| 猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定 |
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| 引用本文： | 常艳燕,郑海学,靳野,王光祥,尚佑军,刘湘涛. 猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2009, 40(2) |
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| 作者姓名： | 常艳燕 郑海学 靳野 王光祥 尚佑军 刘湘涛 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,兰州,730046
2. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,兰州,730046;广东省农业科学院兽医研究所,广州,510640 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划，国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmB Ⅰ/Xma Ⅰ、Xma Ⅰ/BamH Ⅰ、BamH Ⅰ/Not Ⅰ、Hpa Ⅰ/Kpn Ⅰ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠ cDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pP1-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定.结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾.其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段.将pPⅠ FMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应.利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒.
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| 关 键 词： | 口蹄疫病毒 全长cDNA克隆 反向遗传学 |
Construction and Identification of the Full-length Genomic cDNA Clone of FMDV China99/S Isolated from Swine |
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| CHANG Yan-yan,ZHENG Hai-xue,JIN Ye,WANG Guang-xiang,SHANG You-jun,LIU Xiang-tao. Construction and Identification of the Full-length Genomic cDNA Clone of FMDV China99/S Isolated from Swine[J]. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences, 2009, 40(2) |
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| Authors: | CHANG Yan-yan ZHENG Hai-xue JIN Ye WANG Guang-xiang SHANG You-jun LIU Xiang-tao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Poly(C) |
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