| 蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建 |
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| 引用本文： | 唐 波,杜 娟,杨力侠. 蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2012, 40(10): 199-206 |
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| 作者姓名： | 唐 波 杜 娟 杨力侠 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 生命科学学院;西北农林科技大学 生命科学学院;西北农林科技大学 生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30870266) |
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| 摘 要： | 【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统，为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA，反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化制备阳性克隆感受态细胞质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Sumo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例，采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统，并连续传代，检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4；含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代，系统的稳定性较好。【结论】获得了成本较低、特异性强、重复性好、稳定性强的可用于制备Sumo化蛋白的原核表达系统。
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| 关 键 词： | Sumo；蛋白质体外修饰；原核表达；Oct4；Sox2 |
| 收稿时间： | 2012-03-10 |
Construction of protein Sumoylation system in prokaryotic cell |
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| TANG Bo,DU Juan,YANG Li-xia,WANG Xiao-hai,WU Hai-bo, WU Yong-yan,GUO Ze-kun. Construction of protein Sumoylation system in prokaryotic cell[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2012, 40(10): 199-206 |
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| Authors: | TANG Bo DU Juan YANG Li-xia WANG Xiao-hai WU Hai-bo WU Yong-yan GUO Ze-kun |
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| Affiliation: | (College of Life Sciences,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sumo in vitro protein modification prokaryotic expression Oct4 Sox2 |
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