| 小麦Ta-SKP2A克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建 |
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| 引用本文： | 许媛,李铃仙,魏春茹,魏新燕,于秀梅,刘大群. 小麦Ta-SKP2A克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建[J]. 华北农学报, 2016, 0(2): 17-22. DOI: 10.7668/hbnxb.2016.02.004 |
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| 作者姓名： | 许媛 李铃仙 魏春茹 魏新燕 于秀梅 刘大群 |
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| 作者单位： | 1. 河北农业大学 生命科学学院，河北 保定 071001; 河北省植物生理与分子病理学重点实验室，河北 保定 071001;2. 河北农业大学 国家北方山区农业工程技术研究中心,河北 保定,071001;3. 河北农业大学 生命科学学院，河北 保定 071001; 河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心，河北 保定 071001; 河北省植物生理与分子病理学重点实验室，河北 保定 071001;4. 河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心,河北 保定,071001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31301649)；高等学校博士学科点专项科研基金项目(20121302120010) |
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| 摘 要： | SKP2A是调控细胞周期转录因子降解的F-box蛋白。为研究该蛋白在小麦-叶锈菌互作过程的作用,首先克隆获得中国春小麦Ta-SKP2A全长序列,然后将其与pGBKT7载体连接,转入酵母Y187感受态细胞中,构建酵母诱饵表达载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性和自激活效应。结果表明,Ta-SKP2A编码区序列长度为1 146 bp,其ORF区编码一条由382个氨基酸组成的多肽。在ORF区两侧连接酶切位点(EcoRⅠ和Bam HⅠ),并将其与载体pGBKT7连接,成功构建了包含目的基因的诱饵载体pGBKT7-Ta-SKP2A,且含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,其过夜培养物OD6000.8,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性。含重组诱饵质粒的酵母菌株在二缺、三缺及四缺营养缺陷平板上不能生长,表明诱饵质粒的表达产物不能自激活报告基因。成功构建了一个包含Ta-SKP2A的重组诱饵质粒,为深入筛选与其互作的靶蛋白,研究其在小麦-叶锈菌互作体系中的作用机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 小麦 F-box 基因 SKP2A 诱饵载体构建 毒性检测 自激活效应 |
Cloning and Construction of Yeast Two-hybrid Bait Vector of Wheat Ta-SKP2A Gene |
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