番石榴ISSR-PCR最适反应体系的建立与验证

为更好的将ISSR标记应用于番石榴种质研究，本研究以“维邦2号”番石榴DNA为筛选体系试验材料，采用单因子试验对ISSR反应中Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶浓度、DNA浓度进行了优化。实验结果表明，番石榴20µl最适反应体系为：2.0µl 10×Buffer，1.0mmol/L Mg2+，0.25mmol/L dNTPs，0.8mmol/L引物，0.2U Taq酶，10ng的DNA。利用该反应体系，选用引物UBC810对9份番石榴种质进行PCR反应，再选取“南宁本地番石榴实生2号”DNA作为模板对8条ISSR引物进行PCR反应，对所确立的扩增体系进行验证。结果显示扩增产物条带多态性丰富，且特异性强、重复性好，表明本研究所确定的反应体系适用于番石榴的ISSR分子标记。