不对称RT-PCR结合芯片技术鉴别4种禽病的初步研究

本研究结合非对称RT-PCR和基因芯片两种技术，构建可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型和N1、N2神经氨酸酶亚型以及鸡传染性支气管炎病、新城疫病、鸡传染性法氏囊病的基因芯片。分别T／A克隆部分禽流感病毒的M基因，H5、H7、H9亚型HA基因，N1、N2亚型NA基因，鸡传染性支气管炎病毒np基因、新城疫病np基因、鸡传染性法氏囊A基因，并构建重组质粒；以重组质粒为模板，用PCR方法扩增制备探针，纯化后点于氨基修饰的载玻片上，制备基因芯片；常规方法从待检样品中提取RNA，用Cy3标记引物进行RT-PCR，将荧光素引入PCR产物中；并对扩增条件进行优化。研究发现检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交，呈现较强的杂交信号；该方法可以准确进行4种主要禽病的鉴别诊断和禽流感主要流行亚型鉴定，对感染样品和现地样品检测结果与RT．PCR、鸡胚接种有较高一致性，符合率分别为100％和96％。结果显示该方法可用于同步鉴别禽流感、鸡传染性支气管炎、新城疫、鸡传染性法氏囊病，以及现地主要流行的禽流感亚型，是一种有效的新方法。

Development of DNA microarray for detecting four poultry diseases with dissymmetry PCR method