| 家畜布鲁氏菌BP26基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 臧金凤,尚佑军,陈妍,吴锦艳,王光祥,张志东,刘湘涛,孙继国.家畜布鲁氏菌BP26基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J].河北农业大学学报,2016(3). |
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| 作者姓名： | 臧金凤 尚佑军 陈妍 吴锦艳 王光祥 张志东 刘湘涛 孙继国 |
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| 作者单位： | 1. 河北农业大学动物医学院,河北保定071001;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州730046;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州,730046;3. 河北农业大学动物医学院,河北保定,071001 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系(NYCYTX-39)，内蒙古科技重大专项“巴美肉羊产业化技术研究与集成应用” |
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| 摘 要： | 利用原核表达的布鲁氏菌BP26蛋白作为标准抗原蛋白,建立布鲁氏菌病抗体检测方法。本试验从布鲁氏菌S2疫苗株通过PCR扩增获得BP26基因,构建融合表达质粒pET-28a-BP26后并转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达,应用Western blot鉴定表达产物,并以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立布鲁氏菌病抗体ELISA检测方法。结果表明,通过反应条件优化确定抗原的适宜包被浓度为5μg/mL,血清适宜稀释度为1∶20,二抗的适宜工作浓度为1∶20 000;通过敏感性试验结果表明,当血清稀释至1∶1 280时,仍检测为阳性;通过批间、批内重复性试验,变异系数均小于10%,表明本检测方法具有较高的重复性。用该方法对100份临床样本进行检测,并与试管凝集试验(SAT)进行相符性验证,符合率为94%,为布鲁氏菌病临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。
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| 关 键 词： | 布鲁氏菌 BP26蛋白 间接酶联免疫吸附试验 |
Prokaryotic expression of BP26 gene in Brucella and the development of indirect ELISA |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Brucella BP26 protein indirect ELISA |
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