一种准确、简便测定CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法 |
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引用本文: | 朱丽颖,郑月萍,徐雪珍,段芊芊,韩妮莎.一种准确、简便测定CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法[J].江苏农业学报,2020,36(2):299-305. |
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作者姓名: | 朱丽颖 郑月萍 徐雪珍 段芊芊 韩妮莎 |
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作者单位: | 浙江农林大学农业与食品科学学院,浙江 杭州 311300;浙江农林大学林业与生物技术学院,浙江 杭州 311300 |
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基金项目: | 国家转基因生物新品种培育重大专项 |
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摘 要: | CRISPR/Cas9基因编辑技术是近年来发展迅速的一项基因定点编辑技术,但对特定CRISPR/Cas9基因编辑技术的编辑效率进行有效评估的方法仍十分匮乏,本研究的目的是建立一种准确、简便测定CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法。在我们的方法中,将与种子专一表达启动子(2S3)连接的mCherry荧光蛋白报告基因作为选择基因,并以编码脂肪酸脱氢酶FAD2的基因为靶序列;然后对经CRISPR/Cas9编辑的拟南芥种子进行脂肪酸组分分析,根据其组分变化计算该方法的编辑效率。结果显示,利用mCherry荧光蛋白报告基因的种子专一表达特性,可简便快速地筛选阳性的初级转化子和后代的无转基因突变子;而种子油脂分析法能快速、准确地鉴定CRISPR/Cas9编辑的突变体,可以精确地检测出核酸长度小至单个碱基对的突变,用该方法获得的CRISPR/Cas9基因编辑效率(54.5%~74.1%)远高于基于聚丙烯酰氨凝胶电泳法获得的编辑效率(3.7%~15.4%)。说明,该方法检测CRISPR/Cas9基因编辑效率的高效性与可行性。
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关 键 词: | CRISPR/Cas9 基因编辑 突变体筛选 脂肪酸组分分析 |
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