草莓镶脉病毒ORF Ⅵ基因的原核表达与抗血清制备

为了分析草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus，SVBV）ORF Ⅵ基因的功能，采用原核表达技术获得该基因表达的重组蛋白并制备其抗血清。利用PCR技术扩增得到SVBV中国分离物的ORF Ⅵ基因，将此基因克隆到原核表达载体pET-SUMO上，获得重组质粒pET-SUMO-ORF Ⅵ。转化大肠杆菌BL21（DE3）后，经IPTG诱导与Ni²⁺-NTA亲和柱纯化，获得分子质量约为90 kD的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清，采用间接ELISA和Western blot方法测定抗血清的效价、反应灵敏度以及ORF Ⅵ基因在本氏烟中的瞬时表达。结果显示，间接ELISA法测定抗血清对重组蛋白的效价达1：256 000，Western blot法能够检测到稀释64 000倍的重组蛋白。利用稀释2 000倍的抗血清，仍能够检测出SVBV中国分离物和美国分离物ORF Ⅵ基因在本氏烟中瞬时表达的蛋白。