血清抗体水平;同时采用qPCR方法检测首免后不同时间小鼠脾细胞因子(IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ)的转录水平。结果显示,随着免疫次数的增加,免疫组小鼠血清抗体水平逐渐升高,且在首免后56 d,即第4次免疫后抗体水平达到峰值,与对照组(PBS及佐剂组)相比差异极显著(p0.01)。qPCR结果显示,rEGR-03347可诱导小鼠产生IFN-γ、IL-4和IL-10细胞因子,其中免疫后14 d～56 d rEGR-03347可致Th1型细胞因子IFN-γ的表达上调,免疫后56 d,可诱导Th 2型细胞因子IL-4和IL-10的表达上调,表明rEGR-03347可诱导小鼠产生Th1和Th2两种类型的免疫反应。综上,本研究首次初步证明细粒棘球绦虫EGR-03347具有作为诊断抗原及疫苗候选抗原的潜力,为后期其诊断方法及疫苗研发提供了参考依据。
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