| 茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测 |
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| 引用本文： | 韩洁云,宛晓春,邓威威.茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测[J].安徽农业大学学报,2018,45(1):1-6,81. |
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| 作者姓名： | 韩洁云 宛晓春 邓威威 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室,合肥,230036;安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室,合肥,230036;安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室,合肥,230036 |
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| 基金项目： | 安徽省自然科学基金，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸(GABA),此过程受谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列(GenBank登录号为KT728367.1)。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1 482 bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44。从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白。体外酶活反应后用薄层色谱法(TLC)分析,经BAW(Butanol:Acetic acid:H_2O,4:1:2)和75%苯酚水溶液(Phenol:H_2O,3:1)2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成。通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性。
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| 关 键 词： | 茶树 谷氨酸脱羧酶 原核表达 TLC 实时荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2017/7/2 0:00:00 |
Prokaryotic expression of the glutamic acid decarboxylase gene (GAD) in Camellia sinensis and rapid determination of its enzyme activity |
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| HAN Jieyun,WAN Xiaochun and DENG Weiwei.Prokaryotic expression of the glutamic acid decarboxylase gene (GAD) in Camellia sinensis and rapid determination of its enzyme activity[J].Journal of Anhui Agricultural University,2018,45(1):1-6,81. |
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| Authors: | HAN Jieyun WAN Xiaochun and DENG Weiwei |
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| Institution: | State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, Anhui Agricultural University, Hefei 230036,State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, Anhui Agricultural University, Hefei 230036 and State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, Anhui Agricultural University, Hefei 230036 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rural revitalization strategy public choice interest coordination incentive compatibility |
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