| 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列的构建 |
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| 引用本文： | 肖驰,曹三杰,文田.猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列的构建[J].中国兽医学报,2007,27(1):6-12. |
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| 作者姓名： | 肖驰 曹三杰 文田 |
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| 作者单位： | 四川农业大学,基因芯片实验室,四川,雅安,625014 |
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| 基金项目： | 教育部长江学者和创新团队发展计划 |
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| 摘 要： | 为构建猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）诊断DNA微阵列，应用RT—PCR从猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）C14—2分离株和欧洲型弱毒疫苗株VP046扩增并克隆获得戋洲型重组质粒C14P9（基因号：AY775132）、PRRS—PS9（基因号：AY775134）、Ulb（基因号：AY775135）、Y11（基因号：AY775133）、Y12（基因号：AY775136）和欧洲型基因重组质粒E6和E8。PCR法制备的靶基因和探针纯化后，质量浓度分别为300～600mg／L和200-400mg／L。芯片杂交动力学研究表明，杂堑信号强度随靶基因和探针浓度的增加而增强，最佳靶基因质量浓度为200mg／L，探针适宜范围为3～3000μg／L，系统灵敏性为3μg／L。靶基因杂交特异性研究表明，除个别靶基因在某一温度下存在交叉反应和杂交信号弱外，大多数靶基因在40～56℃下杂交信号强。采用AY775133、AY775134、E6和E8靶基因构建PRRS诊断DNA微阵列在40℃下预杂交1h、48℃湿盒避光杂交6h后经洗涤和扫读分析，杂交信号强、斑点明显、特异性高，按SNR≥1．5为标准能够区分PRRSV蔓洲型和欧洲型。应用PRRS诊断DNA微阵列检测了AMERVAC-PRRS、PRRSV弱毒疫苗、C14—2株、SCU株和临床样本，能正确区分PRRSV基因型。研究结果表明构建的PRRS诊断DNA微阵列可用于PRRS临床诊断和基因分型。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 DNA微阵列 克隆 |
| 文章编号： | 1005-4545（2007）01-0006-07 |
| 修稿时间： | 2005-04-22 |
Development of PRRS diagnostic DNA microarray |
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| XIAO Chi,CAO San-jie,WEN Xin-tian.Development of PRRS diagnostic DNA microarray[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2007,27(1):6-12. |
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| Authors: | XIAO Chi CAO San-jie WEN Xin-tian |
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| Institution: | Laboratory of Microarray ,Sichuan Agricultural University, Yaan ,Sichuan 625014, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PRRSV mieroarray clone |
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