草莓镶脉病毒ORF Ⅱ基因的克隆、原核表达与抗血清制备 |
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引用本文: | 蒋磊,邓竹根,谢朝阳,杨友志,李祥宇,丁菲,江彤.草莓镶脉病毒ORF Ⅱ基因的克隆、原核表达与抗血清制备[J].植物病理学报,2013,43(1):20-26. |
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作者姓名: | 蒋磊 邓竹根 谢朝阳 杨友志 李祥宇 丁菲 江彤 |
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作者单位: | 1 安徽农业大学植物保护学院,合肥 230036;2 德州经济开发区东艺园林有限公司,德州 253000 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(30740033);安徽省科技厅自然科学基金资助项目(11040606M68);安徽省教育厅自然科学基金重点项目(KJ2011A120;KJ2012A113) |
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摘 要: | 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus, SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORF Ⅱ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORF Ⅱ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORF Ⅱ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物 ORF Ⅱ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORF Ⅱ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORF Ⅱ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORF Ⅱ基因表达的蛋白。
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关 键 词: | 草莓镶脉病毒 ORF Ⅱ基因 克隆 原核表达 多抗血清 |
收稿时间: | 2012-03-30; |
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