奶牛圆形、长形、成熟精子细胞微量RNA制备和含量分析

本研究旨在探究奶牛变形精子细胞获取方法、建立稳定奶牛精子RNA提取体系及分析单个生精细胞RNA含量变化。采用激光显微捕获技术结合冰冻切片,采集奶牛圆形、长形精子细胞样品,利用附睾尾精子浮游法获得成熟精子,通过对已报道的小鼠、奶牛及人类精子RNA制备方法的尝试和比较,获得RNeasy Kit最佳奶牛精子RNA制备方法,并用PicoPure RNA Isolation Kit对圆形和长形精子细胞进行RNA制备,筛选去除白细胞、上皮细胞等体细胞污染及基因组DNA污染的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,并对生精细胞RNA含量进行单因素方差分析。结果表明,激光显微切割技术可有效捕获圆形、长形精子细胞;通过RNeasy Kit获得的牛精子RNA纯度高、质量好,单个精子RNA含量为0.023~0.025pg;同时,随精子细胞变形,其RNA含量显著降低,其中圆形精子到成熟精子RNA含量降低75倍。本研究从复杂样品取样、微量RNA细胞转录本制备与检测等方面,为精子发生与变形机理研究提供重要参考。