| 葡萄GLRaV-3和GRSPaV病毒双重PCR方法建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 李升,李玲玉,乔光,龙天文,王嘉福.葡萄GLRaV-3和GRSPaV病毒双重PCR方法建立及初步应用[J].中国南方果树,2019(1):72-77. |
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| 作者姓名： | 李升 李玲玉 乔光 龙天文 王嘉福 |
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| 作者单位： | 贵州大学农业生物工程研究院;贵州大学生命科学学院;铜仁学院 |
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| 基金项目： | 贵州省农业攻关项目(黔科合农NY字(2014)3057号);贵州2015年度千层次创新型人才项目;贵州省2015年度"三区"科技人才项目资助 |
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| 摘 要： | 针对我国西南地区葡萄园中卷叶相关病毒3(grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)和茎痘相关病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)发生普遍的情况,在单一PCR检测的基础上,分别从引物浓度和退火温度对双重PCR体系进行优化,建立了同时检测GLRaV-3和GRSPaV的双重PCR技术。建立的双重PCR反应体系最适退火温度为56.1℃,20μL PCR反应体系中10μmol/L浓度的混合引物最适用量为0.1μL;该方法能够检测出GLRaV-3和GRSPaV的cDNA最低浓度分别为0.99pg/μL和99.43ng/μL,且特异性良好。应用该双重PCR方法检测了来自贵州凯里和遵义地区"南玉""温克""摩尔多瓦"葡萄品种疑似病株样品,GLRaV-3检出率为100%,部分样品检出GRSPaV。通过核苷酸序列克隆测序和对比发现,贵州检测出的GLRaV-3与美国分离株(AJ748523)相似度最高,为99.82%;贵州检测出的GRSPaV与巴西分离株(KT008370)相似度最高,为99.08%。
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| 关 键 词： | 葡萄卷叶相关病毒3 葡萄茎痘相关病毒 多重PCR |
Establishment of Duplex PCR for GLRaV-3 and GRSPaV of Grape and Its Preliminary Application |
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| LI Sheng,LI Lingyu,QIAO Guang,LONG Tianwen,WANG Jiafu.Establishment of Duplex PCR for GLRaV-3 and GRSPaV of Grape and Its Preliminary Application[J].South China Fruits,2019(1):72-77. |
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| Authors: | LI Sheng LI Lingyu QIAO Guang LONG Tianwen WANG Jiafu |
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| Abstract: | LI Sheng;LI Lingyu;QIAO Guang;LONG Tianwen;WANG Jiafu |
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