苹果ACO1转录因子MdHB1基因的克隆及其真核表达载体的构建

【目的】通过生物信息学分析，将苹果的一段EST序列初步定性为转录因子MdHB-1基因，对该基因进行克隆和真核表达载体构建，为进一步研究其分子生物学功能奠定基础。【方法】根据番茄LeACO-1转录因子LeHB-1的基因序列，对苹果EST库进行Blast，获得一段EST序列，根据该EST序列设计1对特异性引物，以“皇家嘎啦”苹果花器总RNA为材料，经RT-PCR得到1条长约1 000 bp的cDNA片段，T/A 克隆后进行序列测定及分析。将基因MdHB-1与真核表达载体pPICZA连接，构建真核表达载体pPICZA-MdHB-1，并导入毕赤酵母菌种GS115,通过 PCR鉴定该载体的导入情况。【结果】克隆到苹果MdHB-1基因(GenBank登录号为JQ678788)，其开放阅读框为1 011 bp,编码336个氨基酸。Blastn和Blastp序列比对分析发现，MdHB-1与已登录的其他物种的HB-1基因相似性达50%～60%。该基因编码的氨基酸中存在保守序列HD-Zip结构域，该保守序列与已经报道的番茄LeHB-1、拟南芥AtHB-1的保守序列的同源性均大于85%。重组表达载体PICZA-MdHB-1构建正确并已成功导入酵母基因组中。【结论】成功克隆了苹果转录因子MdHB-1基因全长，并正确构建了其真核表达载体。

Cloning and eukaryotic expression vector construction of transcription factor MdHB1 gene in apple