| 药用菊花SSR-PCR反应体系优化及引物筛选 |
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| 作者姓名： | 何仁锋 冯尚国 陈喆 沈晓霞 沈宇峰 王志安 王慧中 |
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| 作者单位： | 杭州师范大学生命与环境科学学院,浙江省药用植物种质改良和质量监控重点实验室;浙江省中药研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31070298;30870180);浙江省科技计划项目(2008C12081);浙江省自然科学基金项目(LQ13H280006);浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室项目(201304,2011E10015);国家科技支撑计划杭白菊规范化种植及综合利用研究(2011BAI04B02);浙江省中药材农业新品种选育重大科技专项(2012C12912);杭州师范大学研究生创新基金优秀硕士学位论文培育项目;浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划(ZX13005002067)共同资助 |
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| 摘 要： | 为进一步开发利用药用菊花种质资源和开展分子标记辅助选择育种,本研究利用L25(56)正交设计对影响药用菊花SSR-PCR反应的模板DNA、Mg2+、d NTPs、Taq酶、引物等5个因素进行优化,并对SSR引物进行筛选。结果建立了药用菊花SSR-PCR最佳反应体系(20μL):模板DNA 60 ng,正、反向引物0.25μmol/L,d NTPs 0.3 mmol/L,Mg2+3.0 mmol/L,Taq酶1.5 U。运用优化后的反应体系,从136对引物中成功筛选出了扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物57对,大多数条带大小集中在100~500 bp,不同引物扩增的条带数为5~15条。优化的SSR-PCR反应体系在多个药用菊花品种遗传多样性研究中得到了验证,获得了稳定性、重复性良好和多态性丰富的扩增图谱。该体系的建立可为今后利用SSR标记对药用菊花种质鉴定、遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供了依据。
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| 关 键 词： | 药用植物 菊花 正交设计 SSR-PCR 体系优化 引物筛选 |
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