| 非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 荣明轩,徐保娟,南文龙,范根成,李国攀,王席,陈清清,胡基雄,李欢,谢明,张志翔,荣俊.非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用[J].中国动物检疫,2021,38(5):109-118. |
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| 作者姓名： | 荣明轩 徐保娟 南文龙 范根成 李国攀 王席 陈清清 胡基雄 李欢 谢明 张志翔 荣俊 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2018YFC0840401） |
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| 摘 要： | 为建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA(iELISA)方法,对构建的ASFV P30基因表达工程菌诱导表达后,将获取的重组ASFV P30蛋白进行纯化和Western-blot检测,然后以纯化的重组蛋白为抗原,建立了ASFV抗体iELISA检测方法,并进行了特异性、灵敏性、重复性试验;同时与基于ASFV P30-2His6蛋白(N、C末端各融合1个His6标签)的iELISA方法进行兽医临床样本比较试验。结果显示:重组ASFV P30蛋白和重组ASFV P30-2His6蛋白在Western-blot检测中,均能与猪ASFV阳性血清产生特异性杂交带;基于重组ASFV P30蛋白iELISA的最佳反应条件为,抗原蛋白包被质量浓度20μg/mL、血清样品稀释度1:1 000、酶标二抗稀释度1:40 000、血清样品检测OD450阳性结果临界值0.22。该方法仅对ASFV阳性血清呈特异性反应,1:3 200稀释的阳性血清仍可检出,批内试验和批间试验变异系数均小于10%,可以消除His标签所造成的假阳性反应。本研究建立的ASFV P30 iELISA检测方法为ASFV抗体检测提供了一种有效手段。
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 原核表达 P30蛋白 间接ELISA 组氨酸标签 抗体检测 |
Establishment and Application of the iELISA for Detection of Antibodies against ASFV |
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| Rong Mingxuan,Xu Baojuan,Nan Wenlong,Fan Gencheng,Li Guopan,Wang Xi,Chen Qingqing,Hu Jixiong,Li Huan,Xie Ming,Zhang Zhixiang,Rong Jun.Establishment and Application of the iELISA for Detection of Antibodies against ASFV[J].China Journal Of Animal Quarantine,2021,38(5):109-118. |
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| Authors: | Rong Mingxuan Xu Baojuan Nan Wenlong Fan Gencheng Li Guopan Wang Xi Chen Qingqing Hu Jixiong Li Huan Xie Ming Zhang Zhixiang Rong Jun |
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