基于密码子优化策略的牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)的原核表达及纯化 |
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引用本文: | 卢春霞,刘长彬,石国庆,杨华.基于密码子优化策略的牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)的原核表达及纯化[J].江苏农业学报,2020,36(1):122-129. |
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作者姓名: | 卢春霞 刘长彬 石国庆 杨华 |
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作者单位: | 长江师范学院现代农业与生物工程学院,重庆 408100;石河子大学动物科技学院,新疆 石河子 832003;新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆 石河子 83200;新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆 石河子 83200 |
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摘 要: | 为了构建pET30a-bPAG9重组表达载体,并在BL21(DE3)感受态细胞中转染高效表达牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9),通过生物信息学技术对bPAG9基因进行密码子优化,人工合成bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体pET30a中。将构建的重组质粒pET30a-bPAG9转染至BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,经过超声波裂解和亲和层析方法获得重组蛋白bPAG9。用SDS-PAGE和Western Blot方法检测重组蛋白bPAG9的表达效果。结果显示,PCR扩增得到1 128 bp的优化bPAG9基因片段,构建的重组质粒pET30a-bPAG9经双酶切获得约5 244 bp和1 125 bp的2条片段,与预期值相符;对重组载体测序,测序结果与优化后的基因碱基序列完全一致,编码的氨基酸序列未发生突变;SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果显示,获得相对分子质量约为4.0×10~4的bPAG9重组蛋白,通过亲和层析纯化后,重组蛋白bPAG9纯度到达90%以上。
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关 键 词: | 牛妊娠相关糖蛋白 密码子 重组蛋白 原核表达 |
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