基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫效力研究

本试验旨在利用杆状病毒表达系统对基因Ⅶ型新城疫病毒（NDV）F基因进行表达研究。RT-PCR扩增F基因，将其克隆到pFastBac HT A载体中，阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞，PCR鉴定获得阳性克隆，碱裂解法提取阳性质粒，转染Sf9昆虫细胞，获得含F基因的重组杆状病毒质粒，重组病毒感染Sf9细胞72 h后，进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western blotting检测。免疫SPF鸡，间接ELISA测定抗体滴度，攻毒保护试验检测重组F蛋白保护性。结果显示，F蛋白在昆虫细胞中能够特异性表达，该蛋白诱导了高滴度的NDV特异性抗体，具有良好的免疫原性；重组F蛋白免疫组攻击保护率达到90%，明显高于阴性对照组。本研究结果为NDV新型亚单位疫苗的研究奠定了基础。