| 重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 李文秀,周凤云,毛伟平,潘杨滨,何志娟,徐翀,刘宣宣. 重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达[J]. 江苏农业科学, 2011, 39(2) |
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| 作者姓名： | 李文秀 周凤云 毛伟平 潘杨滨 何志娟 徐翀 刘宣宣 |
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| 作者单位： | 南京师范大学生命科学学院/江苏省分子医学重点实验室,江苏,南京,210046 |
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| 基金项目： | 江苏省教育厅自然科学基金 |
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| 摘 要： | 构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达.根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定.转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白.结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确.IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31ku.这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达.为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础.
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| 关 键 词： | ICOS Jurkat细胞 pET-28a质粒 重叠延伸PCR 原核表达 |
Construction and expression of recombinant extracellular domain of human ICOS in Escherichia coli |
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