| 表达绿色荧光蛋白重组单核细胞增多性李斯特菌的构建 |
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| 引用本文： | 柯春林,宋厚辉,江玲丽,张桂芝,方维焕.表达绿色荧光蛋白重组单核细胞增多性李斯特菌的构建[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2005,31(5):638-644. |
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| 作者姓名： | 柯春林 宋厚辉 江玲丽 张桂芝 方维焕 |
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| 作者单位： | [1]浙江大学动物预防医学研究所、浙江省动物预防医学重点实验室,浙江杭州310029 [2]中国科学院微生物研究所,北京100080 |
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| 摘 要： | 将编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因融合到单核细胞增多性李斯特菌actA基因启动子和信号肽下游,应用同源重组技术构建了含gfp的重组李斯特菌突变株.PCR扩增及其产物的酶切鉴定均证实目的基因gfp融合到李斯特菌基因组中.荧光显微镜下可见重组菌体发绿色荧光.SDS-PAGE电泳和免疫印迹结果显示重组李斯特菌表达的GFP分子量约为28 kD,与预计的分子量大小一致.重组菌对鸡胚和小鼠的毒力以及对体外培养细胞的侵袭力均低于野生型李斯特菌.该重组菌可用于研究李斯特菌的致病机理和食品加工过程中微生物污染控制的指示性细菌.
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| 关 键 词： | 单核细胞增多性李斯特菌 同源重组 绿色荧光蛋白 外源基因表达 |
| 文章编号： | 1008-9209(2005)05-0638-07 |
| 修稿时间： | 2004年11月29 |
Construction of the recombinant Listeria monocytogenes mutant expressing green fluorescent protein |
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| KE Chun-lin,SONG Hou-hui,JIANG Ling-li,ZHANG Gui-zhi,FANG Wei-huan.Construction of the recombinant Listeria monocytogenes mutant expressing green fluorescent protein[J].Journal of Zhejiang University(Agriculture & Life Sciences),2005,31(5):638-644. |
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| Authors: | KE Chun-lin SONG Hou-hui JIANG Ling-li ZHANG Gui-zhi FANG Wei-huan |
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| Institution: | KE Chun-lin1,SONG Hou-hui2,JIANG Ling-li1,ZHANG Gui-zhi1,FANG Wei-huan1 |
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| Abstract: | ArecombinantListeria monocyogenesmutant expressing greenfluorescent protein(GFP) genewas constructed by homologous recombination.The target genegfpwas fused to theactAgene fragmentdownstreamof its promoter and signal sequence.PCRamplification and restriction digestion of the PCRproduct confirmed the insertional fusion.The reporter gene was expressed as shown by fluorescentmicroscopy and SDS-PAGE/western blotting.The recombinant strain exhibited reduced invasiveness tothein vitrocultured cells as well as decreased virulence to the chicken embryos and mice.The strain haspotential applications in microbe-host interaction studies in the medical or veterinary medical fields andinfood microbiological studies. |
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| Keywords: | Listeria monocytogenes homologous recombination green fluorescent protein heterologous gene expression |
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