| 乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立 |
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| 引用本文： | 张 超,董怡衡,岳 苗,等. 乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2023, 51(1): 120-129 |
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| 作者姓名： | 张 超 董怡衡 岳 苗 等 |
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| 作者单位： | 青海大学 省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 青海省科技计划项目(2019-N-106) |
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| 摘 要： | 【目的】建立乐都紫皮大蒜4种病毒的多重RT PCR快速检测方法，为大蒜病毒病病原鉴定、脱毒效果验证等提供技术支撑。【方法】根据乐都紫皮大蒜RNA全长转录组测序结果，分别设计洋葱黄矮病毒（onion yellow dwarf virus，OYDV）、大蒜潜隐病毒（garlic latent virus，GLV）、大蒜D病毒（garlic virus D，GarVD）和大蒜X病毒（garlic virus X，GarVX）4种病毒的外壳蛋白特异性引物，筛选不同引物，优化引物用量、模板用量、退火温度等条件，并进行了多重RT PCR的灵敏度检测和12份引进栽培大蒜种质资源的病毒检测。【结果】通过优化筛选，在一个PCR反应体系中实现了OYDV（1 232 bp）、GLV（831 bp）、GarVD（506 bp）和GarVX（116 bp）4种病毒的多重检测，最优反应条件为退火温度55 ℃，模板用量2.5 μL，混合引物用量1.0 μL。多重RT PCR的灵敏度略低于单一RT-PCR。对引进的12份栽培大蒜资源进行4种病毒的多重RT-PCR检测发现，有5份资源存在4种病毒，4份资源存在2种病毒，3份资源存在1种病毒。对7份资源中经多重PCR未检测到的病毒，使用单一RT-PCR进行检测和验证发现，除1份内蒙古资源（NMG）的1种病毒（GarVX）外，多重RT PCR结果与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】本研究建立的大蒜多重RT-PCR体系可靠性强，可用于大蒜病毒的检测与防控
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| 关 键 词： | 乐都紫皮大蒜；病毒检测；多重RT-PCR；洋葱黄矮病毒；大蒜潜隐病毒；大蒜D病毒；大蒜X病毒 |
| 收稿时间： | 2021-12-31 |
Establishment of a multiplex RT-PCR system for simultaneous detection of four viruses in Ledu purple garlic |
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| ZHANG Chao,DONG Yiheng,YUE Miao,et al. Establishment of a multiplex RT-PCR system for simultaneous detection of four viruses in Ledu purple garlic[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2023, 51(1): 120-129 |
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| Authors: | ZHANG Chao DONG Yiheng YUE Miao et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ledu purple garlic virus detection multiplex RT-PCR onion yellow dwarf virus garlic latent virus garlic virus D garlic virus X |
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