| 巨核酸酶I-SceI转基因元件的构建及其在斑马鱼中转基因效率的评估 |
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| 引用本文： | 孙成飞,董浚键,田园园,余嘉欣,叶星.巨核酸酶I-SceI转基因元件的构建及其在斑马鱼中转基因效率的评估[J].上海海洋大学学报,2015,24(5):650-655. |
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| 作者姓名： | 孙成飞 董浚键 田园园 余嘉欣 叶星 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家863 计划项目(2011AA100404); 国家自然科学资金面上项目(31272688). |
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| 摘 要： | 巨核酸酶I-SceI是由酿酒酵母线粒体中的核糖体大亚基上的I型内含子编码的一种核酸内切酶，近年已被应用于转基因研究中。I-SceI介导的转基因大多是将I-SceI蛋白和带有其识别位点的质粒共注射于动物的受精卵，但注射酶蛋白前期处理耗时长且工作量大，直接用I-SceI的mRNA代替蛋白进行注射可更为简捷。本研究应用I-SceI mRNA介导荧光蛋白基因在斑马鱼中的转植，进一步了解其转基因效率。首先设计合成带有巨核酸酶I-SceI编码序列的辅助质粒，pCS2-I-SceI，并分别构建了带有巨核酸酶I-SceI识别位点、EF1α启动子和荧光蛋白基因（eGFP/RFP）编码序列的供体质粒pI-SceI-EF1α-eGFP/RFP。辅助质粒pCS2-I-SceI体外转录成mRNA, 以50ng/μl供体质粒和100ng/μl的I-SceI巨核酸酶mRNA共注射到斑马鱼（Danio ririo）受精卵中，注射后48 h时的斑马鱼eGFP的平均荧光表达率可达75.86%。在斑马鱼的头部、躯干到尾部均可观察到荧光蛋白的表达，且随着胚胎发育，荧光信号逐渐增强。结果表明I-SceI系统在斑马鱼中可介导较高效率的转植，具有在经济鱼类转基因研究中应用的潜力。
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| 关 键 词： | 巨核酸酶 I-SceI 斑马鱼 转基因 |
| 收稿时间： | 2015/2/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 5/8/2015 12:00:00 AM |
Construction of I-SceI transgenic elements and assessment of its transgenic efficiency in zebrafish |
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| SUN Chengfei,DONG Junjian,TIAN Yuanyuan,YU Jiaxin and YE Xing.Construction of I-SceI transgenic elements and assessment of its transgenic efficiency in zebrafish[J].Journal of Shanghai Ocean University,2015,24(5):650-655. |
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| Authors: | SUN Chengfei DONG Junjian TIAN Yuanyuan YU Jiaxin and YE Xing |
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| Institution: | Pearl River Fishery Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Pearl River Fishery Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Pearl River Fishery Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Pearl River Fishery Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Pearl River Fishery Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | meganuclease I-SceI Danio ririo transgene |
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