| 摘 要： | 本研究通过构建和分析小尾寒羊间情期和发情期卵巢组织microRNA(miRNA)表达谱,筛选两个时期差异表达的microRNAs,为研究microRNA调控小尾寒羊繁殖过程提供相应的理论基础。利用活体手术法在发情期(第1天)和间情期(第13天)分别采集一侧卵巢。从卵巢中提取总RNA,利用illumina Hiseq2000测序平台获取RNA数据,对表达谱和差异表达microRNAs进行生物信息学分析。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的microRNAs在小尾寒羊卵巢中表达水平。结果,成功地构建出小尾寒羊间情期和发情期microRNA的表达谱,oar-miR-99a和oar-miR-143分别是间情期和发情期表达量最高的microRNA,并筛选出在两个时期间3个显著差异表达的microRNAs,分别为oar-miR-200a、oar-miR-200b和oar-miR-200c。利用qRT-PCR对随机选择的2个显著差异表达的microRNAs进行验证,其表达水平和RNA-Seq分析结果一致。microRNA表达谱为后续的绵羊卵巢microRNA研究提供更详尽的信息。结合靶基因预测及通路富集分析,推测差异表达的microRNAs是通过代谢和免疫途径调控卵巢周期性活动。
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